高脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立

【摘要】 目的：利用高脂、高能飼料建立肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型。方法：140只雄性SD大鼠，體質量100±10g。隨機抽取20只作為正常對照組，喂食普通飼料；剩余120只用于模型建立，喂食高脂、高能飼料。結果：O-N與OR-N組大鼠在喂養期間體重差距逐漸增大，至8w末，O-N組體重顯著高于OR-N組及正常對照組（P <0.01）；兩組ALT、TG均顯著升高（P <0.05），而O-N組大鼠血清TC、TG顯著高于OR-N組（P <0.05）；兩組肝重量、脂肪重量及脂體比、肝指數均顯著升高，O-N組肝重量、脂肪重量及體重均顯著高于OR-N組（P <0.05，0.01），但肝指數、脂體比間未見顯著差異；O-N組、OR-N組肝細胞內彌散大量脂肪空泡。結論：成功用高脂、高能飼料建立肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型，與人類發病特征相似，為肥胖與非酒精性脂肪的研究提供更有針對性的動物模型。

【關鍵詞】 肥胖抵抗；非酒精性脂肪肝；大鼠；動物模型

【中圖分類號】R589.2 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）09-0154-01

近年來，我國非酒精性脂肪肝（NAFL）的發病率呈上升趨勢，特別是由于飲食結構的不合理引起的肥胖與NAFL的相關性，已成為人們關注的熱點。但在非酒精性脂肪肝動物模型建立的研究中發現，同一品系、同一批大鼠飼用相同的高脂飼料，其中部分發生肥胖，部分不發生肥胖，前者被稱為肥胖傾向（obesity prone，OP），而后者被稱為肥胖抵抗（obesity resistance，OR）[1]，具體機制尚不十分清楚。為深入研究NAFLD的發病機制及肥胖與NAFLD的關系，建立符合人類自然發病規律的動物模型極為重要。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 實驗動物：清潔級雄性SD大鼠140只，體重（100g±10g），由第四軍醫大學實驗動物中心提供。

1.1.2 飼料主要成分：（1）高脂高能飼料：基礎飼料78.9%、膽固醇1%、膽酸鹽0.1%、蛋黃粉10%、豬油10%，能量密度為20.75 kJ/g；（2）基礎飼料為實驗動物標準飼料，能量密度為14.56 kJ/g。飼料均購自于第四軍醫大學實驗動物中心。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組與飼養：實驗前大鼠稱重，隨機抽取20只，作為正常對照組，剩余120只用于制備肥胖與肥胖抵抗型大鼠NAFL模型。兩組分別喂食普通飼料及高脂、高能飼料，連續8w后，按體重分為肥胖（O-N組）及肥胖抵抗組（OR-N組）。8w內動態觀察大鼠的一般情況、體質量變化，8w末每組隨機取8只，禁食12小時后眼球后靜脈叢取血，制備血清待測，結束后處死，取出腎周、睪周脂肪墊稱重，肝臟稱重并觀察病理形態變化。

1.2.2 肥胖與肥胖抵抗判定標準：體重大于正常對照組平均體重+1.96倍標準差的為O-N組，體重小于正常對照組平均體重+1.0倍標準差的為OR-N組[1，2]。

1.2.3 觀察指標及測定方法：（1）一般情況：實驗期間，每周稱大鼠體質量1次，并觀察毛色、食欲、行動、糞便、對外界刺激的反應情況；（2）病理組織學檢查：肉眼觀察大鼠肝臟大體變化，并作病理切片HE染色，光鏡下觀察大鼠肝臟脂肪變性情況。（3）血清生化指標：8周末每組隨機取8只大鼠，禁食12 h后眼球后靜脈叢取血，制備血清。采用日立7600-020型全自動生化分析儀檢測血清中谷丙轉氨酶（ALT）、總膽固醇（TC）、總三酰甘油（TG）（4）生理學指標觀察：肝指數（liver index）=肝臟重量（g）/體重（g）×100%；脂體比（%）=[睪周脂肪量（g）+腎周脂肪量（g）]/體重（g）×100%。

