心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭苽浞椒ㄑ芯窟M(jìn)展

摘要：心血管疾病是人類(lèi)病死率最高的疾病之一，而缺血性心肌病在其中起主導(dǎo)作用[1-2]。有關(guān)心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭苽浞椒ǖ难芯考喝〉靡欢ㄟM(jìn)展，但與臨床心肌缺血的病理過(guò)程還有一定的差異。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇，制備模型的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，特別是心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷臉?biāo)準(zhǔn)尚有待進(jìn)一步統(tǒng)一和制定。借助放射影像學(xué)介入技術(shù)，在不開(kāi)胸的前提下，經(jīng)心導(dǎo)管制備心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停蚱渚哂兄T多優(yōu)點(diǎn)，將成為今后研究的一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。

關(guān)鍵詞：心肌缺血；動(dòng)物模型；模型制備

本文實(shí)驗(yàn)研究已制備了多種心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停缢幬镒⑸浞椒?，冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法，這些均是借助物理、化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法使血管急性阻塞，造成心肌急性缺血，藥物注射方法都是一過(guò)性的，對(duì)慢性試驗(yàn)難以適合，冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法臨床相關(guān)性好，是一個(gè)比較理想的心肌缺血模型，但此模型需要復(fù)雜的開(kāi)胸手術(shù)，對(duì)動(dòng)物損傷大。因此，為提高該病的臨床療效，為心肌缺血的臨床和實(shí)驗(yàn)研究提供一個(gè)更加合適的研究平臺(tái)，急需有待建立一種更加符合臨床病理生理過(guò)程，適合能多次給藥與能長(zhǎng)期觀(guān)察心功能的心肌缺血模型。因此本文對(duì)目前心肌缺血模型制備的方法學(xué)進(jìn)行綜述，旨在為臨床應(yīng)用提供參考，具體報(bào)道如下。

1 藥物法

1.1垂體后葉素（Pit）致動(dòng)物心肌缺血模型 王怡等采用與實(shí)驗(yàn)前1d，以0.35U/Kg的劑量，舌下靜脈注射濃度為1U/2mL 垂體后葉素Pit的方法，通過(guò)心電圖變化，對(duì)動(dòng)物經(jīng)行Pit敏感性篩查， T波明顯抬高，ST段抬高超過(guò)0.1mv 的大鼠方可用于實(shí)驗(yàn)。合格的大鼠，灌胃給藥后，采用腹腔注射3% 戊巴比妥納（30 mg/kg）麻醉處理，仰位固定，通過(guò)多道生理記錄儀，對(duì)Ⅱ?qū)?lián)心電圖經(jīng)行動(dòng)態(tài)描記，正常者舌下靜脈注Pit 0.35 U/kg，于5s內(nèi)完成，觀(guān)測(cè)3h內(nèi)生理指標(biāo)如：①觀(guān)察動(dòng)態(tài)心電圖變化；②心臟取血，檢測(cè)各項(xiàng)生化指標(biāo)如CK、SOD、LDH、MDA。結(jié)果顯示：模型組大鼠注射Pit后，第1期心電圖即可發(fā)生變化：T波即刻顯著抬高，15s時(shí)達(dá)到最高峰，注射Pit 1min后，第2期心電圖發(fā)生變化：T波出現(xiàn)低平、雙相、倒置，心率變慢，Q-T及P-R間期延長(zhǎng)等，生化指標(biāo)LDH、CK、MDA升高，而SOD下降。

1.2異丙腎上腺素（Iso）致動(dòng)物心肌缺血模型 高光華等選用健康純系Wistar大鼠，給予腹腔內(nèi)注射ISO 0.5mg·kg-1·d-1，共2次，檢測(cè)下列指標(biāo)：①心動(dòng)圖；②超氧化物歧化酶MDA、SOD；③病理組織學(xué)心肌TTC染色； 結(jié)果以T波高聳，S-T段抬高，MDA升高，SOD降低，NO降低。張騰等選用4% Iso，給大鼠皮下注射50mg/kg，共2次，檢測(cè)下列指標(biāo)：①心動(dòng)圖；②心肌酶CK，LDH；③病理組織學(xué)心肌TTC染色； 結(jié)果以T波高聳，S-T段抬高，CK，LDH都升高。

