EphA4在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

摘要：目的 檢測(cè)EphA4mRNA在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(dá)，并分析其生物學(xué)特性及臨床意義。方法 應(yīng)用real-time RT-PCR法檢測(cè)60例乳腺癌和10例乳腺良性病變中EphA4mRNA的相對(duì)含量，并分析其與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果 乳腺癌組織中EphA4mRNA表達(dá)水平明顯高于乳腺良性病變（P<0.05），其表達(dá)水平與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，而與患者的年齡、腫瘤體積、病理組織學(xué)類型無顯著相關(guān)（P>0.05）。結(jié)論 EphA4可能促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，有助于幫助評(píng)估乳腺癌的生物學(xué)行為，指導(dǎo)臨床用藥。

關(guān)鍵詞：EphA4mRNA；乳腺癌；RT-PCR

中圖分類號(hào)：R737.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，且轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率很高，尋找更好的與預(yù)后有關(guān)的分子標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)是治療乳腺癌的新思路。Eph受體酪氨酸激酶（erythropoietin producing hepatoma cell line）和它們的ephrin配體形成獨(dú)特的細(xì)胞-細(xì)胞接觸介導(dǎo)的雙向信號(hào)機(jī)制來調(diào)節(jié)細(xì)胞的定位和組織構(gòu)成。有研究資料顯示Eph家族蛋白與腫瘤的發(fā)生和腫瘤血管的形成有關(guān)[1-2]。本研究采用RT-PCR法檢測(cè)EphA4mRNA在乳腺腫瘤中的表達(dá)，并進(jìn)一步分析其與乳腺癌的生物學(xué)行為之間的關(guān)系，為臨床治療乳腺癌提供更有效的方案。

1資料與方法

1.1一般資料 收集我院2010年1月～2012年12月行乳腺癌改良根治術(shù)的新鮮手術(shù)切除標(biāo)本60例，置于裝有Trizol的離心管內(nèi)，液氮中保存。患者均為女性，年齡32～65歲，中位年齡52.5歲。其中導(dǎo)管內(nèi)癌6例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌46例，浸潤(rùn)性小葉癌8例。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例。臨床分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期33例、Ⅲ期11例、Ⅳ期6例。以10例乳腺良性病變（乳腺纖維腺瘤及乳腺腺病）作為對(duì)照組。

1.2 EphA4mRNA的檢測(cè) Real-time RT-PCR法檢測(cè)乳腺癌中EphA4mRNA的表達(dá)，EphA4/GAPDH灰度比值代表目的基因EphA4mRNA的表達(dá)水平。Trizol試劑及RT-PCR試劑盒均購(gòu)于美國(guó)Invitrogen公司，PCR引物和探針由上海生工生物工程有限公司合成。EphA4基因上游引物序列為5，-CCTGGTGAACAGCAACTT-3，，下游引物序列為5，-CACTTCCCACATAACGATT-3，，產(chǎn)物長(zhǎng)度196bp，熒光探針5，-（FAM）CCTCAAGCACTCGGGACATGCCAA（Eclipse）-3，；GAPDH基因上游引物序列為5，-CCAGGTGGTCTCCTCTGACTT-3，，下游引物序列為5，-GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3，，產(chǎn)物長(zhǎng)度130bp，熒光探針5，-（FAM）AACAGCGACACCCACTCCTCCACC（Eclipse）-3，。將各例乳腺癌及乳腺良性病變組織在分別在液氮中研碎，加入Trizol試劑勻漿器中勻漿30 s，按照說明書步驟提取組織RNA，分光光度儀測(cè)定A值260 nm/280 nm，記錄其濃度，單位為ng/μl。根據(jù)說明書配制成20 μL反應(yīng)體系，反應(yīng)在7900HT Fast Real-time PCR System儀上進(jìn)行，設(shè)定每個(gè)PCR循環(huán)包括：95℃ 30 s，55℃（EphA4）或58℃（GAPDH）退火30 s，72℃延伸60 s，共40個(gè)循環(huán)。

