陰道細菌臨床檢驗方法的分析與比較

摘要：目的 比較三種不同檢驗方法對陰道細菌的陽性檢出率。方法 采集本院收治的86例陰道疾病患者的陰道分泌物，分別采取細菌培養法、革蘭染色法及PCR法檢驗陰道分泌物，并將檢驗結果進行對比分析。結果 革蘭染色法檢驗總陽性檢出率為75%，PCR法檢驗總陽性檢出率為97.06%；PCR法檢驗結果與細菌培養法無統計學差異性，P>0.05；革蘭染色法檢驗結果與細菌培養法有統計學顯著性差異，P<0.01；PCR法與革蘭染色法有統計學明顯性差異，P<0.05。結論 PCR檢驗法具有較高的陽性檢出率，且操作簡便快捷，能夠滿足臨床診斷需要，可于陰道細菌臨床檢驗工作中推廣應用。

關鍵詞：陰道細菌；細菌培養；PCR；革蘭染色法

正常健康女性的陰道內各定植菌群保持著相對平衡狀態，當自身抵抗力下降或者陰道內環境發生改變時，各菌群數量隨之改變而出現比例失衡，從而導致陰道炎的發生[1]。陰道炎是婦科臨床中一種最為常見的感染性炎癥疾病，如炎癥上行感染可導致異位妊娠、急慢性盆腔炎及不孕癥等嚴重疾病[2]。我院對陰道疾病患者的分泌物以3種不同的檢驗方法進行檢驗，以分析出最具有臨床適用性的檢驗方法，現將詳細情況總結如下。

1資料與方法

1.1一般資料 以本院2013年1月～3月收治的86例陰道疾病患者作為本院研究資料。年齡為21～48歲，平均（28.63±4.26）歲；全部患者均有明顯陰道炎臨床表現，并伴有不同程度的陰道瘙癢，陰道內均可見大量白帶分泌物。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采集全部患者的陰道分泌物后分別采取A-細菌培養法、B-革蘭染色法及C-PCR法進行檢驗。全部患者均取截石位，在無菌陰道鏡下顯示宮頸，于陰道后穹窿處，以無菌棉簽沾取分泌物，準備好已置入無菌生理鹽水的檢驗試管，將取得的分泌物移入試管中。

1.2.2細菌培養方法 取出試管中的陰道分泌物樣本，于無菌條件下使用無菌接種環將其接種至細菌分離專用培養基上，置入二氧化碳培養箱，于35℃條件下孵育48 h，擇取光滑、半透明、灰色的滴露狀菌株依據生化鑒定標準行生化檢驗。

1.2.3革蘭染色方法 以95%乙醇溶液浸泡清潔玻片，拭干備用；取試管中的陰道分泌樣本均勻涂于玻片上，于醫用顯微鏡下對涂片進行檢驗分析。

1.2.4 PCR方法 提取500 μL試管中的陰道分泌物樣本放入至生理鹽水中，以12000 r/min速度離心 10 min后去清除上清液，加入帶有適當堿性的裂解液，于98℃溫度下加熱10 min，以12000 r/min速度再次離心5 min，取上清液制備為DNA模板。進行PCR細菌檢驗陰性與陽性對比時，選取與陰道分泌物DNA模板相同的PCR試劑，將無添加物的DNA作為陰性組，添加了DNA模板后的PCR擴容作為陽性組。將兩組進行對比分析，檢查 PCR的產物與擴容情況，自總體積當中取得25 μL引物、模板、緩沖液及離子水，以無菌石蠟油30μl將其覆蓋，進入至PCR循環，循環共32環[3]，PCR循環標準參數為：95℃ 5 min、94℃ 1 min、58℃ 1 min、72℃ 1 min，最后一環于72℃條件下延伸5 min。

1.3統計學分析法 3種檢驗方法的檢驗結果進行循環對比，采取χ2檢驗，使用SPSS 19.0軟件進行計算；以細菌培養法檢驗結果為金標準，計算革蘭染色法與PCR法陽性檢出率。