2 冠狀動(dòng)脈結(jié)扎方法

2.1借助呼吸機(jī)經(jīng)氣管切開(kāi)插管 高秀梅等選用（200±50）g雄性大鼠，采用3%戊巴比妥鈉按照30mg/kg的劑量腹腔注射經(jīng)行麻醉處理，仰位固定，連接心電圖，觀(guān)察記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖，在無(wú)菌條件下，充分顯露氣管，與第2～3氣管環(huán)間橫行切開(kāi)，插氣管插管，深度約為0.5～1cm。通過(guò)呼吸機(jī)經(jīng)行人工控制呼吸，頻率控制在90次/min，潮氣量10～12ml，呼吸比為1：1，于胸骨第3～4肋問(wèn)切開(kāi)皮膚約1cm，將組織逐層分離，于2～3肋骨間開(kāi)胸，暴露心臟及大血管根部，剪開(kāi)心包，將心臟擠出，取LAD起始部，用6-0 Prolene線(xiàn)縫針，進(jìn)針深度控制在0.1cm，寬度為0.1～0.2cm；將心臟回置胸廓內(nèi)，待經(jīng)歷數(shù)十次心動(dòng)周期后，結(jié)扎處理，數(shù)分鐘后，徹底止血后逐層關(guān)胸。恢復(fù)大鼠自主呼吸，氣管切口及頸部切口開(kāi)放，不作縫合。手術(shù)過(guò)程中分別與開(kāi)胸后、縫針后、結(jié)扎后和關(guān)胸后四個(gè)點(diǎn)觀(guān)察記錄心電圖變化；合格動(dòng)物于第2w與第6w后復(fù)查心電圖。術(shù)后連續(xù)5d抗感染治療。檢測(cè)下列指標(biāo)：①動(dòng)態(tài)觀(guān)察心電圖變化；②各項(xiàng)生化指標(biāo)（LDH、CK、MDA、SOD）；③病理組織學(xué)心肌TTC染色。結(jié)果顯示：大鼠結(jié)扎LAD 10min后 ST 段明顯抬高（≥0.1mv），大鼠結(jié)扎LAD21h 后壞死面積高60.35%，21h后心臟取血以檢測(cè)得出LDH、CK、MDA升高，SOD下降。

2.2借助呼吸機(jī)經(jīng)口鼻氣管插管 李貽奎等在結(jié)扎LAD時(shí)，其他操作同上，只是把上面的氣管切開(kāi)后氣管插管接呼吸機(jī)改為經(jīng)口插管，不作氣管切開(kāi)，優(yōu)點(diǎn)：操作對(duì)動(dòng)物損傷小，術(shù)后對(duì)動(dòng)物影響小，降低死亡率。但此法應(yīng)用報(bào)道的比較少，且經(jīng)口插管時(shí)，操作有難度，不易把握。

2.3不使用呼吸機(jī)直接開(kāi)胸法 韓燕全在不借助呼吸機(jī)的情況下，結(jié)扎LAD時(shí)，直接于左第4肋間開(kāi)胸暴露心臟，距LAD起點(diǎn)2～3mm處，穿5個(gè)0手術(shù)線(xiàn)結(jié)扎，閉胸。結(jié)扎LAD后心電圖顯示ST段立即抬高、局部心肌紫紺的大鼠為模型成功。此操作技術(shù)較高，開(kāi)胸后10s左右就要把心臟結(jié)扎好放回心腔，然后迅速把心腔的空氣擠出縫合心腔。此法對(duì)手術(shù)操作者要求很高，要達(dá)到快、準(zhǔn)，對(duì)初學(xué)者不適用。

3 冠狀動(dòng)脈內(nèi)栓塞方法

Terp等以Minipig為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，常規(guī)麻醉處理，氣管插管，呼吸機(jī)控制通氣，采用介入技術(shù)，將2mL含有Sephadex D25光滑微球濃度為2.5g/L的鹽水溶液，經(jīng)皮穿刺導(dǎo)管經(jīng)主動(dòng)脈根部進(jìn)入LCX和LAD，觀(guān)察左心室射血分?jǐn)?shù)、超聲心動(dòng)圖及心肌病理組織學(xué)等指標(biāo)，結(jié)果：2～3w后，模型動(dòng)物左心室射血分?jǐn)?shù)明顯減少，出現(xiàn)心肌梗死灶，左心室容積縮小。

