七氟醚分娩鎮(zhèn)痛對新生鼠低氧缺血性耳蝸損害的影響研究

蘇嬌玲 李元濤 孟 馨

（深圳市婦幼保健院，廣東 深圳 518000）

七氟醚分娩鎮(zhèn)痛對新生鼠低氧缺血性耳蝸損害的影響研究

蘇嬌玲 李元濤 孟 馨

（深圳市婦幼保健院，廣東 深圳 518000）

目的 七氟醚分娩鎮(zhèn)痛對低氧缺血性耳蝸損害的影響。方法 健康雌性SD大鼠，隨機分為三組：正常組，分娩窒息組，七氟醚組，七氟醚組在分娩時給與吸入2.4%七氟烷。觀察各組大鼠MDA、NO、SOD變化以及聽力域和毛細胞計數(shù)，結(jié)果 與對照組比較，模型組胎鼠血清MDA、NO明顯增高，ABR閾值、SOD明顯降低，毛細胞計數(shù)明顯減少；與模型組相比，治療組胎鼠血清MDA、NO明顯下降，ABR閾值、SOD明顯增高，毛細胞計數(shù)明顯增多。結(jié)論 七氟醚母鼠分娩鎮(zhèn)痛對新生鼠缺氧性耳蝸損害具有保護作用。

分娩窒息模型；七氟醚；耳蝸損害

圍生期低氧缺血性腦損害（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是新生兒急性發(fā)病和幼兒慢性神經(jīng)損害的主要原因。圍生期胎兒宮內(nèi)缺氧、或者在分娩過程中的一些因素導致新生兒窒息，會導致不同程度的新生兒缺氧缺血性腦損害。患兒會導致永久性神經(jīng)功能障礙，包括聽力障礙、腦癱、智力發(fā)育障礙、和視力障礙等[1]。HIBD引起的神經(jīng)后遺癥治療時間較久，并且費用昂貴，增加了家庭和社會的負擔。目前臨床上的預防措施主要采取出生后低溫腦保護，療效并不理想，因此醫(yī)學工作者力圖尋找HIBD發(fā)病機制并尋求更有效的防治方法。本研究建立前列腺素誘發(fā)孕鼠分娩模型，給予母鼠吸入七氟醚分娩鎮(zhèn)痛，觀察七氟醚分娩鎮(zhèn)痛對低氧缺血性耳蝸損害的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

健康雌性SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，從暨南大學動物實驗中心購買，合格證號2010A035無耳毒性藥物使用史。分為正常組（自然分娩），分娩窒息組（模型組），七氟醚組（治療組），每組40只。大鼠飼養(yǎng)于SPF級動物室，室溫21～25 ℃，相對濕度40%～70%的屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。分娩窒息組通過建立前列腺素誘發(fā)分娩胎鼠窒息模型，正常組（自然分娩），分娩窒息組給與50%氧氣，七氟醚組吸入2.5%七氟醚混合50%O2。

1.2 動物模型的建立

動物不控制飲食，發(fā)情期將雌性大鼠和雄性大鼠（比例為5∶1）同籠飼養(yǎng)，每天通過陰道涂片，鏡下見到精子作為妊娠的第1天。選用妊娠21 d孕鼠為研究對象。

1.3 分娩模型建立

在妊娠第21天上午10點，對孕鼠管祠法給予前列腺素5 mg/kg 486個單位誘發(fā)24 h內(nèi)分娩[2]。

1.4 分娩胎鼠窒息模型建立

在妊娠第21天上午10點，對孕鼠管祠法給予前列腺素5 mg/kg誘發(fā)24 h內(nèi)分娩，有宮縮發(fā)作后，七氟醚組吸入2.5%七氟醚混合50%0持續(xù)吸入3 h，正常組（自然分娩）、分娩窒息組吸入氧濃度50%，氧流量2 L，持續(xù)吸入3 h。頸脫法處死母鼠，取子宮放在37 ℃水浴槽20 min后，迅速取出胎鼠，斷臍帶，擦拭身體（刺激呼吸），放在37 ℃恒溫箱保暖。

1.5 檢測指標

血清NO、MDA、SOD濃度測定及聲波檢查。每組40只新生大鼠心腔穿刺采血，離心分離血清20 ℃保存待用。血清NO的測定采用硝酸還原酶法，按照試劑盒說明操作。聲波檢查根據(jù)傳統(tǒng)方法[3，4]。

1.6 統(tǒng)計學處理

采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差（）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩組間比較采用LSD-t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 各組鼠耳蝸聽性腦干反應(yīng)（ABR）閾值的影響

治療組其ABR閾值比用藥前明顯提高，并且與正常對照組比較，差異顯著（P＜0.05），正常對照組和模型組在整個期間ABR閾值無明顯變化，見表1、表2。

表1 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

表1 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

注：*代表與正常組比較，P＜0.05

組別 n 給藥前 給藥后正常組 40 20.8±7.6 22.10±5.1模型組 40 77.5±3.6* 76.3±4.2*

表2 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

表2 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

注：#代表與模型組比較，P＜0.05

組別 n 給藥前 給藥后模型組 40 77.5±3.6 76.3±4.2治療組 40 74.3±6.1# 40.9±3.4#

2.2 耳蝸鋪片及細胞計數(shù)耳蝸鋪片顯示

模型組毛細胞數(shù)量下降，形態(tài)不清，排列紊亂；治療組毛細胞數(shù)量也不高，與模型組比較，形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，細胞殘余量較高。外毛細胞計數(shù)與正常組比較（1106.78±76.29），模型組（532.16±165.72）明顯降低（P＜0.05），與模型組比較，治療組（749.76±102.14）外毛細胞計數(shù)分別明顯升高，（P＜0.05）。

