HPLC法測定右旋蘭索拉唑控釋膠囊中左旋異構體含量

郭俊平

宜興市人民醫院，宜興 214200

HPLC法測定右旋蘭索拉唑控釋膠囊中左旋異構體含量

郭俊平

宜興市人民醫院，宜興 214200

目的：建立HPLC法對右旋蘭索拉唑控釋膠囊中左旋和右旋異構體進行拆分并測定其中左旋異構體含量。方法：采用Chiral-AGP手性柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為乙腈-pH 6.0磷酸鹽緩沖液（10∶90）；流速0.5 mL·min-1；柱溫30℃；檢測波長285 nm；進樣量20 μL。結果：蘭索拉唑左旋和右旋異構體之間的分離度為3.0，左旋異構體的線性范圍為0.51～5.10 μg·mL-1（r=0.9996），檢測限為2.52 ng，平均回收率（n=9）為98.4%。結論：該方法操作簡便，結果準確，可用于右旋蘭索拉唑控釋膠囊中左旋異構體的含量測定。

高效液相色譜；手性柱；右旋蘭索拉唑控釋膠囊；左旋異構體

右旋蘭索拉唑（dexlansoprazole）是日本武田公司開發的新一代質子泵抑制劑，是該公司曾經開發的蘭索拉唑（lansoprazole）的右旋光學異構體，該制劑采用新型的雙相控釋劑型，可持續抑制胃酸分泌，效果顯著，耐受性良好[1]。右旋蘭索拉唑控釋膠囊（dexlansoprazole delayed release capsules）已于2009年經美國FDA批準上市，商品名：DexliantTM。本品分子結構中含有一個手性中心，可能在生產過程中引入少量的左旋異構體，因此建立一個良好的異構體檢查方法對本品的質量控制尤為重要。本文采用手性固定相的HPLC法對蘭索拉唑異構體進行拆分并檢測左旋異構體含量，可有效地控制本品的質量。

1 材料

1.1 儀器

島津20A高效液相色譜儀，SPD-M20A二極管陣列檢測器，Labsultion色譜工作站；賽多利斯BT125D電子分析天平；梅特勒FE20 pH計。

1.2 試藥

右旋蘭索拉唑控釋膠囊（南京源健醫藥技術有限公司，批號：20131201、20131202、20131203；日本武田制藥，批號：C19323，4批規格均為60 mg/粒）；蘭索拉唑對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100709-200902，純度為99.8%）；左旋蘭索拉唑對照品（南京源健醫藥技術有限公司，批號：20131101，標定含量為99.5%）；乙腈（色譜純，美國TEDIA公司）；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和磷酸鈉均為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件

色譜柱為大賽璐公司Chiral-AGP手性柱（4.6 mm×15 cm，5 μm）；流動相：乙腈－磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）（10∶90）；流速：0.5 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：285 nm；進樣量：20 μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）取156.0 g·L-1磷酸二氫鈉溶液70 mL與179.1 g·L-1磷酸氫二鈉溶液20 mL，用水稀釋至1000 mL，取250 mL加水稀釋至1000 mL。

2.2.2 稀釋液取磷酸鈉（Na3PO4·12H2O）0.68 g與磷酸氫二鈉（Na2HPO4·2H2O）0.62 g，加水適量使溶解并稀釋至100 mL，搖勻。

2.2.3 蘭索拉唑對照品溶液取蘭索拉唑對照品10 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 左旋對照品溶液取左旋蘭索拉唑對照品12.5 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，作為左旋蘭索拉唑對照品儲備液；精密量取對照品儲備液2 mL，置100 mL量瓶中，用稀釋液溶解定容至刻度，即得。

2.2.5 樣品溶液取右旋蘭索拉唑約25 mg的膠囊內容物，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統適用性試驗

精密量取蘭索拉唑對照品溶液、左旋蘭索拉唑對照品溶液和樣品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，左旋蘭索拉唑保留時間為20.5 min，右旋蘭索拉唑保留時間13.6 min，兩者分離度達3.0，理論板數按左旋蘭索拉唑計達3567。色譜圖見圖1。

圖1 右旋蘭索拉唑HPLC色譜圖

2.4 線性關系考察

取左旋蘭索拉唑對照品適量，精密稱定，用稀釋液溶解稀釋成0.51、1.02、2.04、3.06、4.08、5.1 μg· mL-1濃度的系列溶液。精密量取各20 μL，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以峰面積（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸，得方程：A= 4.56×105C-2.14×104（r=0.9996）。左旋蘭索拉唑濃度在0.51～5.10 μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.5 檢測限和定量限

取“2.4”項下左旋蘭索拉唑對照品溶液逐級稀釋，分別進樣，按信噪比（S/N）為3，確定本品檢測限為2.52 ng，按信噪比（S/N）為10，確定本品定量限為7.56 ng。

