食品衛生微生物學檢驗菌落總數測定方法的效果分析

摘要：目的 比較分析在食品微生物學中檢驗菌落總數時用到的平板菌落計數法、菌落總數測試片法檢驗方法以及TTC培養基3種測定方法的檢測效果，以達到提高食品菌落總數檢驗的檢出率和靈敏度的目的。方法 對需要測定的153個樣品，按照國家相關標準采用標準平板菌落計數法、菌落總數測試片法檢驗方法和TTC培養基法進行培養，培養一段時間后記錄菌落檢出數。結果 在測定的153個樣品中，標準平板菌落計數法、菌落總數測試片法和TTC培養基法三種測定法中合格的份數分別為137、129、126，三中測定方法之間無顯著性差異（P＞0.05）。結論 三種測定方法進行食品微生物學檢驗，得到的效果相當，但是TTC培養基法的檢出率和靈敏度要明顯優于其他兩種測定方法。

關鍵詞：菌落總數檢驗；標準平板菌落計數法；菌落總數測試片法檢驗方法；TTC培養基法對食品中的細菌總數進行微生物學檢驗，目前常采用的方法主要有兩種，一種是測試紙片法，另一種是計數瓊脂傾注皿培養計數法[1]。然而在實際的檢測工作中，送檢樣品中常出現含有一些體積較小的沉渣和顆粒等物質，它們不容易被乳化，在傾倒瓊脂時常隨著培養基一起注于培養皿中，并夾雜在瓊脂深層，形態與細菌菌落類似，因此容易與細菌菌落發生混淆從而不利于準確檢測樣品中的菌落總數，對檢測結果造成一定影響。因此，在本研究中選取了標準平板菌落計數法、菌落總數測試片法檢驗方法和TTC培養基法（在計數培養基中加入0.5%的氯化三苯四氮唑，即TTC，作為染色劑，對菌落進行染色）3種方法對送檢的153個樣品進行細菌總數測定，比較3中方法的檢出效果，現報道如下。

1資料與方法

1.1測定材料

1.1.1平板計數瓊脂選用國內某廠家生產的處于有效期內的平板計數瓊脂培養基。

1.1.2菌落總數測試片選用國內某廠家生產的處于有效期內的菌落總數測試片。

1.1.3 TTC瓊脂按照體積比100:1的比例在瓊脂中加0.5%的氯化三苯四氮唑（TTC），的瓊脂中的TTC濃度為0.005%。

1.2測定樣品所有的153個測定樣品均來源于我中心所轄區域內的食品加工廠企業。

1.3方法

1.3.1平板標準平板菌落計數法1：10樣品母液的配制：首先準備一定數量的內盛有225ml磷酸緩沖液的三角瓶，瓶內預裝適當數量的玻璃珠，用滅過菌的無菌移液管吸取25ml待檢樣品，輕微振搖、混勻三角瓶內液體。1:100樣品母液的配制：用移液器吸取配制的1:10樣品母液1ml，沿著試管壁緩慢注入預先盛有9ml稀釋液的無菌試管中，輕微振搖、混勻試管內液體。以同樣的方法，配制1:1000，1:10000的樣品母液。注意在配置過程中，各個濃度梯度所用的無菌槍頭不能重復使用，以防止交叉污染。根據待檢樣品受到污染的程度，選擇1～3個適宜濃度的樣品母液，每個濃度梯度均吸取1ml樣品母液與無菌的培養皿中，同時取1ml樣品母液于兩個無菌的培養皿中作為空白對照。并立即將事先準備好的瓊脂培養基倒入無菌培養皿中，待瓊脂凝固后，在37℃條件下倒置培養48h。

1.3.2菌落總數測試片法將事先準備好的測試片置于水平臺面上，將紙片上附著的薄膜去掉，從上述4個濃度梯度的樣品母液中選取1～3個適宜濃度的母液，用移液器吸取1ml的樣品原液或者稀釋后的母液均勻地加至測試片的中間位置，并蓋上上蓋膜，靜置1min待培養基凝固，并用壓板的平板將紙片壓緊，使樣品分布均勻，每一個濃度梯度接種2片[2]。37℃條件下培養48h。

1.3.3 TTC培養基法吸取0.5%的TTC溶液1ml于100ml瓊脂培養基中，制成0.005%的TTC瓊脂培養基，其余接種步驟和培養方法同平板標準平板菌落計數法。

1.4統計學方法采用SPSS 17.0 軟件包對數據進行分析，計量資料采用χ2檢驗，P＜0.05為具有統計學差異。

2結果

標準平板菌落計數法、菌落總數測試片法檢驗方法和TTC培養基法三種測定法中合格的份數分別為137、129、126，TTC培養基法與標準平板菌落計數法和菌落總數測試片法相比，檢出的菌落數均不存在統計學差異（P＞0.05）。見表1。

3討論

隨著人們生活水平的改善，食品安全問題也越來越受到人們的重視，特別是近年來我國食品安全問題多發，更將食品衛生問題推到了風口浪尖之上。食品在加工、貯存、運輸過程中都有可能接觸到各種微生物，從而導致食品變質，給人的身體埋下重大健康隱患。因此，對食品中的微生物數量進行檢測是十分必要的，摸索探究微生物檢測的新手段也具有十分重要的意義。

本研究中，TTC培養基法菌落與標準平板菌落計數法和菌落總數測試片法相比，檢出率較高。這主要是因為部分細菌體積小或者生長于瓊脂內部，用肉眼難以觀察到，從而導致計數不準確。由于大多數細菌都含有脫氫酶，TTC作為一種氫受體可以接受脫氫酶脫下的氫，并且顏色由白色變成紅色，從而可以達到對細菌進行染色的目的，有利于檢驗人員準確有效地對細菌菌落數進行觀察和計數。在本研究中，運用3種方法檢測食品中的菌落總數，差異不具有統計學意義，這說明TTC培養基法能夠特異地使細菌著色而食品殘渣仍然保持原來的顏色不變，并且對細菌的生長情況也不會產生影響，便于菌落的鑒別。

綜上所述，TTC培養基法檢測食品中的菌落總數具有速度快、靈敏度高的優點，值得廣泛推廣。

參考文獻：

[1]Turner KM．Efficacy of chromocult coliform agar for coliform and escherichia coil detection in foods［J］．J Food Port，2002，63(4)：539-547.

[2]Gunasekera TS，Attfield PV，Veal DA.A flow cytometry method for rapid detection and enumeration of total bacteria in milk［J］．Appl Environ Microbiol，2000，66(3)：1228-1232．

編輯/哈濤