4 機(jī)械壓迫冠狀動(dòng)脈方法

4.1 Ameroid 收縮環(huán)法 Laham等采用Yorkshire豬，無(wú)性別限制，氯胺酮聯(lián)合氟烷麻醉，為方便血壓檢測(cè)與取樣，切開(kāi)右腿彎部，于4F動(dòng)脈導(dǎo)管插管。與第4肋間隙行術(shù)開(kāi)胸，切開(kāi)心包，分離左冠狀動(dòng)脈回旋支，放置Ameroid收縮環(huán)（內(nèi)徑：2.5mm），聚丙烯紡織纖維線(xiàn)（6號(hào)）縫合心包與胸腔，視動(dòng)物生理情況經(jīng)行肌注抗生素和止痛藥處理，3w后采用心包內(nèi)注射成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2進(jìn)行治療，第5w檢測(cè)如下指標(biāo)：①微球流量；②冠狀動(dòng)脈造影；③病理組織學(xué)；④磁共振掃描；⑤毒理學(xué)。結(jié)果顯示：模型動(dòng)物冠狀動(dòng)脈血流量減少，LCX支配區(qū)域的心室壁厚度增加，F(xiàn)GF-2能明顯促進(jìn)冠狀動(dòng)脈側(cè)枝循環(huán)的形成，增加冠狀動(dòng)脈血流量。

4.2 Delran收縮環(huán)法 James等選用Minipig，常規(guī)麻醉，氣管插管，呼吸機(jī)控制通氣，開(kāi)胸，分離LAD和LCX，兩動(dòng)脈分別放置Delran收縮環(huán)（內(nèi)徑1.5mm），進(jìn)行下列指標(biāo)檢查：①超聲心動(dòng)圖觀(guān)察；②血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定；③冠狀動(dòng)脈造影；④病理組織學(xué)觀(guān)察；⑤SR蛋白Westerm分析；模型動(dòng)物的兩冠狀動(dòng)脈近端因栓塞從而造成局部功能失常，導(dǎo)致射血分?jǐn)?shù)降低，同事伴有左心室功能下降，出現(xiàn)冬眠心肌反應(yīng)典型癥狀，模型動(dòng)物平均經(jīng)過(guò)69～75d栓塞后便可成功造模。

5 電刺激法

電刺激法是目前造成動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性心肌缺血一種較新的造模方法。實(shí)驗(yàn)多選用成年的雄性家兔，麻醉處理后，將連有定向儀的兩支絕緣的不銹鋼針插入右側(cè)下丘腦背內(nèi)側(cè)核，以弱、強(qiáng)刺激交替的方法刺激（弱刺激為0.8～1.6mA，強(qiáng)刺激為4～8Ma），刺激5min/次，間隔1～3min。

在選擇制備急性心肌缺血模型時(shí)，我們一般選擇藥物舌下注射法，這種方法操作簡(jiǎn)單，但是一過(guò)性的。一般慢性心肌缺血模型，我們選擇大鼠冠脈結(jié)扎法比較多見(jiàn)，這種方法動(dòng)物來(lái)源方便，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，臨床相關(guān)性比較好。若條件允許，可以以Minipig作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，因其心臟解剖結(jié)構(gòu)及側(cè)枝循環(huán)與人類(lèi)十分相似，動(dòng)脈口徑大，導(dǎo)管介入簡(jiǎn)單易行，且凝血因子和纖溶活性與人的相近程度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

綜上所述，有關(guān)心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭苽浞椒ǖ难芯考喝〉靡欢ㄟM(jìn)展，但與臨床心肌缺血的病理過(guò)程還有一定的差異。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇，制備模型的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，特別是心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷臉?biāo)準(zhǔn)尚有待進(jìn)一步統(tǒng)一和制定。借助放射影像學(xué)介入技術(shù)，在不開(kāi)胸的前提下，經(jīng)心導(dǎo)管制備心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停蚱渚哂兄T多優(yōu)點(diǎn)，將成為今后研究的一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。

參考文獻(xiàn)：

[1]張玲， 龍子江， 王靚，等. 雙丹注射液對(duì)急性心肌缺血模型大鼠心電圖與血清酶的影響[J].中藥藥理與臨床， 2006， 22（6）： 55-57.

[2]唐宏圖， 吳松， 陳澤斌， 等.\"雙固-通\"針?lè)▽?duì)老年實(shí)驗(yàn)性急性心肌缺血模型大鼠Mg2+-ATPase的影響[J]. 海針灸雜志， 2006， 25 （7）：45-47.

編輯/哈濤