RP—HPLC法測定纈沙坦含量

摘要：目的 建立HPLC測定纈沙坦原料的含量。方法 供試品溶液與對照品溶液稀釋相同倍數后經過精密度試驗、重復性試驗、穩定性試驗、回收率試驗、測定定量項、樣品測定等步驟。結果 在進樣濃度為5.0～75.0 μg/mL范圍內與峰面積線性良好，r=0.9999（n=18），平均回收率為100.9%（RSD%=0.49%，n=9）。結論 該方法專屬性好，準確，靈敏，用于纈沙坦含量的測定結果可靠。

關鍵詞：纈沙坦；含量；高效液相色譜；定量分析

纈沙坦（Valsartan），化學名為（S）-N-戊酰基-N-{[2'-（1H-5-四氮唑-基-1，1'-聯苯）-4-基]-甲基}-纈氨酸。纈沙坦結構中含1個手性碳原子，產品為S-構型。本文所研究的纈沙坦由湖南千金湘江藥業股份有限公司研制生產。

1儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；UV-762 紫外分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）；BS110S 電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。纈沙坦對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為100651-201203，含量99.8%；纈沙坦原料6批（批號20121001～20121003，20121101～20121103）。甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸氫二鈉為分析純；水為二次重蒸水。

2方法與結果

2.1色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-冰醋酸（500∶500∶1）為流動相；檢測波長為225 nm；流速為1.0 mL/min。理論板數按纈沙坦峰計算應不低于4000，纈沙坦與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。

2.2 溶液制備 取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成約含纈沙坦0.05 mg/mL的樣品溶液；另取纈沙坦對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成約含纈沙坦0.05 mg/mL的對照品溶液。

2.3線性關系及標準曲線 精密稱定纈沙坦10 mg，置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別精密量取2.5 mL，2.5 mL，4 mL，5 mL，6 mL，7.5 mL置100 mL、20 mL、20 mL、20 mL、20 mL、20 mL量瓶中，制成5 μg/mL、25 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL、60 μg/mL、75 μg/mL 6個濃度范圍，用流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取各溶液10 μL，分別注入色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標（Y），濃度（μg/mL）為橫坐標（X）進行線性回歸，回歸方程為Y=7.266x+0.0627，r=0.9999。纈沙坦在5～75 μg/mL濃度范圍內線性良好。

2.4精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續進樣6次，記錄色譜圖，分別于第2 d、第3 d重復上述操作。主峰峰面積的RSD=1.1%（n=18）。說明儀器精密度良好。

2.5重復性試驗 取\"2.2\"項下方法制備的同一份供試品溶液5份，分別再次重復測定5次，計算含量，RSD=1.4%。說明方法的重復性良好。

2.6穩定性試驗 取本品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋至刻度制成中含0.05 mg/mL的溶液。取上述液作為供試品溶液，置室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8、10、12 h時，測定峰面積，RSD=0.6%。說明樣品溶液穩定性良好。

2.7回收率試驗 精密稱取纈沙坦約20 mg、25 mg、30 mg，分別置50 mL容量瓶中，加流動相30 mL，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液5 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取纈沙坦對照品適量（以干燥品計），精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成中約含0.05 mg/mL的溶液。按外標法以峰面積計算供試品中纈沙坦的含量，計算平均回收率。結果纈沙坦高、中、低3個加入量的回收率（n=3）分別為99.96%（RSD=1.2%）、100.12%（RSD=1.6%）、100.08%（RSD=1.4%），平均值（n=9）為100.06%。

2.8定量項 取線性試驗項下濃度為5μg/ml溶液，逐級稀釋對照品溶液，測定樣品峰的峰高，同時測定相同條件下的色譜基線噪聲，取基線噪聲的10倍值為定量限，連續進樣6次，記錄色譜圖，因此本品定量限為0.5 ng（0.1%）。

2.9樣品測定 取6個批次的樣品各2份，分別按照\"2.2\"項下方法制備供試品溶液，按色譜條件測定，見表1。

同時，取以上樣品，按照中國藥典（2010年版）纈沙坦含量測定方法進行酸堿滴定，見表2。

3討論

3.1高效液相色譜分辯率高于其它色譜法[1-2]；速度快；重復性高；自動化操作，分析精確度高。酸堿滴定法是基于酸堿反應的滴定分析方法，其操作誤差主要與滴定條件、指示劑、終點判斷以及操作水平等影響因素有關。

3.2丁酰基纈沙坦是纈沙坦原料中主要控制雜質之一。其與纈沙坦主要區別在于正丁酰基。在進行滴定法進行含量測定時，易使含量測定結果偏高。采用高效液相色譜進行含量測定時，纈沙坦與丁酰基纈沙坦有效分離，含量測定結果準確，方法專屬性高，方法簡便、快速、準確、重現性好。

參考文獻：

[1]Drug Standards of China （國家藥品標準）.YBH01882012.

[2]Drug Standards of USP35-NF30 Page 4997. Pharmacopeial Form： Volume No.33（3） Page 467.

編輯/肖慧