HIF-1α在放療敏感性不同的宮頸鱗癌組織中的表達及意義

周和超陳興貴陳華普余忠華

（1 廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院腫瘤中心，廣東 湛江 524001；2 廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院臨床科研中心，廣東 湛江 524001）

HIF-1α在放療敏感性不同的宮頸鱗癌組織中的表達及意義

周和超1陳興貴1陳華普2余忠華1

（1 廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院腫瘤中心，廣東 湛江 524001；2 廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院臨床科研中心，廣東 湛江 524001）

目的 探討不同放療敏感性宮頸癌組織中HIF-lα蛋白的表達及其與放療敏感性的關系。方法 選取宮頸鱗癌（Ⅱb、Ⅲa期）患者40例，放療前行宮頸組織活檢并保存標本。放療結束3個月后，根據(jù)WHO實體瘤療效判斷標準，將保存的宮頸癌組織標本分為高敏感組（28例）及低敏感組（12例），應用免疫組織化學方法檢測組織中HIF-lα蛋白的表達。結果 HIF-lα蛋白在高敏感組的表達強度高于低敏感組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；HIF-lα蛋白在Ⅲa期患者宮頸癌組織中的表達強度稍高于Ⅱb組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 乏氧誘導因子-lα可能是導致宮頸癌放療敏感性下降的一個重要因素。

乏氧誘導因子-lα；宮頸癌；放射敏感性

放射治療是局部中晚期宮頸癌的主要治療手段，但在放射治療中發(fā)現(xiàn)存在對放療敏感或抵抗的患者，現(xiàn)研究表明發(fā)生放療抵抗主要與腫瘤細胞內存在乏氧細胞有關[1]。乏氧激活的最重要的核轉錄因子是乏氧誘導因子-lα（HIF-lα），已有報道宮頸癌組織較腺瘤和正常組織HIF-lα mRNA和蛋白水平的表達明顯增高[2]。我們采用免疫組織化學法檢測放療敏感性不同的宮頸鱗癌組織中HIF-lα的表達水平，探討乏氧誘導因子-lα的作用。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般臨床資料

研究的病例來自2007年1月至2013年1月在我院門診和住院女性患者，共40例，年齡32～65歲，平均（52.4±2.1）歲。臨床分期均為Ⅱb、Ⅲa 期（FIGO分期），其中Ⅱb期28例，Ⅲa期12例。組織樣品為放療前活檢標本，病理檢查結果均為高-中分化鱗癌。所有病例均接受根治性放療，并同步化療（含鉑類藥物為基礎的化療方案）。治療前、放療中期及放療后3個月，均行婦科檢查、MRI或CT掃描，治療結束后門診定期復查，觀察并記錄瘤體變化情況。療效評價在治療后3個月復查時進行，近期療效判斷按WHO實體瘤療效評定標準，分為完全緩解（CR）：可見腫瘤病變完全消失, 維持4周以上；部分緩解（PR）：腫瘤病灶的最大直徑及其最大的垂直橫徑的乘積縮小50%以上，其他病灶無增大，無新病灶出現(xiàn)，維持4周以上；穩(wěn)定或無變化（SD）：腫瘤病灶的兩徑乘積縮小不足50%，或增大不超過25%，無新病灶出現(xiàn)，維持4周以上；進展（PD）：新病灶出現(xiàn)或原有病變估計增大25%。其中CR為高敏感組，PR+NC＋PD為低敏感組。

1.2 實驗方法

將放療前活檢的宮頸癌組織投入配制好的10%中性甲醛液中固定24～48 h，然后將固定好的標本經(jīng)梯度酒精脫水，按標準的組織學步驟進行浸蠟，包埋，4 μm連續(xù)切片，采用免疫組織化學SABC法檢測兩組腫瘤細胞中HIF-lα的表達，具體步驟由專人嚴格根據(jù)SABC試劑盒提供的說明書操作，HIF-lα陽性細胞主要著色定位于細胞胞質，胞核也有少許著色，每張片子均有兩位病理醫(yī)師確認，免疫組化染色結果采用Image-Plo Plus圖像處理分析軟件進行掃描，測定IOD值并計算平均值后進行統(tǒng)計分析。IOD值越大，表示表達量越多。

1.3 統(tǒng)計分析

采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料采用均數(shù)和標準差（）描述。兩組間比較用t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 40例宮頸鱗癌患者放療近期療效

對40例宮頸鱗癌患者放療后3個月進行療效評價，其中CR為24例，占60%（24/40）；PR為16例，占40%（16/40）；NC為0例；PD為0例。即本研究病例高敏感組24例，低敏感組16例。見表1。

