VEGF—VEGFR2，Dll4—Notch1信號通路在基底細胞癌和鮑溫病中的表達及關系

摘要：目的 比較VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路在不同類型上皮源性腫瘤中的表達及關系。方法 采用免疫組化方法，對60例基底細胞癌和26例鮑溫病的石蠟包埋標本進行VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1蛋白水平的檢測，并進行相關性分析。結果 VEGF、VEGFR2、在基底細胞癌中的表達高于鮑溫病及正常皮膚組織，差異具有統計學意義（P<0.05）。而Dll4、Notch1在基底細胞癌中的表達低于鮑溫病及正常皮膚組織，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1與不同種類上皮源性皮膚腫瘤的發展和預后有關。

關鍵詞：血管內皮生長因子；血管內皮生長因子受體2；Dll4；Notch1；腫瘤，基底細胞；鮑溫病；血管生成

基底細胞癌（basal cell carainoma，BCC）、鮑溫病（（Bowens disease，BD）分屬基底細胞癌和鱗狀細胞癌，他們雖均來源于上皮的惡性腫瘤，但其惡性程度及預后有著極大不同。VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路是調控血管生成和成熟的重要信號通路，與腫瘤的惡性程度、轉移、預后均有重要聯系，研究基底細胞癌與鮑溫病組織中VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路的表達有助于進一步認識血管生成因素在上皮源性腫瘤發生發展中的作用以及對于腫瘤惡性程度以及轉移、預后的影響。

1資料與方法

1.1一般資料 60例基底細胞癌（BCC組）、26例鮑溫病（BD組）、10例正常皮膚組（NS組）的石蠟包埋標本均來自齊魯醫院病理科，所有標本均為手術切除獲得，術前未經放療和化療，并且均經過臨床和病理確診。各組標本的臨床資料如下：①基底細胞癌組（BCC組）60例，男性35例，女性25例，平均年齡58歲。②鮑溫病組（BD組）26例，男性15例，女性11例，平均年齡64.02歲。③正常皮膚組（NS組）10例。

1.2試劑 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1兔抗人一抗、山羊抗兔二抗及顯色劑均購自武漢博士德公司。

1.3方法 采用免疫組織化學SP法.玻片預先經防脫片處理，組織經10%甲醛固定、常規石蠟包埋，4μm連續切片，切片經常規脫蠟水化后，3%H2O2消除內源性過氧化物酶活性，檸檬酸熱修復后，分別加入一抗，工作濃度為1：500；4 ℃過夜，DAB顯色，顯微鏡下觀察結果。結果判斷以胞質或胞核內出現棕黃色顆粒為陽性細胞，每例組織隨機選取5個高倍視野（×400倍）計數陽性細胞并計算陽性率。

1.4統計學分析 應用SPSS 16.0軟件進行統計分析。實驗數據以 x±s表示，P<0.05為具有統計學意義。

2結果

2.1基底細胞癌與鮑溫病中VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1的表達比較（表1） VEGF陽性信號主要表達于細胞質中，呈彌漫性分布的棕黃色顆粒；VEGFR2主要表達于基底細胞胞膜及胞質中；Dll4陽性表達主要見于細胞胞漿和胞膜；Notch1位于角質形成細胞的胞膜和胞質中，其表達從基底層上方開始，延伸到顆粒細胞層，而且在真皮內無明顯表達。VEGF、VEGFR2在基底細胞癌和鮑溫病中的陽性率分別為67.5%、43.2%、42.0%、36.3%，高于正常皮膚組織的20.5%、13.1%，差異具有統計學意義（P<0.05）；Dll4、Notch1在基底細胞癌及鮑溫病中的陽性率為12.6%、11.9%、17.1%、20.4%，低于正常皮膚組織的21.6%、24.7%，差異具有統計學意義（P<0.05）。

2.2 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1在基底細胞癌和鮑溫病中的蛋白表達（表2）：用顯微鏡圖像采集系統采集圖像，并用Leica Qwin V3圖像分析軟件進行灰度值的半定量分析。利用雙盲法測定VEGF、VEGFR2、Dll4及Notch1染色強度，每張切片隨機選取5個視野（×200）進行光學灰度值分析，數值在0～255之間，取其平均值即為該片的灰度值，灰度值越低，蛋白表達越高。

3討論

VEGF是體內最強的一種血管生長因子，它特異性地作用于血管內皮細胞，與實體瘤的侵襲、轉移等多種生物學特性密切相關[1]。VEGF與基底細胞癌的血管生成正相關[2]，在基底細胞癌的發生、發展過程中起著重要作用，而且可協助腫瘤細胞逃逸T細胞介導的抗腫瘤免疫反應。

Dll4-Notch1信號通路表達上調會抑制血管生成，在多種主要的人類腫瘤中都發現了Notch信號的活化。在皮膚鱗狀細胞癌中，暴露部位Notch1表達下降，而生殖器部位侵襲性鱗狀細胞癌Notch1表達明顯。Notch1缺陷小鼠可以自發的形成與人類BCC高度類似的腫瘤，而人BCC中確實存在Notch通路抑制現象。

基底細胞癌（BCC）是一種最為常見的皮膚惡性腫瘤。本病多見于40歲以上的人群，無自覺疼痛或不適感。BCC的發生、發展、浸潤以及轉移中均伴隨著相關信號通路的信號失調。鮑溫病（BD）是一種表皮內鱗狀細胞癌，又稱原位鱗狀細胞癌。與BCC相比，BD的進展、轉移及預后都明顯好于前者。本研究通過免疫組化發現， BCC組以及BD組的血管生成相關因子VEGF、VEGFR2均高于NS組，而起抑制作用的Dll4、Notch1則低于NS組，說明血管生成及其調控信號可能與皮膚腫瘤的發生、發展有關。BD組中促進血管生成的VEGF、VEGFR2表達明顯低于BCC組，而調控血管生成的Dll4、Notch1蛋白表達高于BCC組，提示血管生成及其調控信號可能與皮膚腫瘤的發展、浸潤及轉移、預后有關。而其具體機制，以及VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路在基底細胞癌與鮑溫病的發生、發展、浸潤以及轉移中如何相互影響，仍有待進一步研究。

參考文獻：

[1]Tammela T， Zarkada G， Wallgard E， et al. Blocking VEGFR-3 suppresses angiogenic sprouting and vascular network formation[J]. Nature， 2008，454： 656-660.

[2]李軼楠，李東寧. ID-1， VEGF及Tsp-1在皮膚鱗狀細胞癌和基底細胞癌組織中的表達[J].中國皮膚性病學雜志，2013， 27（8）：767-771.編輯/申磊