Survivin和HPV16/18在宮頸上皮內瘤變（CIN）進展中的臨床意義

【摘要】目的：探討凋亡抑制基因Survivin和HPV16/18在宮頸上皮內瘤變（CIN）進展中的臨床意義。方法：采用原位雜交法檢測正常宮頸組織（對照組）、CINI、CINII ， CINIII級 HPV 16 /18 DNA的表達。采用免疫組織化學法檢測Survivin蛋白的表達。結果：HPV 16 /18DNA ， Survivin 蛋白的陽性率在對照組、CINI、CINII ， CINIII組中逐漸升高，差異有統計學意義（（P<0.05）。結論Survivin基因在宮頸上皮內瘤變的進展中起重要作用；Survivin 基因及HPV 16/18在宮頸上皮內瘤變中有異常表達。二者可能與CIN的發生發展有密切關系，且均隨CIN 分級的升高表達增加，兩者聯合檢測有利于提高宮頸上皮內瘤變的診斷率，以便于用于篩查。

【關鍵詞】Survivivin 人乳頭瘤病毒16/18 宮頸上皮內瘤變（CIN）

【中圖分類號】R711.5 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）08-0669-01

Survivin是新近發現的一種凋亡抑制基因，具有抑制凋亡效應蛋白酶Caspase的活性、參與細胞周期調控及調節細胞有絲分裂等多種生物學作用[1]。我國近年來有關宮頸癌的病因學研究表明：生殖道感染高危型HPV是婦女子宮頸上皮內瘤變（CIN）高發的主要危險因素。本研究采用原位雜交法在核酸水平檢測正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變中HPV 16 /18 DNA的表達，同時采用免疫組化法在蛋白水平檢測Survivin的表達。研究Survivin基因及HPV 16 /18 DNA在宮頸上皮內瘤變中的表達，探討二者與宮頸上皮內瘤變的相關性，旨為CIN的早期診斷提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年9月至2013年9月在我院住院的患者72例，其中CINI 33例，CINII級20例，CINIII 19例，平均年齡45（33～71）歲；取同期正常宮頸組織20例作對照，平均年齡45歲。

1.2 主要試劑

福州邁新生物技術開發公司的Survivin單克隆鼠抗濃縮液，S-P試劑盒。HPV16/18原位雜交試劑盒購于福建泰普生物科學有限公司。

1.3 方法

免疫組化方法參照S-P試劑盒說明進行Survivin單克隆鼠抗濃縮液按1：50稀釋。HPV 16/18 DNA原位雜交：切片脫蠟水加蛋白酶K，37℃孵育18 min；梯度酒精脫水。每張切片加入10ul的生物素化探針，蓋上蓋玻片。95℃變性10min，37℃下濕盒中雜交10 h，去垢劑洗滌液浸片15min去蓋玻片。加SPAP結合物，37℃孵育25min。加酶底物BCIP/NBT室溫暗盒顯色15 min。核固紅復染，水性封片劑封片。

1.4 結果判定

Survivin以腫瘤細胞出現明顯棕黃色顆粒為陽性表達。表達強度按其數量及其染色強度判定陰性（-）和陽性（+）：陽性細胞數大于10%為陽性；小于10%為陰性[2]。HPV 16 /18 DNA陽性細胞表現為細胞核中出現藍色或黑色顆粒。

1.5 統計學方法

采用SPSS 13. 0軟件進行分析。率的比較采用χ2檢驗（四格表或列聯表）或 Fisher精確概率法，P< 0.05具有統計學意義。

2 結果

CINI、CINII、CINIII級Survivin蛋白表達及HPV 16/18感染陽性率均顯著高于正常對照者，且其差異有統計學意義（P<0.05）。見表1.

3 討論

Surrivin蛋白雖是凋亡抑制蛋白（IAP）家族中結構最簡單的蛋白分子，卻是迄今為止活性最強的凋亡抑制蛋白。Survivin可直接作用于Caspase這一凋亡核心機制，主要通過粘附于活化的Caspase-3， Caspase-7[3]，從而阻斷凋亡過程。本研究結果在20例正常子宮頸組織中，Survivin表達均為陰性。在子宮頸上皮內瘤樣變（CIN）三級中都檢測到了Survivin基因的表達，而且隨子宮頸上皮內病變的進展，從正常子宮頸發展到CINI～II，再到CINIII ，Survivin的表達率逐漸升高，差異有統計學意義（P< 0. 05）。因此，對于宮頸病理診斷CINI～II，同時Survivin表達陽性者，若有進一步惡變的趨勢，可指導臨床及早對這部分病例嚴密隨訪并積極治療。

在宮頸非典型增生向宮頸癌演變的過程中，病毒整合是一個重要機制，病毒的整合導致病毒基因表達的失調、宿主基因的不穩定、甚至細胞癌基因的激活，從而決定了細胞的惡性生物學行為[4]。本實驗研究結果顯示，CIN組的HPV 16/18感染率顯著高于對照組。表明HPV16/18感染為CIN發生發展的主要原因之一，因此積極預防及治療HPV感染對防治CIN有重要意義。

參考文獻

[1]Borbely AA，Murvai M，Szarka K，et a1.Survivin promoter polymor-phism and cervical carcinogenesis[J].J Clin Patho1，2007，60（3）：303-306

[2]柯曉慧，孫杭臨，胡芝，等. Survivin、Ki67在宮頸上皮內瘤變、宮頸癌中的表達及臨床意義[J].實用中西 醫結合臨床，2006 ，6（3）：3一5

[3]Shin S，Sung BJ，Cho YS，et a1.An anti-apoptotic protein human surviving is a direct inhibitor of caspase-3 and -7 [J].Biochemistry， 2001，40（4）：1117-1123.

[4]FununotoH， lraharaM.Hrunan papillana virus （H1'V）and cen-ical Cancer[J]. J M ed Invesl

2002， 49（3一4）： 124- 133.