表1 40例宮頸癌患者放療結束3個月的近期療效

2.2 HIF-lα在放療敏感性不同宮頸癌組織中的表達

HIF-lα陽性染色主要著色定位于宮頸癌細胞胞質，胞核也有少許著色。低敏感組HIF-lα蛋白表達明顯增多，多呈強陽性表達；而高敏感組的HIF-lα蛋白表達少，且大多為弱表達。經(jīng)半定量分析結果顯示，兩組中HIF-lα表達量的比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 HIF-lα在放療敏感性不同宮頸癌組織中的表達

2.3 HIF-lα在不同臨床分期宮頸癌組織中的表達

Ⅲa期患者HIF-lα蛋白表達水平有所增多，與Ⅱb期患者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

3 討 論

宮頸癌的發(fā)病率占我國女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位，嚴重威脅著女性身心健康，其治療原則主要是以手術治療為主，輔以放化療。近些年來，宮頸癌的綜合治療效果獲得顯著提高，放射治療總的5年生存率達到55%～65%，但在治療中常出現(xiàn)對放療抵抗的個體，療效欠佳，這主要與腫瘤內存在乏氧細胞有關[3]。缺氧微環(huán)境的出現(xiàn)，是宮頸癌組織對放療抵抗、化放療后復發(fā)及轉移的重要因素[4]。

表3 HIF-lα在不同臨床分期宮頸癌組織中的表達

乏氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）是乏氧激活的最重要的核轉錄因子，其幾乎調控了乏氧所誘導的所有基因的轉錄。HIF-lα調節(jié)的基因涉及離子代謝、細胞能量代謝、血管發(fā)生及舒縮控制，介導轉錄的基因有EPO、VEGF、糖酵解酶的基因等[5]。HIF-1α可能通過抑制腫瘤細胞凋亡、調控DNA修復過程的相關因子表達、上調VEGF轉錄而促進新的血管形成等，使腫瘤細胞適應乏氧微環(huán)境，降低電離輻射對腫瘤細胞DNA的損傷，從而降低放療敏感性[6]。有研究表明在肺癌、口咽癌、胃癌、宮頸癌、前列腺癌等惡性腫瘤中HIF-lα蛋白表達明顯增高，且和預后、病死率呈相關性[7,8]。本研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α在宮頸癌組織中表達增強，且低敏感組呈高表達，與高敏感組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與多數(shù)研究一致，我們推測HIF-lα在宮頸癌組織的表達增高可能是引起放射敏感性下降的機制之一。目前關于HIF-1α的表達是否與分化程度和臨床分期有關，各家報道不一。楊斌[9]等報道HIF-1α的表達與宮頸鱗癌的分化程度、臨床分期呈正相關。本研究結果顯示HIF的表達與臨床分期有關，Ⅲa期患者HIF-lα蛋白表達水平有所增多，與Ⅱb期患者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與上述報道一致，但因為本研究中未入組低分化癌病例，有關HIF-1α的表達與宮頸鱗癌的分化程度的關系有待進一步的研究。

由于乏氧微環(huán)境的存在及HIF-1α在宮頸癌中所起的關鍵作用，采用RNA干擾HIF-1α增強腫瘤細胞的放射敏感性在細胞水平和裸鼠移植瘤的相關研究已有報道[10]。我們的研究進一步證實了HIF-1α和宮頸癌放療敏感性下降的關系，這為宮頸癌的放射增敏治療提供了方向。

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The Expression Level and Significance of HIF-1α in Human Cervical Squamous Cell Carcinoma Tissues with Different Radiosensitivities

ZHOU He-chao1, CHEN Xing-gui1, CHEN Hua-pu2, YU Zhong-hua1
(1 Department of Oncology Center, The Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China; 2 Clinical Research Center, The Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China)

Objective To study the expression of HIF-lα in human cervical squamous cell carcinoma tissues and its association with radiosensitivity. Methods 40 samples from patients with cervical squamous cell carcinoma (Ⅱb, Ⅲa)were collected and preserved before radiotherapy.Then the samples were divided into two groups: the high radio-sensitivity group and the low radio-sensitivity group, according to according to the WHO response evaluation criteria in solid tumors in 3 months after the end of radiotherapy. The HIF-lα protein were detected by immunohistochemistry technology in tissue. Results The expression levels of HIF-lα in the low radio-sensitivity group were higher than those in the high radio-sensitivity group significantly(P＜0.05) ; The expression levels of HIF-lα in the stage Ⅲa were higher than those in the stage Ⅱb significantly(P＜0.05). Conclusion HIF-lα may be an important factor resulting in decreased sensitivity of cervical carcinoma in radiotherapy.

Hypoxia-inducible factor-1α; Cervical carcinoma; Radiosensitivity

R737.33

B

1671-8194（2014）18-0060-03