補腎健脾方促在卵泡排卵中的應用研究

【中圖分類號】R722.12 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）09-0049-01

近年來隨著社會壓力的增加，小卵泡排卵的發病率逐年上升，目前是婦科的疑難病癥之一。導師以補腎健脾，固沖止血為治則，擬補腎健脾方治療小卵泡排卵取得了良好的臨床療效。本實驗旨在探討其促卵泡發育及排卵的作用機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雌性未成年Wistar大鼠66只， 25～28日齡， 體重60～80 g， 由河南省實驗動物中心提供，合格證號：scxk（豫）2005-0001。

1.2 實驗藥物 補腎健脾方由黨參、炒白術、荊芥炭、生山藥、川斷、阿膠等組成。按原方劑量20倍取材制劑，所得制劑含生藥濃度約1.5g/ml，宮血停顆粒：10g/袋，哈藥集團中藥三廠生產，批號：080351。已烯雌酚片：0.5mg/片，合肥久聯制藥有限公司生產，批號：20070914，均按照臨床劑量的6.7倍制成，置于4℃冰箱備用。由河南省中醫藥研究院制劑室提供。

1.3 主要儀器及試劑 生物顯微鏡：OLYMPUS859310 JAPAN。血球分類計數器：由福建羅源醫械二廠生產。智能放免r測量儀：由上海原子核研究所日環儀器廠生產。大容量低速冷凍離心機：由上海中科生物醫學有限公司生產。血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α放免試劑盒：均由解放軍總醫院科技開發中心放免研究所提供，批號：200902274。

1.4 動物分組及給藥方法 選取健康未成年雌性大鼠66只， 隨機分為補腎健脾方高、中、低劑量組、宮血停組、已烯雌酚組和空白對照組， 每組13只， 分籠喂養， 每日定時灌胃， 給藥1 次。中藥高、中、低劑量組給藥劑量分別為30g/kg、15g/kg、7.5g/kg（以生藥量計），分別相當于臨床劑量的6.7倍、3.35倍、1.68倍。陽性對照組分別給予宮血停、已烯雌酚， 均按臨床劑量的6.7倍制成，用藥劑量分別為8g/kg、0.067mg/kg，各組用藥體積均為20ml/k g ， 空白對照組給予等量生理鹽水。均連續給藥22d。

1.5 檢測指標與方法

1.5.1 陰道脫落細胞變化

于給藥的第17天起，每日上午進行陰道脫落細胞涂片1次，連續1個性周期（5天）。方法：將蘸過生理鹽水的棉簽插入大鼠陰道約3-4mm，輕輕旋轉一周取出，涂于載玻片上，晾干，用95%無水乙醇固定約3-5分鐘，HE染色，用200倍生物顯微鏡觀察。通過陰道脫落細胞檢測來判斷大鼠動情周期變化。

1.5.2 子宮卵巢組織形態學觀察

動物處死同時摘除雙側卵巢、子宮。將分離的卵巢子宮固定于10%多聚甲醛液中，然后脫水，石蠟包埋，切片，常規HE染色，觀察比較子宮卵巢組織形態學變化（包括各級卵泡數目、黃體數目、主卵泡直徑及卵泡成熟總數）。卵泡直徑以切片中最大卵泡直徑計；卵泡成熟總數以每只大鼠單側卵巢切片中黃體數與成熟卵泡數相加之和計。

1.5.3 血清6-酮-PGF1a和TXB2測定

于給藥22天后，以 10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血2-3mL，離心分離血清。用放射免疫分析法測定6-酮-PGF1a和TXB2，嚴格按照試劑盒說明書操作。

3 統計分析

所有數據均采用Spss for windows（ver 13.0）軟件進行統計處理，組間兩兩比較用t檢驗，結果以均數（ ）±標準差（S）表示。

4結果

4.1 陰道脫落細胞檢查

空白對照組大鼠陰道涂片表現混亂 ，多數持續在動情間期，無周期性變化；補腎健脾方組大鼠則部分已表現出周期性，但尚不穩定。空白對照組涂片可見大量底、中層細胞，表層細胞較少，角化細胞所占比例小；補腎健脾方組、宮血停組涂片可見少量底層細胞，中、表層細胞多見，角化細胞所占比例較大；乙烯雌酚組涂片可見大量中表層細胞，角化細胞所占比例大。

4.2 各組大鼠子宮卵巢組織形態學變化

4.2.1 子宮組織形態學

肉眼觀察： 己烯雌酚組子宮輕度充血，明顯增粗。余組無明顯差別。

鏡下觀察：空白對照組子宮壁較薄，粘膜較薄，固有層結締組織較致密，腺體較少，腺腔小，上皮細胞呈柱狀，排列緊密，無明顯的分泌現象；補腎健脾方高、中、低劑量組及宮血停組子宮內膜多呈分泌期改變，表現為子宮內膜增厚，腺體數目增多，腺腔擴大，上皮細胞矮柱狀排列，可見核上或核下空泡態；己烯雌酚組子宮內膜增生相明顯，表現為子宮內膜明顯增厚，腺體增多、變大，上皮細胞高柱狀排列。（見附錄1 圖1-6）

4.2.2 卵巢組織形態學

肉眼觀察：己烯雌酚組卵巢略大，顏色略深，其余各組無明顯差別。

鏡下觀察：空白對照組可見較多原始卵泡、初級和次級卵泡，成熟卵泡較少見，偶見黃體。宮血停組可見各級卵泡，成熟卵泡略增，黃體增多。補腎健脾方低劑量組與空白組相似。補腎健脾方高、中劑量組可見各級卵泡，成熟卵泡略增，黃體明顯增多。己烯雌酚組可見各級卵泡，初、次級卵泡、成熟卵泡明顯增多，但少見黃體，顆粒細胞層明顯增厚。

5 討論

補腎健脾方能夠促進各級卵泡發育、成熟，排卵及黃體形成，能促進子宮內膜由增生期向分泌期轉變，并且能夠有效地調節血清前列腺素，提示其促卵泡發育及排卵的作用機理可能與調節下丘腦-垂體-卵巢性腺軸的功能及調節卵巢局部因子，改善卵巢微環境，擴張卵巢血管有關；通過促排卵，促進P分泌，使子宮內膜由增生期轉化為分泌期，從而達到止血的目的。