特發(fā)性血小板減少性紫癜患者的血小板研究進(jìn)展

摘要：特發(fā)性血小板減少性紫癜是一組免疫介導(dǎo)的血小板過度破壞的出血性疾病，是臨床上最常見的出血性疾病，目前其發(fā)病機(jī)制和實(shí)驗(yàn)室診斷方法仍是國內(nèi)外研究重點(diǎn)，本文就其現(xiàn)有的特殊實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)作出綜述。

關(guān)鍵詞：ITP；實(shí)驗(yàn)室診斷；自身抗體；蛋白組學(xué)特發(fā)性血小板減少性紫癜(Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是一組免疫介導(dǎo)的血小板過度破壞的出血性疾病，以廣泛皮膚出血及內(nèi)臟出血、血小板減少、骨髓巨核發(fā)育障礙、血小板生存時間縮短及血小板膜糖蛋白特異性自身抗體出現(xiàn)為特征[1]。由于ITP早期并無特征性表現(xiàn)，且缺乏特異性的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，當(dāng)前， ITP的診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)和骨髓檢查 [2]。因此，ITP的早期診斷一直是醫(yī)學(xué)界的難題。近年來，國內(nèi)外學(xué)者試圖通過檢測ITP患者的血小板來研究建立ITP的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，而血小板蛋白組學(xué)方法更是近年來的研究熱點(diǎn)。本文擬就近幾年針對ITP患者血小板的最新研究作一綜述。

1ITP概述

ITP是臨床最為常見的出血性疾病， 歐美國家統(tǒng)計(jì)年發(fā)病率為(5～20)/10萬[2]，而我國目前尚缺乏準(zhǔn)確流行病學(xué)資料，其診斷依據(jù)（ICD-10）是：①廣泛出血累及皮膚、黏膜及內(nèi)臟；②多次化驗(yàn)血常規(guī)血小板計(jì)數(shù)減少；③脾臟不大或輕度增大；④骨髓巨核細(xì)胞數(shù)量增多或正常，伴有成熟障礙；⑤具備以下五項(xiàng)之中一項(xiàng)者：⑴潑尼松治療有效；⑵脾切除治療有效；⑶PAIg陽性；⑷PAC3陽性；⑸血小板生存時間縮短；⑥排除繼發(fā)性血小板減少癥。ITP的病因及發(fā)病機(jī)制迄今未明，目前研究多認(rèn)為其與體液免疫[2-4]、細(xì)胞免疫[5，6]有關(guān)。

2ITP患者的血小板抗體

50%~70%的 ITP患者血漿和血小板表面都可以檢測到血小板膜糖蛋白特異性的自身抗體。目前認(rèn)為自身抗體致敏的血小板被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)過度吞噬破壞是ITP發(fā)病的主要機(jī)制。正常血小板平均壽命為7~11d，而ITP患者血小板的壽命僅40~230min。因?yàn)槠⑴K含有大量的巨噬細(xì)胞，可產(chǎn)生高濃度的抗血小板抗體，且血流緩慢可阻留抗體被覆的血小板，因此脾臟成為血小板破壞的主要場所。肝臟和骨髓也是血小板破壞的場所。慢性ITP血小板破壞是由于抗血小板抗體與其相關(guān)抗原結(jié)合后，被巨噬細(xì)胞吞噬所致。急性ITP血小板破壞是由于病毒抗原吸附于血小板表面，并與相應(yīng)的抗病毒抗體結(jié)合，導(dǎo)致血小板被破壞。

2.1 ITP患者的血小板特異性自身抗體ITP被公認(rèn)為自身免疫性疾病，其患者體內(nèi)存在著針對血小板的特異性抗原的自身抗體，發(fā)現(xiàn)這些特異性抗體必然有助于ITP的診斷。但是，由于血小板自身固有的特性，血小板表達(dá)IgG的Fc受體(FcrR 1I型)在每個血小板上大約有1000~2000個，相對較大數(shù)量的非特異性結(jié)合抗體干擾血小板特異性抗體水平的檢測，使得特異性抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測的特異性低[8]。

近年來國內(nèi)外發(fā)展了一系列關(guān)于ITP血小板自身特異性抗體檢測的方法，其中以單克隆抗特異性俘獲血小板抗原試驗(yàn)（Monoclonal antibody immobilization ofplatelet antigen assay，MAIPA）為主要代表。MAIPA的原理是固相化的抗血小板單抗與血小板上相應(yīng)的抗原決定簇結(jié)合后能將后者固相化，然后加入酶標(biāo)記的另一種抗血小板抗體與固相化的血小板上相應(yīng)為點(diǎn)結(jié)合并顯色，顯色的深淺與血小板抗體的濃度呈正比[10]。MAIPA法檢測血小板特異性抗原特異性的自身抗體特異性較高，對于免疫性與非免疫性血小板減少的鑒別具有較大的意義，有助于ITP的診斷。王述文[11]等利用MAIPA法檢測了70例血小板減少性紫癜患者的自身抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)免疫性血小板減少患者顯著高于非免疫性血小板減少患者。王謙[12]等應(yīng)用改良MAIPA試驗(yàn)雙盲法檢測患者血小板膜糖蛋白特異性自身抗體，發(fā)現(xiàn)ITP患者血小板特異性抗體陽性率顯著高于非免疫性血小板減少患者，血小板特異性抗體水平與血小板數(shù)量呈負(fù)相關(guān)。