2結果

2.1檢驗結果 以細菌培養法為檢驗金標準，革蘭染色法檢驗總陽性檢出率為75%，PCR法檢驗總陽性檢出率為97.06%，見表1。

2.2統計學結果 PCR法檢驗結果與細菌培養法無統計學差異性，P>0.05；革蘭染色法檢驗結果與細菌培養法有統計學顯著性差異，P<0.01；PCR法與革蘭染色法有統計學明顯性差異，P<0.05；見表2。

3討論

細菌檢驗是臨床工作中的一項重要內容，可為感染性疾病的診斷治療提供科學性指導，并且能夠提高疾病傳播的防控力度[4]。陰道炎的主要致病原因為陰道內上皮細胞組織在陰道內環境的作用下，致細菌侵潤其表層糖原，使陰道內桿菌出現酸堿度改變經，桿菌數量異常減少，致病菌異常增殖，從而引發陰道炎[5]。陰道炎病起較為緩慢，初期癥狀不嚴重，不易引起患者重視，因此明確致病菌對于疾病的有效治療至關重要。陰道細菌檢驗是陰道疾病臨床診斷的重要方法，檢驗的準確度對疾病的診斷與致病菌的確定均具有重要作用。

目前臨床中常用的陰道細菌檢驗方法有細菌培養法、PCR法及革蘭染色法等。其中細菌培養法是臨床公認的陰道細菌檢驗金標準，但細菌培養法的檢驗過程較為復雜，對檢驗設備與環境的要求高，不易于基層醫療單位開展，從某種程度上說限制了其臨床應用范圍。革蘭染色法具有操作簡便的優勢，在臨床中應用廣泛，但能夠影響檢驗結果的因素較多，導致革蘭染色法在檢驗過程中存在著一定的誤差。常見的誤差原因有：染色過程中的脫色不當，脫色過度可致革蘭陽性菌于顯微鏡觀察下被確定為革蘭陰性菌，脫色不足則可致檢驗中將革蘭陰性菌判斷為革蘭陽性菌。因此革蘭染色法雖具有操作方面的優勢，但其檢驗結果較不理想。PCR技術最早是由Khorana等于1971年提出的核酸體外擴增設想而逐步形成的。PCR檢測法將PCR技術的敏感性、雜交DNA的特異性以及光譜學精確度等優點融合于一體，使得PCR檢測具有理想的準確度同時操作也更加簡便易行。

本次研究中細菌培養法的陽性檢出率為79.07%，革蘭染色法為59.30%，PCR法為76.74%；以細菌培養法為金標準革蘭染色法準確率為75%，而PCR法的準確率高達97.06%。經統計學卡方檢驗，細菌培養法檢驗結果與PCR無統計學差異性P>0.05，但與革蘭染色法具有統計學差異性P<0.01，同時PCR法檢驗結果明顯優于革蘭染色法P<0.05。充分的說明了PCR法在陰道細菌檢驗中具有理想的陽性檢出率，同時由于其操作簡便，檢驗快捷，可于陰道細菌臨床檢驗中推廣應用。

參考文獻：

[1]鐘里華.156例婦女陰道細菌臨床檢驗方法的比較分析[J].中國醫藥指南，2013，11（19）：553-554.

[2]史躍杰.99例陰道細菌的檢驗方法比較分析[J].現代預防醫學，2011，38（14）：2815-2817.

[3]吳祥如.實驗室對陰道細菌的兩種檢驗方法對比[J].中國衛生產業，2013，10（32）：18-18，20.

[4]武翠娥.細菌檢驗結果失誤的臨床分析[J].河北醫藥，2011，33（19）：3012-3013.

[5]嚴冬霞，樊尚榮.復發性細菌性陰道病的發病機制和治療[J].實用婦產科雜志，2010，26（2）：85-87.編輯/肖慧