2.6 進樣精密度

取左旋蘭索拉唑對照品溶液連續進樣6次，記錄左旋蘭索拉唑峰面積，RSD為0.36%（n=6）。

2.7 重復性試驗

取右旋蘭索拉唑控釋膠囊20粒（批號：20131201），倒出內容物，混勻，取混勻后的內容物6份，精密稱定，分別加稀釋液溶解并稀釋成濃度為0.5 mg·mL-1的樣品溶液。分別進樣，測定左旋異構體的含量。結果左旋蘭索拉唑含量平均值為0.12%（n=6），RSD為2.5%。表明該方法重復性良好。

2.8 中間精密度

由不同試驗人員在不同的液相色譜儀上測定同一批右旋蘭索拉唑控釋膠囊（批號：20131201）中左旋異構體含量。結果左旋蘭索拉唑含量平均值為0.12%（n=12），RSD為2.8%。表明該方法精密度良好。

2.9 回收率試驗

取右旋蘭索拉唑約25 mg的膠囊內容物（批號：20131201，左旋異構體含量為0.12%），共9份，精密稱定，分別置于50 mL量瓶中，精密加入左旋蘭索拉唑對照品儲備液1.0、2.0、3.0 mL各3份，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，作為回收率供試品溶液。取回收率供試品溶液分別注入液相色譜儀，按外標法計算回收率。結果平均回收率為98.4%，RSD為3.5%（n=9）。

2.10 溶液穩定性

取右旋蘭索拉唑約50 mg的膠囊內容物（批號：20131201），精密稱定，分別置于100 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，室溫放置。分別于配制后0、2、4、6、8、10 h進樣，記錄色譜圖。其中左旋異構體峰面積RSD為1.1%（n=6），表明樣品溶液在室溫條件下放置10 h穩定。

2.11 樣品測定

取右旋蘭索拉唑約25 mg的膠囊內容物（南京源健，批號：20131201、20131202、20131203；日本武田，批號：C19323），精密稱定，分別置于50 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，分別進樣測定，4批制劑左旋異構體的含量分別為0.12%、0.15%、0.10%、0.13%（n=2）。均符合產品質量標準中規定的含量限度（0.5%）。

3 討論

3.1 檢測波長的確定

取蘭索拉唑對照品、左旋蘭索拉唑對照品和右旋蘭索拉唑原料，用稀釋液溶解并稀釋成10 μg· mL-1的溶液，在紫外200～400 nm的波長范圍內掃描，結果發現三者在285 nm附近均有最大吸收，所以將285 nm作為本品的檢測波長。

3.2 色譜柱的選擇

據文獻報道[2]，Chiralcel OD、Chiralcel AD和Chiral AGP手性柱均可用于蘭索拉唑對映體的分離和檢測。使用Chiralcel OD和Chiralcel AD手性柱均需要使用正相稀釋液（異丙醇、正己烷），對環境污染較大；而Chiral AGP手性柱可使用乙腈和磷酸鹽溶液的反相稀釋液系統，不需要專門的正相設備，對環境污染小。故選擇Chiral AGP手性柱。

3.3 耐用性試驗

微調檢測波長（±5 nm）、柱溫（±5℃）及稀釋液比例（±2%），在蘭索拉唑色譜中，右旋和左旋異構體分離度均符合要求，左旋蘭索拉唑對照品主峰柱效符合要求。說明該測定方法適合本品測定，具有良好的耐用性。

[1] 房超，包泳初，陳慶華.右旋蘭索拉唑雙相控釋制劑的藥動學研究及其臨床療效[J].世界臨床藥物，2011，32（7）：429-32.

[2] 崔欣，付芳敏，朱槿，等.奧美拉唑、蘭索拉唑對映體及相關物質在不同手性柱的分離比較[J].分析化學，2002，30（12）：1494-6.

S-isomer Determination in Dexlansoprazole Delayed Release Capsules Using an HPLC Method

GUO Jun-ping
People’s Hospital in Yixing,Yixing 214200,China

Objective：To establish an HPLC method for enantio-separation of S-and R-lansoprazole and quantitation of the S-isomer.Methods：The separation was performed on an AGP chiral column (DAICEL CHIRALPAK,150 mm×4.6 mm,5 μm)．The mobile phase was acetonitrile－pH 6.0 sodium phosphate buffer(10∶90)at the flow rate of 0.5 mL·min-1.The column temperature was 30℃,and the UV detection was set at 285 nm.The injection volume was 20 μL.Results：The resolution of the isomers was 3.0,the linear range of the s-isomer was 0.51～5.10 μg·mL-1(r=0.9996),the detection limit was 2.52 ng and the average recovery(n=9)was 98.4%.Conclusion：The method is simple and accurate and can be used for S-isomer assay in dexlansoprazole delayed release capsules．

HPLC;Chiral column;Dexlansoprazole delayed release capsules;S-isomer

R927.2

A

1673-7806（2014）03-228-03

郭俊平，男，副主任藥師

E-mail:staff187@yxph.com

2014-03-17

2014-04-15