TFF3和C1orf24協助鑒別甲狀腺濾泡型腫瘤良惡性

摘要：目的 運用RT-PCR技術在核酸水平上檢測甲狀腺細針穿刺提取的甲狀腺腫瘤組織中的TFF3、C1orf24基因的表達，評估其是否可用于臨床上甲狀腺濾泡型腫瘤良惡性的鑒別。方法 選取我院2013年4月～2011年4月的細針穿刺甲狀腺結節組織標本279例。然后運用RT-PCR技術在核酸水平上分別檢測各樣本組織中目的TFF3、C1orf24的表達水平。對照細胞學和術后病理學檢查結果，了解TFF3、C1orf24在良性甲狀腺濾泡型腫瘤和惡性甲狀腺濾泡型腫瘤中是否存在差異。結果 TFF3在濾泡狀癌中的表達高于濾泡狀腺瘤（P<0.05）。C1orf24在濾泡狀癌中的表達高于濾泡狀腺瘤（P<0.05）。結論 兩種分子標記物能較好的幫助臨床鑒別甲狀腺濾泡型腫瘤的良惡性。

關鍵詞：細針穿刺活檢（FNAB）；甲狀腺結節；甲狀腺濾泡狀腺瘤；甲狀腺濾泡狀癌；生物標記物；TFF3；C1orf24；RT-PCR

甲狀腺結節（Thyroid nodule，TN）是內分泌科常見疾病之一。大多數結節為良性，惡性結節僅占4.0%～6.5%[1]。甲狀腺細針抽吸活檢細胞學檢查（FNAB）是鑒別甲狀腺結節良惡性最有效的診斷工具[2]。濾泡狀癌占甲狀腺癌總數的10%～15%，其診斷要點是是否侵入包膜，血管或周圍組織。因此難以依靠FNAB診斷甲狀腺濾泡狀癌。隨著分子生物學技術的發展，研究發現許多分子生物標記物的基因表達在良惡性結節中的表達存在差異。例如HBME-1，PAX-8-PPARγ，RAS等。但目前分子標記物鑒別甲狀腺結節良惡性，仍停留在早期研究階段。我們在前期研究中，發現TFF3和 C1orf24在濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤中的表達存在有統計學意義的差異[3]。本研究選擇TFF3和 C1orf24，運用RT-PCR技術檢測其在FNAB樣本中的表達水平，結合隨訪的病理檢查結果和細胞學檢查結果，評估其在甲狀腺濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤臨床鑒別中的價值。

1資料與方法

1.1一般資料 選取南京軍區南京總醫院2013年4月～2014年4月FNAB抽取的組織樣本，總計279例，隨訪行手術治療共39例，術后病理報告提示：濾泡狀腺瘤27例，濾泡狀癌6例，乳頭狀癌1例，結節性甲狀腺腫2例，未分化癌1例，橋本甲狀腺炎2例。

1.2方法 第一步，提取組織中的總RNA，后用紫外分光光度法和瓊脂糖凝膠電泳鑒定提取的RNA的數量和質量。第二步，以β-actin為內參基因.采用RT-PCR方法經過反轉錄反應、擴增反應檢測的基因TFF3、C10rf24及內參基因的ct值。

1.3統計學處理 運用SPSS 19.0軟件進行統計處理。本實驗采用PCR 相對定量分析，樣本中目的基因的表達強度（△CT）用對應的內參基因Beta-actin基因的CT值進行校正，具體操作： △CT =CT（目的基因）-CT（Beta-actin 基因）。然后對各組的△CT進行秩和檢驗。如果P<0.05，則表示差異有統計學意義。

2結果

2.1 TFF3 mRNA TFF3在27例濾泡狀腺瘤中的表達顯著低于6例濾泡狀癌中的表達（P<0.05），見圖1。

圖1 TFF3 mRNA

2.2 C1orf24 mRNA C1orf24在27例濾泡狀腺瘤中的表達顯著低于6例濾泡狀癌中的表達（P<0.05），見圖2。

圖2 C1orf24 mRNA

3討論

甲狀腺濾泡狀癌約占甲狀腺惡性腫瘤的11%～15%[4]。目前最主要的困難在于濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤的鑒別。術前FNAB診斷甲狀腺濾泡狀癌的十分困難。隨著分子生物技術的發展，許多的研究發現分子生物標記物可能對甲狀腺濾泡狀癌和甲狀腺濾泡狀腺瘤鑒別有幫助。我們通過前期的研究發現TFF3、C1orf24在甲狀腺濾泡狀腺瘤和濾泡狀癌中的表達存在差異。

