131I治療前后Graves病患者CXCL10、CCL22水平表達變化的研究

譚淑君，李春北，李 銘

(1.攀枝花市第二人民醫院內分泌科，四川 攀枝花 617068；2.攀枝花市中心醫院內分泌科，四川 攀枝花 617067；3.衛生部北京醫院內分泌科實驗室，北京 100730)

131I治療前后Graves病患者CXCL10、CCL22水平表達變化的研究

譚淑君1，李春北2，李 銘3

(1.攀枝花市第二人民醫院內分泌科，四川 攀枝花 617068；2.攀枝花市中心醫院內分泌科，四川 攀枝花 617067；3.衛生部北京醫院內分泌科實驗室，北京 100730)

目的觀察131I治療前后Graves病患者CXCL10和CCL22水平表達的變化，為Graves病的臨床治療提供新的思路。方法收集內分泌科2012年6月至2013年6月收治的Graves病患者46例(Graves病組)，另取同期我院體檢中心檢查的健康者40例作為對照(對照組)。CXCL10和CCL22表達的測定使用ELISA法，Th1和Th2細胞比例使用流式細胞儀檢測。結果對照組CXCL10和CCL22的表達水平分別為(16.8±6.3)ng/L和(150.4±22.6)ng/L，顯著低于Graves病組治療前的(62.4±13.2)ng/L和(161.3±25.4)ng/L(P＜0.05，P＜0.01)，131I治療后CXCL10和CCL22的表達水平均顯著減低(P＜0.05，P＜0.01)，但CXCL10仍高于對照組(P＜0.05)，而CCL22與對照組之間差異無統計學意義(P＞0.05)。兩組之間CXCL10/CCL22比值差異也有統計學意義(P＜0.05)。正常對照組Th1和Th2細胞比例分別為(1.04±0.41)%和(2.28±0.67)%，顯著低于Graves病組治療前的(8.16±1.62)%和(2.82±0.73)%(P＜0.05，P＜0.01)，131I治療后Th1和Th2細胞比例均出現了顯著的減低(P＜0.05，P＜0.01)，但Th1細胞仍高于對照組(P＜0.05)，而Th2細胞與對照組之間差異無統計學意義(P＞0.05)。兩組之間Th1/Th2比值差異也有統計學意義(P＜0.05)。結論Graves病患者中存在CXCL10和CCL22表達水平的升高，131I治療后可降低CXCL10和CCL22表達水平，調節Th1/Th2細胞的失衡，CXCL10和CCL22因子的檢測有可能作為131I治療反應性的一個指標。

Graves??；CXCL10；CCL22；131I治療

Graves病(Graves'disease，GD)是一種伴甲狀腺激素(TH)分泌增多的器官特異性自身免疫疾病，表現為甲狀腺腫大，可放大至兩倍或更多，甲狀腺的功能也變得過度活躍，產生心跳加快、肌肉無力、睡眠不安、煩躁等甲亢癥狀[1]。放射性131I治療是Graves病的一種常見治療方法，進入血中的131I積聚在甲狀腺，釋放的β和γ輻射對甲狀腺濾泡上皮細胞產生破壞作用，使甲狀腺體積減小，甲狀腺功能恢復正常，而起到治療效果[2]。CXCL10和CCL22是新發現的與Th1和Th2細胞激活、局部聚集的趨化調節因子[3-4]，Th1和Th2細胞平衡的紊亂在Graves病發生、發展中的作用已被大多數實驗所證實，因此本研究觀察了131I治療前后Graves病患者CXCL10和CCL22水平表達的變化，為131I治療后臨床治療的判斷提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集內分泌科2012年6月至2013年6月收治的Graves病患者46例，其中男性16例，女性30例；年齡20～68歲，平均(44.7±12.5)歲。Graves病的診斷參照2008年《中國甲狀腺疾病診治指南》中的標準[5]。排除標準：以前使用過藥物等其他方法治療的患者；浸潤性突眼患者；患有嚴重心、肝、肺等重要臟器功能不全；單發結節患者；惡性腫瘤；妊娠、哺乳期患者；其他自身免疫性疾病。另取同期我院體檢中心檢查的健康者40例作為對照，其中男性14例，女性26例；年齡21～70歲，平均(43.8±12.4)歲。兩組患者在性別、年齡等一般臨床資料方面比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。131I劑量(uCi)= 70～100 uCi×甲狀腺重量(g)/甲狀腺最高吸131I率。

1.2 試劑和儀器 CXCL10和CCL22檢測試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司，FITC-CD4、PE-IFN-γ、APC-IL-4流式抗體以及相應的同型對照為美國RD公司產品，淋巴細胞分離液購自天津灝洋生物制品科技有限責任公司，全自動生化分析儀為日立HICTHI-7080；FACSC alibur流式細胞儀為美國B-D公司產品。