1.3 統計分析

所有數據以計量資料以 表示，應用SPSS 11.0軟件包進行統計分析。組間差異采用方差分析進行處理。P<0.05差異有顯著性，P<0.01差異非常顯著。

2 結果

2.1 一般特征

與正常組大鼠比較，造模組大鼠飲水和尿量均明顯增多，有些大鼠大便稀軟，排泄物異味重，體毛光亮度減退，毛色偏黃，活動減少。

2.2 大鼠體質量變化

每周稱大鼠體質量，動態觀察其體質量間的改變情況（表1）。挑出O-N組體質量增加最多的20只和OR-N組體質量增加最少的20只，作為觀察對象，發現不同時間點的體質量間的差別具有統計學意義（P<0.01）；多樣本均數的兩兩比較，結果顯示從第5周開始，O-N組體質量明顯升高，第6周開始O-N組與OR-N組和正常對照組之間均有顯著性差異（P<0.05），OR-N組與正常對照組間無顯著性差異。

2.4 對體脂含量及脂體比的影響

肉眼觀察，8w處死的正常對照組大鼠肝臟顏色呈暗紅；O-N組和OR-N組肝臟體積增大，包膜稍緊張，邊緣圓頓，局部呈奶黃色，有油膩感；光鏡下，正常組大鼠肝臟組織結構完整，基本無異常情況，O-N組和OR-N組可見彌散性肝細胞空泡變性，未見炎性變、壞死灶及肝纖維化，肝細胞腫脹明顯，胞質內充滿大量脂肪空泡。根據《非酒精性脂肪肝診斷標準》，確定非酒精性脂肪肝模型建立成功。

3討論

本實驗采用了高脂飲食誘導非酒精性脂肪肝大鼠模型的方法， 8周后大鼠血清生化檢查大鼠TG、ALT水平明顯高于正常組，肝指數升高，病理形態上形成脂肪肝，表明成功復制實驗性大鼠非酒精性脂肪肝模型。但在實驗期間，每周稱大鼠體質量，動態觀察其體質量間的改變情況，發現從第5周開始，O-N組體質量明顯升高，第6周開始O-N組與OR-N組和正常對照組之間均有顯著性差異，OR-N組與正常對照組間無顯著性差異。提示同樣喂食高脂、高能飼料，大鼠的體重出現明顯分化。

在實驗中發現26只SD大鼠喂高脂飼料18周后，其中有12只成為DIO-R大鼠[4]。本實驗在非酒精性脂肪肝模型造模過程中也發現了這一現象，造模成功后，O-N組大鼠為67只（55.8%），OR-N組為24只（20%）。

在以往的研究中，往往忽略了肥胖抵抗的現象，或將體重過低的動物放棄，本實驗將肥胖與肥胖抵抗發生的規律與非酒精性脂肪的建立相結合，利用其模型建立中均需高能、高脂飼料誘導的特性，成功地將非酒精性脂肪肝大鼠模型，在體重的差異上進行分類，從而建立肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型。該模型建立的成功，將有助于深入研究肥胖與非酒精性脂肪肝發生的關系及調控機制，并使研究更加有針對性，為尋找有效地防治措施提供實驗依據。

參考文獻

[1] Levin BE，Triscari J，Sullivan AC.Altered sympathetic activity during development of diet-induced obesity in rats[J].Am J Physio1，1983，244（3）：R347-355.

[2] 王舒然， 麻微微， 趙丹， 王國秀， 藺威鳴. 高脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗動物模型建立[J]. 中國公共衛生， 2007， 7（23）： 774-775.

[3] Lin HZ，Yang SQ，Chuckaree C，et a1.Metformin reverses fatty liver disease in obese leptin-deficient mice[J].Nature Medieine，2000，6（9）：998-1003.

[4]王從容，譚健，楊錫讓.高脂飼料誘發大鼠肥胖模型的建立及間接推測體脂法[J].北京體育大學學報，1994，17（3）：20-23.