注射用水溶性維生素中維生素B12含量測定方法學研究

【摘要】目的建立水溶性維生素中維生素B12的含量測定方法。方法參照《中華人民共和國藥典》二部中維生素B12的含量測定方法進行方法學考察。結果維生素B12質量濃度在1.0295μg/mL-4.1179μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好，樣品平均回收率為99.87%。結論該方法專屬性良好、準確度高、耐用性好、具有良好的穩定性。適合作為水溶性維生素中維生素B12的含量測定方法。

【關鍵詞】含量測定；水溶性維生素；維生素B12

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.599文章編號：1004-7484（2014）-05-2868-02

1資料與方法

1.1儀器高效液相色譜儀（島津LC-10ATvp溶劑輸送泵與島津SPD-10Avp紫外-可見檢測器），配有LC-solution色譜工作站。

1.2色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料。

1.2.1梯度洗脫流動相A精密稱取磷酸氫二鉀0.87g，磷酸二氫鉀0.41g，用水溶解后加乙腈125ml，用水稀釋至1000ml，pH值為7.5。

1.2.2流動相B水-乙腈-磷酸（499∶499∶2）。檢測波長360nm，柱溫40℃，維生素B12與未知峰之間的分離度應大于1.0。

1.3系統適用性試驗

1.3.1空白溶液的制備按制劑處方工藝制備（不含維生素B12）空白100瓶量，混勻。取5瓶量，置25ml容量瓶中，加適量水溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，即得。取30μl注入液相色譜儀，結果空白溶液不干擾維生素B12的含量測定。

1.3.2維生素B12對照品溶液的制備取維生素B12對照品25mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。取30μl注入液相色譜儀，結果維生素B12與未知峰之間的分離度大于1.0。

1.3.3供試品溶液的制備取本品5瓶，用適量水溶解后移置25ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻即得。取30μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果維生素B12與未知峰之間的分離度大于1.0。

1.4含量測定方法學研究

1.4.1標準曲線的建立精密稱取維生素B12對照品10.78mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液1.0、1.6、2.0、2.4、4.0ml，分別置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。上述各濃度的溶液分別進樣15μl，記錄色譜圖。以峰面積（A）為縱坐標，進樣量（X）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程。維生素B12在進樣量為1.0295μg/mL-4.1179μg/mL的范圍內與峰面積具有良好的線性關系。

1.4.2溶液穩定性試驗取本品5瓶，用適量水溶解后移至25ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻即得。定時取樣測定，考察峰面積變化程度。樣品溶液在8小時之內穩定。

1.4.3進樣精密度試驗取本品5瓶，用適量水溶解后移至25ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻即得。精密量取30μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。平行進樣6次，考察峰面積變化程度。結果表明該含量測定方法精密度良好。

1.4.4回收率試驗精密稱取維生素B12原料藥19.11mg、19.32mg、19.31mg、27.39mg、26.31mg、26.24mg、31.11mg、30.83mg、31.38mg分別置于500ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml置50ml量瓶中，按制劑處方量加入不含維生素B12的空白，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取維生素B12對照品適量，依法制備對照品溶液，計算回收率，見表1。

1.4.5重復性試驗取注射用水溶性維生素3瓶、維生素B12對照品25mg，依法配制成溶液，進行含量測定，平行操作6份，見表2。

1.4.6中間精密度試驗對同一批次供試品在不同的儀器上由不同的實驗人員在不同的時間按照上述方法分別進行6次分析驗證，見表3。

1.5含量測定對照品溶液的制備：取維生素B12對照品25mg，置250ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：取本品5瓶，用適量水溶解后移至25ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻即得。

測定法：取對照品溶液和供試品溶液各30μl，分別注入液相色譜儀，測定，用外標法計算，即得，見表5。

2結論

該方法在1.0295μg/mL-4.1179μg/mL之間具有良好的線性關系，具有良好的穩定性，專屬性良好、準確度高、耐用性好、適合作為水溶性維生素中維生素B12的含量測定方法。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].中國醫藥科技出版社，2010：901.