三葉肽（trefoil peptide）是主要由消化道粘膜上皮杯狀細胞合成和分泌的多肽物質，具有保護和修復粘膜、抑制炎癥反應、調節細胞免疫和細胞凋亡等功能，目前在人體內已發現種三葉肽， 包括乳癌相關肽（TFF1）、解痙多肽（TFF2）和腸三葉因子（TFF3）。TFF3主要在胃竇粘膜和小腸結腸中高表達，其余各段小腸中TFF3含量無明顯差異[5]。病理狀態下，TFF3的表達發生明顯改變，其分布無組織專一性。在食管腸化生，胃食管反流病，胃潰瘍，腸道慢性炎癥以及腺瘤腺癌等中均見表達。TFF3 mRNA的高表達可能促使細胞間失去粘連，加速細胞的遷移[6]。我們的研究對甲狀腺結節FNAB樣本的TFF3 mRNA的表達進行檢測，發現TFF3 mRNA相對于濾泡狀腺瘤在濾泡狀癌中高表達，這與前人的研究結果一致。這幫助我們，鑒別FNAB檢查中無法鑒別的甲狀腺濾泡腺瘤和濾泡癌樣本。

C1orf24在正常的胰腺、肌肉和結腸中均表達，前人的研究發現C1orf24與甲狀腺癌的發生有關，我們前期的研究發現在甲狀濾泡癌的患者中C1orf24高表達，在甲狀腺濾泡腺瘤中C1orf24低表達或不表達，其可能可以作為鑒別良惡性甲狀腺濾泡型腫瘤的分子標記物。我們的研究結果顯示在FNAB抽吸樣本中C1orf24的 mRNA表達水平在甲狀腺濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤的表達存在顯著性差異（P<0.05）。

綜上所述，本研究檢測279例FNAB抽吸樣本中TFF3、C1orf24的表達水平，與細胞學和術后病理學結果相比對，發現這兩種分子標記物均能較好的鑒別甲狀腺濾泡型腫瘤的良惡性。但目前的研究仍有局限性：①收集的惡性腫瘤病例數太少，影響結果的準確性；②FNAB抽吸樣本的組織量很少，后期提取組織中mRNA難度較大，且其對樣本組織的保存等技術要求較高。因此，TFF3、C1orf24在甲狀腺濾泡型腫瘤的良惡性的臨床鑒別中的運用可能有廣闊空間，但尚需更多的基礎研究和臨床實踐。

參考文獻：

[1]WERK E E Jr，VERNON B M，GONZALEZ J J，et a1.Cancer in thyroidnodules.A community hospital survey[J].Arch Intern Med，1984，144（3）：474-476.

[2]Kondo T， Ezzat S， Asa SL. Pathogenetic mechanisms in thyroid follicular-cell neoplasia. Nat Rev Cancer. 2006. 6（4）： 292-306.

[3]張久丹，熊金華，王堅，等.新型分子標記物對甲狀腺濾泡型腫瘤良惡性的鑒別診斷[J].中華內分泌代謝雜志，2013，29：1018-1020.

[4]Feldt-Rasmussen U. Iodine and cancer[J]. Thyroid 2001；11：483-6.

[5]Taupin D， Pedersen J， Familari M， et al. Augmente dintestinal trefoil factor（TFF3） and loss of pS2（TFF1） expression precedes metaplstic differentiation of gastric epithelium[J]. Lab Invest， 2001， 81 （3）： 397408.

[6]Rodrigues S， Van Aken E， Van Bocxlaer S， et al. Trefoil peptides as proangiogenic factors in vivo and in vitro： implication of cyclooxygenase-2 and EGF receptor signaling[J]. FASEB J. 2003. 17（1）： 7-16.

編輯/申磊