5—氟尿嘧啶抑制人肺腺癌細(xì)胞生長的作用方式研究

摘要：目的 對5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549細(xì)胞生長的作用方式進(jìn)行分析探討，為今后的研究工作提供理論依據(jù)。方法 采用不同濃度的5-氟尿嘧啶對體外培養(yǎng)的人肺癌A549細(xì)胞進(jìn)行處理，對5-氟尿嘧啶對A549細(xì)胞的抑制率、細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡的影響進(jìn)行分析，并對比分析不同濃度5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞生長的抑制情況。結(jié)果 隨著藥物濃度的增加，5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞的抑制率發(fā)生逐漸升高（P<0.05）。結(jié)論 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞生長的抑制存在濃度依賴性，低濃度時(shí)會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，高濃度時(shí)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，值得關(guān)注。

關(guān)鍵詞：5-氟尿嘧啶；人肺腺癌A549細(xì)胞；抑制；作用方式；凋亡

5-氟尿嘧啶為臨床上常用的一種抗腫瘤化療藥物，研究證實(shí)，其能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞的生長產(chǎn)生顯著的抑制效果，在直腸癌、乳腺癌、消化道癌、絨毛膜上皮癌等諸多惡性腫瘤的治療中發(fā)揮了重要作用[1]。5-氟尿嘧啶屬于一種嘧啶類似物，在細(xì)胞內(nèi)科轉(zhuǎn)化成不同的細(xì)胞毒性代謝產(chǎn)物，在同DNA、RNA結(jié)合后，可對合成進(jìn)行干擾，進(jìn)而對腫瘤細(xì)胞的生長進(jìn)行抑制[2]。本次研究中出于對5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549細(xì)胞生長的作用方式進(jìn)行分析探討的目的，采取不同濃度的5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞進(jìn)行了處理，并對細(xì)胞存活情況進(jìn)行了對比分析，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1資料與方法

1.1一般材料 試驗(yàn)材料包括：人肺腺癌A549細(xì)胞，胎牛血清，H-DMEM培養(yǎng)基，MTT，0.25%胰蛋白酶，倒置顯微鏡，酶標(biāo)儀，流式細(xì)胞儀。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 取人肺腺癌A549細(xì)胞在含有1%雙抗以及10%胎牛血清的H-DMEM培養(yǎng)基上在5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，溫度控制在37℃，3 d后以1∶3的比例傳代，取對數(shù)生長期細(xì)胞展開各項(xiàng)試驗(yàn)。

1.2.2 MTT檢測 取上述培養(yǎng)對數(shù)期人肺腺癌A549細(xì)胞，采取濃度為0.25%的胰酶消化后經(jīng)H-DMEM培養(yǎng)基對細(xì)胞濃度調(diào)整至1×105個(gè)/mL，接種在96孔微量滴度板，每孔中加入0.2 mL的細(xì)胞混懸液，在37℃條件下放置在5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，24 h后每個(gè)藥物濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，試驗(yàn)重復(fù)操作3次，取平均值。經(jīng)藥物處理后培養(yǎng)48 h，每孔中加入5 mg/mL MTT試劑20 uL，孵育4 h，而后加入200 uL DMSO，震蕩處理10 min后，保證結(jié)晶充分溶解，經(jīng)酶標(biāo)儀對每孔的A值進(jìn)行測定，計(jì)算抑制率，抑制率=[1-（實(shí)驗(yàn)組平均A值/對照組平均A值）]×100%。經(jīng)改良寇式法對各藥物的抑制濃度進(jìn)行計(jì)算[3]。

1.2.3流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期 將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分成對照組（不加藥）和抑制組，在給藥48消失后對細(xì)胞進(jìn)行手機(jī)，經(jīng)胰酶消化后制成單細(xì)胞混懸液，計(jì)數(shù)細(xì)胞超過106/ml，經(jīng)PBS洗滌后離心處理，加入2 mL 4℃預(yù)冷的濃度為70%的無水乙醇，固定4 h以上，離心處理將乙醇去除，加入DNA染色劑，加入200 uL的TritonX-100，避光孵育15 min后上機(jī)檢測。

1.2.4流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡 實(shí)驗(yàn)分組與給藥劑量與1.2.3相同，在給藥后48 h對細(xì)胞進(jìn)行收集，經(jīng)胰酶消化后制成單細(xì)胞混懸液，計(jì)數(shù)細(xì)胞超過106/mL，經(jīng)PBS洗滌后離心處理，加入抗體后避光孵育15 min，加入200 uL的Buffer液后進(jìn)行檢測。

1.3數(shù)據(jù)處理 研究中相關(guān)數(shù)據(jù)資料采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，對比中計(jì)量資料的對比采取t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的對比則是采取χ2檢驗(yàn)，在P<0.05時(shí)，視為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞的抑制作用 經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，隨著濃度的升高，5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞的抑制率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢（P<0.05），見表1。

2.2 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞周期的影響 經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，對照組與給藥組細(xì)胞周期存在明顯差異（P<0.05），見表2。

2.3 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的影響 對照組早期凋亡率為（0.42±0.11）%，晚期凋亡率為（1.86±0.22）%，5-氟尿嘧啶組早期凋亡率為（6.38±0.35）%，晚期凋亡率為（8.72±0.31）%，顯然5-氟尿嘧啶組細(xì)胞凋亡率較對照組發(fā)生顯著升高（P<0.05）。

3討論

5-氟尿嘧啶屬于嘧啶拮抗劑，其為臨床上比較常用的一種對晚期實(shí)體瘤進(jìn)行化療的藥物，經(jīng)臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，各種瘤細(xì)胞對5-氟尿嘧啶的耐藥性對化療效果產(chǎn)生了一定程度的影響。5-氟尿嘧啶通過對核酸的合成進(jìn)行干擾而達(dá)到一致腫瘤細(xì)胞增生的效果[4]。本次研究中出于對5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549細(xì)胞生長的作用方式進(jìn)行分析探討的目的，采用不同濃度的5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞進(jìn)行了處理，統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞存在明顯的抑制作用，且抑制率隨著給藥濃度的增加而呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢；5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞周期具有一定程度的影響，表現(xiàn)為5-氟尿嘧啶作用48小時(shí)后會(huì)將細(xì)胞阻滯在S期，G2期無細(xì)胞，G1期有少量細(xì)胞；5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡會(huì)產(chǎn)生顯著影響，表現(xiàn)為增加細(xì)胞早期和晚期凋亡率。這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致，充分證實(shí)了5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細(xì)胞生長的抑制存在濃度依賴性，低濃度時(shí)會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，高濃度時(shí)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，值得關(guān)注。

參考文獻(xiàn)：

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