但是MAIPA仍存在不足之處，首先不能鑒別特發(fā)性血小板減少與繼發(fā)性免疫性血小板減少，如ITP與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合癥等的鑒別診斷；其次國內(nèi)外各實(shí)驗(yàn)室的方法有差異，未制定統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。因此MAIPA在臨床上的應(yīng)用仍受限制。

2.2 ITP患者的血小板相關(guān)抗體上世紀(jì)70年代，血小板相關(guān)免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin，PAIg）被認(rèn)為是ITP診斷和預(yù)后判斷的重要指標(biāo)。PAIg是病理性免疫反應(yīng)所產(chǎn)生的針對血小板膜糖蛋白II b/Ilia、Ib/IX、Ia/II a等抗原的自身抗體，其中以PAIgG最為常見。PAIgG的檢測分為直接法和間接法，直接法測定血小板PAIgG（包括血小板表面及血小板溶解液），間接法檢測血清中的PAIgG。PAIgG檢測方法繁多，如血小板懸浮免疫熒光試驗(yàn)、；125F葡萄球菌蛋白A試驗(yàn)等，其中發(fā)展較為成熟的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）及流式細(xì)胞技術(shù)，也是使用最多的PAIgG檢測技術(shù)。ELISA法運(yùn)用直接法測定PAIgG，血小板內(nèi)免疫球蛋白和血漿中免疫球蛋白濃度均對其產(chǎn)生影響，可檢出較多的非特異性抗體。近年來流式細(xì)胞術(shù)對于PAIgG的檢測陽性率雖高，但特異性太低，因此對ITP的診斷無實(shí)質(zhì)性意義[9]。

3ITP的血清蛋白組學(xué)

國內(nèi)外已將蛋白組學(xué)用于血小板減少性紫癜疾病中，血栓性血小板減少性紫癜的血清蛋白組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS-13）活性有關(guān)。Jin M[18]等采用SELDI-TOF-MS技術(shù)分析了16例患者，發(fā)現(xiàn)ADAMTS-13活性為（1.73±3.62）%，而39例健康者的ADAMTS-13活性為（92.5%±16.6）%，從而為血栓性血小板減少性紫癜的快速診斷提供了一種可借鑒的檢測方法。劉春燕等[19]也曾利用SELDI技術(shù)尋找到是質(zhì)荷比為4121.27 5327.56 5890.56的ITP的血清差異蛋白，但由于血清中高表達(dá)蛋白如白蛋白、球蛋白可能使其中低豐度表達(dá)蛋白受到抑制，使得其差異性蛋白運(yùn)用于ITP診斷的影響因素較多，為其診斷模型的建立帶來困難。

4ITP的血小板蛋白組學(xué)研究

在ITP的發(fā)病過程中，血小板膜抗原性發(fā)生改變是疾病的根本所在，而且血小板無細(xì)胞核，比其他有核細(xì)胞及血清的蛋白成分簡單。所以，ITP的血小板差異蛋白組學(xué)研究必將為ITP的實(shí)驗(yàn)室診斷研究掀開嶄新的一頁。Maguire PB 等[20]認(rèn)為蛋白組學(xué)作為基因組學(xué)的補(bǔ)充，血小板蛋白組學(xué)對于無核細(xì)胞-血小板生理病理功能的了解具有極其重要的作用。Ofer Eidelman 等[21]運(yùn)用質(zhì)譜在血小板蛋白裂解液中找到一組具有性別差別的低豐度信號肽，而這組性別差異的低豐度信號肽差異與女性和男性之間心血管疾病患病正相關(guān)。E. maurer-spurej等[22]運(yùn)用質(zhì)譜法分析血小板蛋白組學(xué)，發(fā)現(xiàn)灰色血小板綜合癥-Quebec血小板疾病患者血小板存在15種正常人沒有的蛋白質(zhì)，而正常人則有23種Quebec血小板疾病患者缺乏的蛋白質(zhì)，從而建立了第一個運(yùn)用血小板蛋白組學(xué)來診斷疾病的方法。

5展望

正如其它細(xì)胞一樣，血小板中蛋白質(zhì)的變化能為我們提供疾病的新的診斷和治療途徑。多年來ITP無確切的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，導(dǎo)致其在臨床上早期診斷存在困難，我國衛(wèi)生部曾就ITP的診斷問題在官網(wǎng)上公開招標(biāo)(500萬)課題以建立ITP的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，但至今仍無實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。ITP作為一種自身免疫性疾病，其血小板蛋白質(zhì)成分及數(shù)量必然存在一定的改變，但是現(xiàn)目前國內(nèi)外相關(guān)研究較少。因此，如何發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)的改變就成了我們今后的研究重點(diǎn)。血小板蛋白組學(xué)作為一門新興的蓬勃發(fā)展的學(xué)科必將為ITP的診斷掀開嶄新的一頁。表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS）可直接對血液、尿液、腦脊液、細(xì)胞裂解液等樣品進(jìn)行檢測，可發(fā)現(xiàn)和捕獲新的特異性疾病相關(guān)蛋白，從而探索疾病早期最微小的指征和征兆。因此，通過比較不同疾患者群血小板裂解液蛋白質(zhì)，可能篩選出ITP相關(guān)蛋白標(biāo)志物。

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編輯/哈濤