1.3結(jié)果判定 EphA4mRNA在60例乳腺癌中表達(dá)的相對(duì)含量與10例乳腺良性病變含量的均值相比較，比值<1.5記為\"-\"，在1.5～2記為\"+\"，>2記為\"++\"。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，EphA4mRNA的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系采用Pearson χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)取P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

EphA4mRNA經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增后在60例乳腺癌標(biāo)本中均檢測(cè)出表達(dá)，其相對(duì)含量平均比值為（0.83±0.12），在乳腺良性病變中的相對(duì)含量平均比值為（0.21±0.09），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。EphA4mRNA的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系，見表1。EphA4mRNA的表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P<0.05），而與年齡、腫瘤大小及病理類型無關(guān)（P>0.05）。

3討論

酪氨酸激酶途徑是一條重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可有效地將外界刺激信息傳遞至細(xì)胞核。在對(duì)人類多種腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，酪氨酸激酶及其受體與腫瘤的增殖、凋亡、黏附、遷移和血管生成相關(guān)[3]。EphA4/ephrin作用體系，通常以較低的水平表達(dá)于成人各種上皮細(xì)胞中，能夠潛在激活雙向信號(hào)傳導(dǎo)通路和細(xì)胞效應(yīng)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增生、遷移、變形和粘附等，影響腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，而且還可能與腫瘤的血管生成有關(guān)[4]。以往的研究發(fā)現(xiàn)在前列腺癌和胰腺癌組織中，有EphA4受體的高表達(dá)[5]，并與胃癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)[6-9]。本研究檢測(cè)EphA4基因在乳腺腫瘤中的表達(dá)，結(jié)果顯示EphA4mRNA在乳腺癌中的表達(dá)明顯高于乳腺良性病變（P<0.01）。EphA4mRNA的表達(dá)與乳腺癌的不同組織學(xué)分級(jí)，臨床分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05），有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)率顯著高于腋窩淋巴結(jié)陰性者，臨床分期晚者陽性表達(dá)率顯著高于臨床分期較早者。EphA4mRNA的表達(dá)隨著乳腺癌的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期的增高及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而增高，提示EphA4在腫瘤中的高表達(dá)可能與乳腺癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

綜上所述，EphA4在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。進(jìn)一步研究EphA4在乳腺癌中的作用機(jī)制，為乳腺癌的早期診斷、臨床治療和預(yù)后提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]De Mejia EG，Dia VP.The role of nutraceutical proteins and peptides in apoptosis，angiogenesis，and metastasis of cancer cells[J].Cancer Metastasis Rev，2010，29（3）：511-528.

[2]鄭慶峰，柳碩巖，王海燕，等.EphB4及其配體EphrinB2在食管鱗癌中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系[J].中國(guó)腫瘤臨床，2013，40（10）：579-582.

[3]Tandon M，Vemula SV，Mittal SK.Emerging strategies for EphA2 receptor targeting for cancer therapeutics[J].Expert Opin Ther Targets，2011，15（1）：31-51.

[4]Giorgio C，Hassan Mohamed I，F(xiàn)lammini L，et al.Lithocholic acid is an Eph-ephrin ligand interfering with Eph-kinase activation[J].PloS One，2011，6（3）：e18128.

[5]Liizumi M，Hosokawa M，Takehara A，et al.EphA4 receptor，overexpressed in pancreatic ductal adenocarcinoma，promotes cancer cell growth[J].Cancer Sci，2006，97（11）：1211-1216.

[6]Duxbury MS，Ito H，Zinner MJ，et al.EphA2：a determinant of malignant cellular behavior and a protential therapeutic target in pancreatic adenocarcinoma[J].Oncogene，2004，23（7）：1448-1456.

[7]Oki M，Yamamoto H，Taniguchi H，et al.Overexpression of the receptor tyrosine kinase Epha4 in human gastric cancer[J].World J Gastroenterol，2008，14（37）：5650-5656.

[8]王慶元，張謝夫，趙春臨，等.EphA4在胃癌組織中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2010，50（7）：26-28.

[9]蘇玲，張標(biāo)，曹曉蕾.EphA4基因在胃癌中的表達(dá)及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系[J].交通醫(yī)學(xué)，2009，23（5）：468-470.編輯/張燕