1.3 血清CXCL10和CCL22表達的測定 取所有受試者外周靜脈血，1 500×g離心15 min，分離上清待測。血清CXCL10和CCL22表達的測定使用ELISA法，嚴格按照試劑盒說明書操作，使用標準品繪制標準曲線，然后對照標準曲線計算CXCL10和CCL22的表達水平。

1.4 Th1和Th2細胞的流式細胞儀檢測 取患者外周靜脈血，淋巴細胞的分離使用Ficoll分層液利用密度梯度離心分離法，Ficoll分層液加入到血液中，1 500×g離心20 min，血漿層和分離液交界處即為單個核細胞層，吸出單個核細胞層，調整細胞濃度為106個細胞/ml，按照試劑盒說明書加入。FITC-CD4、PE-IFN-γ、APC-IL-4流式抗體以及相應的同型對照，避光染色30 min，同型對照各個通道調零，前向和側向散色光設門取出細胞碎片，FL1和FL2雙通道設門圈住CD4和IFN-γ雙陽性的Th1細胞，FL1和FL3雙通道設門圈住CD4和IL-4雙陽性的Th2細胞。

1.5 統計學方法 應用SPSS12.0統計軟件處理數據，連續性資料以均數±標準差()表示，兩樣本均數比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1131I治療前后Graves病患者 CXCL10、CCL22表達水平的變化 正常對照組CXCL10和CCL22的表達水平顯著低于Graves病組治療前(P＜0.05，P＜0.01)，131I治療后CXCL10和CCL22的表達水平均顯著減低(P＜0.05，P＜0.01)，但CXCL10仍高于對照組(P＜0.05)，而CCL22與對照組之間差異無統計學意義(P＞0.05)。CXCL10/CCL22比值在兩組之間差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組CXCL10、CCL22表達水平的比較()

表1 兩組CXCL10、CCL22表達水平的比較()

注：與對照組比較，aP＜0.05；bP＜0.01；與治療前比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

對照組Graves病組治療前治療后40 46 16.8±6.3150.4±22.60.12±0.03 161.3±25.4a152.6±24.4c62.4±13.2b25.7±8.5ad0.36±0.08b0.16±0.04ad

2.2131I治療前后Graves病患者Th1和Th2細胞比例的變化 正常對照組Th1和Th2細胞比例顯著低于Graves病組治療前(P＜0.05，P＜0.01)，131I治療后Th1和Th2細胞比例均顯著減低(P＜0.05，P＜0.01)，但Th1細胞仍高于對照組(P＜0.05)，而Th2細胞與對照組之間差異無統計學意義(P＞0.05)。Th1/Th2比值在三組之間差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2和圖1。

表2 兩組Th1和Th2細胞比例的比較()

表2 兩組Th1和Th2細胞比例的比較()

注：與對照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與治療前比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

對照組Graves病組治療前治療后40 46 1.04±0.412.28±0.670.42±0.07 8.16±1.62b2.53±0.84bd2.82±0.73a2.32±0.74c2.81±0.26b1.06±0.14bd

圖1 Th1和Th2細胞的流式細胞儀檢測

3 討論

Graves病的發病原因比較復雜，甲狀腺彌漫性腫大，濾泡細胞增生，并有淋巴細胞浸潤是其基本的病理特點，機體免疫細胞產生針對促甲狀腺激素(TSH)受體的甲狀腺刺激抗體，誘導了甲狀腺功能亢進的產生[6]。放射性碘131I治療Graves病的療效較為確切，其臨床有效率可以到達90%以上，一般患者在3～4個月后甲狀腺功能可恢復正常，但其主要的不利影響就是遠期甲狀腺功能低下的發生，一般一年后甲減發生率變動在5%～10%，以后逐年增加，10年后可達50%以上，甚至有達到80%的報道[7]。甲減發生后雖然可用甲狀腺激素替代治療，但長期的服藥必然會影響患者的正常生活、工作，因此選擇131I治療就要首先權衡甲亢與甲減的利弊關系。

CXCL10屬于ELR-CXC亞家族趨化因子，與其趨化因子(趨序)受體3結合后激活G蛋白發揮其功能，可以趨化Th1輔助細胞的局部聚集，已有研究顯示CXCL10可由甲狀腺細胞分泌。本研究也觀察到了Graves病患者CXCL10和Th1細胞比例顯著高于健康對照組，升高的CXCL10可以激活并募集Th1細胞，Th1細胞又可以分泌IFN-γ和IL-12等細胞因子參與到細胞免疫中來[8]。131I治療1個月后檢測發現CXCL10和Th1細胞出現了顯著的減低，這可能是131I治療起效的一個可能機制。研究顯示機體內存在著Th1/Th2細胞的平衡，Th1細胞增加機會誘發Th2細胞升高，來抗衡Th1細胞的免疫增強效應[9]，CCL22就是一個Th2細胞的刺激和招募因子，本研究也觀察到了CCL22和Th2細胞的反應性升高，但升高的CCL22和Th2細胞并沒有拮抗Th1細胞的作用，反應在CXCL10/CCL22比值和Th1/Th2比值仍然高于對照組。上述結果說明了131I治療是通過調節Th1/Th2細胞的平衡來發揮作用的。

