乳腺癌組織PTEN表達與血清Pleiotrophin水平的相關性研究

傅春玲，徐金明，張世瓊，劉定榮，周 琪，李 偉，涂 偉

(重慶市涪陵中心醫院病理科，重慶 408000)

·臨床病理·

乳腺癌組織PTEN表達與血清Pleiotrophin水平的相關性研究

傅春玲，徐金明，張世瓊，劉定榮，周 琪，李 偉，涂 偉

(重慶市涪陵中心醫院病理科，重慶 408000)

目的探討乳腺癌組織中PTEN蛋白表達與血清多效生長因子(Pleiotrophin,PTN)水平的關系。方法采用免疫組化檢測52例乳腺癌組織中PTEN蛋白表達，采用特異性酶聯免疫吸附實驗檢測該組患者術前血清PTN水平。結果PTEN陰性組36例，血清PTN平均值(566.34+464.51)pg/ml；PTEN陽性組16例，血清PTN平均值(408.68+170.77)pg/ml。兩組比較血清PTN平均水平差異無統計學意義。結論乳腺癌的發生發展是一個復雜的過程，在乳腺癌的發生發展中PTEN和PTN或許是相互獨立的因素，它們之間的關系還需要更多的證據來證明。

乳腺癌；磷酸酶及張力蛋白同源物；多效生長因子

乳腺癌細胞的增殖和侵襲轉移是一個極其復雜的多步驟動態過程，所有過程都需要通過激活相應的細胞內信號轉導途徑來實現。10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物(Phosphase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN)是一種抑癌基因，在多種腫瘤中存在缺失或突變，通過負調控PI3K/ AKT通路參與細胞的增殖、凋亡、分化與遷移[1-3]。多效生長因子(Pleiotrophin，PTN)是一種可同肝素結合的分泌性生長、分化因子，具有刺激細胞增殖與遷移、促進血管生成、促進神經系統及骨發育等功能，其功能同PTEN基因敲除小鼠的表型有相符之處[4]。在本項研究中，我們通過免疫組化和ELISA試驗分別檢測乳腺癌組織中PTEN蛋白表達和患者術前血清PTN水平，揭示兩者的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2010-2012年在我院就診的乳腺癌患者術前血清標本52份，分離血清后置-80℃保存。術后收集患者匹配的組織標本52份，所有標本均經常規10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋切片。患者年齡38～78歲，中位年齡49歲。

1.2 免疫組化染色 兔抗人PTEN多克隆抗體購自中衫金橋生物技術有限公司，用Max Vision兩部法行免疫組化染色。用已知陽性標本作為對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。PTEN蛋白主要定位于細胞漿，胞漿含有棕黃色顆粒的腫瘤細胞計為陽性細胞。隨機選擇10個高倍視野，計數1 000個腫瘤細胞，計算陽性細胞百分率。＜10%為(-)，10%～50%為(+)，＞50%為(++)。在分析時將(-)～(+)歸為低表達，(++)歸為高表達。低表達被認為是表達缺失。

1.3 ELISA檢測 PTN-ELISA試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司，采用美國Rayto雷杜(RT-6100酶標儀)進行檢測。每份標本進行雙孔檢測，取二者平均值作為最終結果進行統計分析。

1.4 統計學方法 應用SPSS18.0統計學軟件進行數據分析，計量資料應用獨立樣本t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織中PTEN的表達 PTEN陽性定位于乳腺癌細胞漿，著色深淺不一，散在分布，細胞核表達較少(圖1)。PTEN在乳腺癌組織中的表達：陰性36例，強陽性16例。

圖1 PTEN在乳腺癌組織中的表達

2.2 乳腺癌患者血清中PTN水平 檢測52例乳腺癌患者血清PTN水平，最小值129.1 pg/ml，最大值2 000.0 pg/ml，平均值509.7 pg/ml。

2.3 PTEN與PTN的關系 PTEN陰性組36例，血清PTN平均值(566.34+464.51)pg/ml；PTEN陽性組16例，血清PTN平均值(408.68+170.77)pg/ml。兩組比較血清PTN平均水平差異無統計學意義(t=1.31，P=0.20)。