2.3 血清NO含量的測定結(jié)果

正常組、模型組、治療組新生胎鼠血清NO含量分別為（9.8± 6.9）ng/mL、（40.5±15.7） ng/mL、（24.1±8.7）ng/mL，血清NO含量存在差別，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與對照組比較，模型組胎鼠血清MDA明顯增高、SOD明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，治療組胎鼠血清MDA明顯降低、SOD明顯升高（P＜0.05），見表3、表4。

表3 各組大鼠血清NO的含量（）

表3 各組大鼠血清NO的含量（）

注：*代表與對照組比較，P＜0.05

groups n NO(ng/L) MDA(μmol/L) SOD正常組 40 9.8±6.9 4.3±0.9 139.1±16.6模型組 40 40.5±15.7* 6.8±0.6* 102.8±11.3*

表4 各組大鼠血清NO的含量（）

表4 各組大鼠血清NO的含量（）

注：#代表與模型組比較，P＜0.05

groups n NO(ng/L) MDA(umol/L) SOD模型組 40 40.5±15.7 6.8±0.6 102.8±11.3治療組 40 24.1±8.7# 5.2±0.3# 141.5±10.4#

3 討 論

新生兒HIBD缺氧缺血（如胎兒窒息）后腦損傷的發(fā)生病因較多比如：腦細胞高能磷酸耗竭及酸中毒；自由基的產(chǎn)生、炎性細胞因子的作用，非NMDA受體被激活，引起細胞水腫等等[2]。目前的研究發(fā)現(xiàn)七氟醚等多種麻醉藥物可以通過以上途徑預防和治療缺血缺氧性腦損傷作用，另外臨床上聯(lián)合低溫或α2受體激動劑等，對神經(jīng)可以起到保護作用。

聽覺系統(tǒng)分為外周部分和中樞部分。研究人員指出美國每年大約有5000例不同程度的聽力損害與缺氧缺血性腦病有關(guān)，而新生兒聽力損害與出生時窒息缺氧有關(guān)。圍生期缺血缺氧性聽力損害的部位可能主要在耳蝸、耳蝸核及下丘腦，主要引起聽力障礙、智力發(fā)育落后等后遺癥。圍生期窒息缺氧缺血引起耳蝸供氧不足，耳蝸毛細胞功能等明顯受損，認知功能障礙。研究者發(fā)現(xiàn)：臨床上檢測到聽覺電生理異常時，耳蝸在內(nèi)的聽覺系統(tǒng)已經(jīng)受損[5]。

分娩疼痛作為一應(yīng)激源引起一系列內(nèi)分泌反應(yīng)，使產(chǎn)婦過度緊張，影響子宮有效收縮，使產(chǎn)程延長，而分娩鎮(zhèn)痛可縮短產(chǎn)程，降低胎兒缺氧和新生兒窒息。七氟醚是一種新型吸入全身麻醉劑，它具有芳香氣味，可以抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，不刺激呼吸道，應(yīng)用于成人、兒童和老年人均安全，尤其在分娩鎮(zhèn)痛中有很好的前景。

內(nèi)耳NO的功能可能是調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣離子濃度。鈣離子與外毛細胞活動性調(diào)節(jié)有關(guān)，細胞內(nèi)游離鈣離子濃度升高可導致內(nèi)毛細胞神經(jīng)遞質(zhì)的釋放[6]。另外NO在內(nèi)耳的血液循環(huán)中也起作用。本研究顯示，新生大鼠缺氧缺血時，導致NO的分泌增多，使新生大鼠的聽覺生理發(fā)生紊亂，造成新生大鼠的耳蝸損傷；七氟醚給予缺氧缺血的新生大鼠后，減少NO的分泌，ABR測試顯示聽性腦千反應(yīng)閾降低。治療組與模型組相比聽性腦干反應(yīng)閾降低，表明應(yīng)用七氟醚對缺氧缺血大鼠進行干預，可以促進其聽覺生理的恢復，因此，七氟醚母鼠分娩鎮(zhèn)痛對新生鼠缺氧性耳蝸損害具有保護作用。

[1] 韓明訓,趙烏蘭.針刺及川芎嗪對急性藥物性聾豚鼠耳蝸內(nèi)氧自由基生成影響實驗研究[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,22(10): 782-784.

[2] Catheline G,Touquet B,Besson JM,et al.Parturition in the rat:a physiological pain model[J].Anesthesiology,2006,104(6):1257-1265.

[3] 謝利紅,唐安洲,尹時華.60cO照射對豚鼠聽力及耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞Caspase表達的影響[J].聽力學及言語疾病雜志,2012,20(1):32-35.

[4] 王愛梅,湯浩,寶東艷.丹參注射液對慶大霉素耳中毒豚鼠耳蝸NOS異構(gòu)體表達的影響[J].中國應(yīng)用生理學雜志,2011,27(2): 246-248.

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[6] 金大玉,崔廣帥,邢巍巍.電離輻射對耳蝸毛細胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J].聽力學及言語疾病雜志,2010,18(5):496-497.

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1671-8194（2014）18-0092-02