γ—干擾素對結核性胸膜炎輔助診斷價值的比較

摘要：目的 檢測結核性胸膜炎及惡性胸膜炎患者胸液的γ-干擾素水平， 探討對結核性胸膜炎診斷的臨床價值。方法 采用酶聯免疫吸附法（ELISA） 檢測32例結核性胸膜炎、28例惡性胸膜炎患者胸液γ-干擾素水平。結果 結核性胸膜炎患者胸液中含量（430.5±30.87pg/ml）明顯高于惡性胸膜炎組（45.6±18.6pg/ml）（P<0.01），γ-干擾素作為診斷結核性胸膜炎的敏感性、特異性、準確性分別為100.0%、92.5%、96.8%。結論 檢測胸液中γ- 干擾素對診斷結核性胸膜炎有較大的輔助意義。

關鍵詞：結核；胸膜炎；γ-干擾素

臨床上胸腔積液多見，但由于引起胸腔積液的病因眾多，盡管臨床上采用了多種診斷方法，但仍有20%胸腔積液存在病因診斷問題[1]。臨床上常見的是結核性胸膜炎與惡性胸膜炎，前者最可靠的診斷依據是胸水結核分支桿菌檢測和胸膜活檢病理檢查，陽性率為8～25%和40～75%[2]，目前世界上有1/3的人有結核分枝桿菌感染， 而且其中大約10%會發展成活動性結核[3]。但是沒有一種試驗可以做為診斷結核分枝桿菌感染的金標準。近年來， 分子生物學技術迅速發展，如PCR、核酸探針等提供了快速診斷技術， 陽性率為60～80%[4]。但仍存在著假陽性及技術等方面問題。近年來，有一類用于診斷結核分枝桿菌感染的新方法進入了人們的視線，即γ-干擾素釋放試驗（interferon gamma releaseassay，IGRA），其對應的方法和試劑盒先后被美國FDA 批準應用于臨床，CDC為其指定了使用指南[5]。已有文獻報道[6]IFN-γ在結核性胸膜炎胸水中含量明顯增多，而惡性胸液含量很低。因此， 檢測胸液中IFN-γ、可能有助于結核性胸膜炎的診斷。本研究中對結核性胸膜炎和惡性胸膜炎患者的胸液中的IFN-γ水平進行檢測， 探討其臨床診斷價值。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1結核性胸膜炎組 32 例， 男18 例、女14例。年齡18～ 72 歲， 均為診斷明確的本所住院患者。診斷標準為：①有結核中毒癥狀；②伴有肺部結核病灶；③胸液為滲出性改變；④結核治療2～4w有效， 且胸液吸收較快；⑤痰涂片或培養結核菌陽性；⑥胸膜活組織檢查病理有典型的結核病變；⑦胸水中找到結核菌。本組具有前5 項32例，后2項1例。

1.1.2惡性胸膜炎組 28例，男15 例，女13 例。年齡38～75歲，均經病理學或細胞學檢查明確的惡性胸膜炎患者。

上述檢測對象均采用胸液， 離心（ 4000r/min）10min， 取上清液分裝，置-20℃保存備用。

1.2試劑 IFN-γ檢測試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司。

1.3檢測方法 采用ELISA 方法， 嚴格按試劑盒所附的說明進行操作， 具體步驟：①設標準曲線的IFN-γ、（1000，500，250，125，62.5，31.25，15.6，0pg/ml）；②加入已按要求倍數稀釋的IFN-γ標準液和標本100ul 至相應孔內； 用封板膠紙封住反應孔，37℃ 90min或120min；③按洗板方法洗板；④除空白孔外， 每孔加按說明要求稀釋的生物素標記的二抗100ul，封住板孔，37℃90min；⑤按洗板方法洗板；⑥除空白孔外， 每孔加按說明要求稀釋的酶聯物100ul，封住板孔， 37℃30 min；⑦按洗板方法洗板；⑧每孔加底物A、B 各50ul， 避光8～15 min， 視具體顯色情況靈活掌握；⑨每孔加終止液50ul， 即刻在450nm 酶標儀測定標本的吸光度， 畫出標準曲線， 由標準曲線算出標本的IFN-γ和水平（r=0.996～0.998） 。

1.4統計學處理 實驗結果用pg/ml 表示， 先行方差齊性分析， 然后兩樣本均數比較用t檢驗， 并對兩樣本的關系作直線相關分析。

3討論

我國是全球22個結核病高負擔國家之一。全國第五次結核病流行病學抽樣調查顯示，結核病年發患者數約130萬，占全球發患者數的14.3%，位居全球第二位[7]。早期準確地診斷有助于控制結核病疫情。結核分枝桿菌（mycobac teriumtuberculosis，MTB）可侵犯全身各系統導致結核病，尤其是肺外結核往往病變部位隱匿，臨床表現多樣，難以早期準確診斷。MTB培養陽性是診斷結核病的金標準，但耗時長且敏感性低；結核菌素皮試（tuberculinskintest，TST）廣泛用于診斷結核病，但PPD與非結核分枝桿菌（nontuberculosismycobacteria，NTM）和BCG成分交叉，易致\"假陽性\"，因此，在普遍接種BCG地區如我國，對TST陽性結果的解釋應當慎重。近年來，一種診斷結核感染的免疫學新方法---γ干擾素釋放分析（interferon γreleaseassay，IGRA）逐漸被推廣并應用于臨床。

干擾素（IFN-γ） 為主要由T 淋巴細胞和大顆粒淋巴細胞在一定的刺激原作用下，產生的一種多功能調節蛋白。結核性胸液以淋巴細胞為主，且依賴T 細胞發揮細胞免疫作用。在結核分支桿菌抗原（如PPD） 的刺激下，產生高濃度的IFN-γ[8]，而外周血含量很低。可能說明結核性胸膜炎的局部細胞免疫功能增強。本研究結果表明，結核性胸膜炎組胸液中IFN-γ水平均明顯高于惡性胸膜炎組，具有非常顯著的統計學意義（P<0.01），且胸液與血清水平無相關性，說明其局部細胞免疫功能增強。而胸液IFN-γ含量>120pg/ml 為臨界值（cu-t off），其敏感性、特異性分別達100.0%、92.5%，對于結核性胸膜炎的診斷臨床上采用多項指標聯合檢測，如ADA、LAM-IgG 等輔助手段。同時， 也說明胸液中IFN-γ檢測，對結核性胸膜炎的診斷又提供了一項輔助手段， 具有一定的臨床意義。我們還同時觀察了IFN-γ與胸水量、伴有肺內病變程度關系， 隨著胸水量增多IFN-γ有增高的趨勢，但統計學無差別；而在肺內受損嚴重的患者，IFN-γ水平增高與無肺內病灶比較P<0.05，提示不同程度的IFN-γ增高可能與肺內病變的受損程度有關，其機制有待于進一步研究。

參考文獻：

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[7]中華人民共和國衛生部.衛生部召開新聞發布會介紹全國肺結核疫情現狀.http：//www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohjbyfkzj/s3590/201103/51027.htm

[8]Shimokata K， kawachi H，Kishimoto H， et al.Local cellular immunityin tuberculous pleurisy[J]. Am Rev Respir Disease，1982，126（8）：822-834.

編輯/孫杰