綜上所述，本研究顯示Graves病患者中存在CXCL10和CCL22表達水平的升高，131I治療后可降低CXCL10和CCL22表達水平，調節Th1/Th2細胞的失衡，CXCL10和CCL22因子的檢測有可能作為131I治療反應性的一個指標，同時也可以為Graves病的治療提供一個新思路。

[1]Orsini F,Traino AC,Grosso M,et al.Personalization of radioiodine treatment for Graves'disease:a prospective,randomized study with a novel method for calculating the optimal131I-iodide activity based on target reduction of thyroid mass[J].Q J Nucl Med Mol Imaging, 2012,56(6):496-502.

[2]劉少正,張 青.Graves甲亢131I治療后甲狀腺功能減退的因子分析[J].江西醫藥,2013,48(1):85-89.

[3]李衛鵬,申 勇,胡永全,等.血清CXCL10在131I治療Graves病中的測定意義[J].放射免疫學雜志,2013,26(3):304-306.

[4] Santulli-Marotto S,Fisher J,Petley T,et al.Surrogate antibodies that specifically bind and neutralize CCL17 but not CCL22[J]. MonoclonAntib Immunodiagn Immunother,2013,32(3):162-171.

[5]李亞范,趙 蕾,韋智曉,等.影響131I治療Graves病療效的多因素分析[J].廣西醫科大學學報,2012,34(6):702-704.

[6]Lewis A,Atkinson B,Bell P,et al.Outcome of131I therapy in hyperthyroidism using a 550MBq fixed dose regimen[J].Ulster Med J, 2013,82(2):85-88.

[7]馬學芹,于世鵬.初發Graves病患者131I治療前后IL-23/Th17軸相關因子水平的變化及意義[J].中國免疫學雜志,2013,7(29):733-735.

[8]Mysliwiec J,Palyga I,Kosciuszko M,et al.Circulating CXCL9 and CXCL10 as markers of activity of Graves'orbitopathy during treatment with corticosteroids and teleradiotherapy[J].Horm Metab Res,2012,44(13):957-961.

[9]Ahmadi Z,Arababadi MK,Hassanshahi G.CXCL10 activities,biological structure,and source along with its significant role played in pathophysiology of type I diabetes mellitus[J].Inflammation,2013, 36(2):364-371.

Changes of CXCL10 and CCL22 in patients with Graves'disease after radioactive iodine therapy.

TAN Shu-jun1,LI Chun-bei2,LI Ming3.
1.Department of Endocrinology,the Second People's Hospital of Panzhihua,Panzhihua 617068, Sichuan,CHINA;2.Department of Endocrinology,Panzhihua Central Hospital of Sichuan Province,Panzhihua 617067, Sichuan,CHINA;3.Laboratory of Endocrinology,Beijing Hospital,Beijing 100730,CHINA

ObjectiveTo detect the changes of CXCL10 and CCL22 in patients with Graves'disease(GD) after radioactive iodine therapy.MethodsForty-six patients with GD were enrolled into our study(GD group).Another 40 healthy people were used as normal controls(control group).CXCL10 and CCL22 were detected by ELIAS.Th1 and Th2 cells was detected by flow cytometry.ResultsThe expression levels of CXCL10 and CCL22 was(16.8±6.3)ng/L and(150.4±22.6)ng/L in control group,(62.4±13.2)ng/L and(161.3±25.4)ng/L in GD group (P＜0.05,P＜0.01).After131I therapy,the expression levels of CXCL10 and CCL22 was significantly reduced(P＜0.05, P＜0.01),but CXCL10 was still higher than that in control group(P＜0.05).There were also significant differences of CXCL10/CCL22 ratio between the two groups(P＜0.05).The ratio of Th1 and Th2 cells were(1.04±0.41)%and (2.28±0.67)%in control group,which was significantly lower than(8.16±1.62)%and(2.82±0.73)%in GD group (P＜0.05,P＜0.01).After131I therapy,the ratio of Th1 and Th2 cells were significantly reduced(P＜0.05,P＜0.01),but the ratio of Th1 cells were still higher than that in control group(P＜0.05).There were also significant differences of Th1/Th2 ratio between the two groups(P＜0.05).Conclusion Increased expression of CXCL10 and CCL22 is found in Graves'disease.131I therapy can reduce the expression levels of CXCL10 and CCL22,which regulates the imbalance of Th1/Th2.Detection of CXCL10 and CCL22 may be used as the indicator of response to131I treatment.

Graves'disease;CXCL10;CCL22;131I therapy

R593

A

1003—6350（2014）14—2102—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.14.0814

2014-01-11)

譚淑君。E-mail：tashjus@163.com