3 討論

PTEN是一種抑癌基因，在多種腫瘤中存在缺失或突變，通過負調控PI3K/AKT通路參與細胞的增殖、凋亡、分化與遷移。PTN功能同PTEN基因敲除小鼠的表型有相符之處。

Li等[5]對PTEN缺失的小鼠胚胎成纖維細胞和正常小鼠胚胎成纖維細胞的基因表達狀況進行了基因芯片分析，發現PTN在PTEN缺失細胞中和PTEN基因敲除小鼠的乳腺癌組織中高達，PTEN通過PI3K-AKT途徑參與調控PTN表達，而PTN穩定沉默后導致磷酸化AKT還原，并顯著降低細胞的生長和成瘤能力。Suzuki等[6]發現，Rituximab(利妥昔單抗，美羅華)在治療B細胞淋巴瘤中可介導上調PTEN表達，抑制PI3K/AKT信號和PTN表達。由此推測，PTN可能通過PTEN/AKT信號通路的調節，影響腫瘤細胞生長。

基于上述推測，本項研究將乳腺癌PTEN結果分為陽性組和陰性組，對血清PTN水平分析，結果兩組比較血清PTN平均水平差異無統計學意義。乳腺癌的發生發展是一個復雜的過程，在乳腺癌的發生發展中PTEN和PTN或許都不是一個獨立的因素，它們之間的關系還需要更多的證據來證明。

[1]Li J,Yen C,Liaw D,et al.PTEN,a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain,breast,and prostate cancer [J].Science,1997,275(5308):1943-1947.

[2]Steck PA,Pershouse MA,Jasser SA,et al.Identification of a candidate tumour suppressor gene,MMAC1,at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers[J].Nat Genet,1997, 15(4):356-362.

[3]Lee JO,Yang H,Georgescu MM,et al.Crystal structure of the PTEN tumor supp-ressor:implications for its phosphoinositide phosphatase activity and membrane association[J].Cell,1999,99 (3):323-334.

[4]Deuel TF,Zhang N,Yeh HJ,et al.Pleiotrophin:a cytokine with diverse functions and a novel signaling pathway[J].Arch Biochem Biophys,2002,397(2):162-171.

[5]Li G,Hu YC,Huo YY,et al.PTEN deletion leads to up-regulation of a secreted growth factor pleiotrophin[J].J Biol Chem,2006,281 (16):10663-10668.

[6]Suzuki E,Chen HM,Baritaki S,et al.Rituximab-mediated upregulation of PTEN expression and inhibition of both the PI3K/AKT pathway and pleitrophin(PTN)expression in B-NHL:roles in cell growth inhibition and chemosensitization[J].Blood,2006,108: 2374.

Clinical significance of PTEN expression in tissue and pleiotrophin level in serum of breast cancer.

FU Chun-ling,XU Jin-ming,ZHANG Shi-qiong,LIU ding-rong,ZHOU Qi,LI Wei,TU Wei.
Department of Pathology, Chongqing Fuling Central Hospital,Chongqing 408000,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of PTEN in breast cancer tissues and the level of pleiotrophin in breast cancer serums and study its relationship.MethodsUsing immunohistochemical to detect the expression of PTEN protein in breast cancer tissues of 52 cases,and using specific enzyme-linked immunosorbent experiment to test the level of PTN in preoperative serum of patients in this group.ResultsThere were 36 patients in PTEN negative group with an average serum PTN value as(566.34+464.51)pg/ml,while there were 16 cases in PTEN positive group with an average serum PTN value as(408.68+170.77)pg/ml.There was no statistically significant difference in the average serum PTN values between the two groups.Conclusion The development of breast cancer is a complicated process.In the development of breast cancer,PTN and PTEN may be independent of each other,and the relationship between them still needs more evidence to prove.

Breast cancer;Phosphase and tensin homolog deleted on chromosome ten(PTEN);Pleiotrophin(PTN)

R737.9

A

1003—6350（2014）14—2168—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.14.0843

2014-01-13)

重慶市衛生局醫學科研計劃研究項目(編號：2010-2-239)；重慶市涪陵區科技計劃項目(編號：2010ABB1069)

傅春玲。E-mail：fcl041218@163.com