他汀類藥物對心梗后心房神經分布的影響

摘要：目的 探討瑞舒伐他汀對心肌梗死（MI）后心房神經分布的影響。方法 開胸后結扎前降支制作兔MI模型，24h后將存活兔分為心梗組（MI，n=7）、藥物干預組（Rt，n=8），并設假手術組（S，n=9）。瑞舒伐他汀藥物干預8w后處死動物，觀察心房自主神經分布改變。結果 與假手術組比較，心肌梗死組TH與膽堿乙酰轉移酶（choline acetyltransferase，CHAT）表達陽性神經纖維密度增加，且差異均有統計學意義（P<0.05）；與心肌梗死組比較， 藥物干預組TH與CHAT陽性神經纖維密度減少，差異亦均有統計學意義（P<0.05）；且藥物干預組與假手術組相比較，TH與CHAT表達陽性神經纖維密度無明顯統計學差異。結論 瑞舒伐他汀對MI后心房神經再分布具有抑制效應。

關鍵詞：瑞舒伐他汀；心肌梗死；心房神經重構

他汀類藥物又名羥甲基戊二酸單酰輔酶A （HMG-GoA）還原酶抑制劑是臨床上最廣泛的調脂藥物，近年來隨著對其研究的深入，發現其還有許多獨立于調脂作用的生物學效應，即他汀藥物的“多效應”，如抗炎、抗氧化應激、改善內皮功能、抗血栓、保護心肌、抗心律失常等多重效應。其中他汀類藥物抗心律失常及防止心臟重構的作用已得到普遍關注，成為研究的熱點之一[1-2]。此外，MI后除發生室性心律失常外，房性心律失常尤其是房顫（atrial fibrillation， AF）的發生亦較常見[3]，他汀類藥物對這些房性心律失常具有防治作用[4]，但其機制尚未完全闡明。本研究擬通過觀察兔MI后心房肌神經重構變化及瑞舒伐他汀對神經重構影響，旨在為他汀類藥物防治MI后房性心律失常的機制提供某種合理解釋。

1 材料與方法

1.1 實驗動物模型的建立及分組 選購28只健康新西蘭大白兔（普通級），體質量（2.2±0.3）kg。參照Fujita M等[5]報道建立兔心肌梗死模型。應用3%戊巴比妥鈉（45mg/kg）經耳緣靜脈緩慢注射麻醉，術前30min給予青霉素（10萬/kg）肌注。麻醉后將兔固定于小手術臺上，術前常規行心電圖檢查。保持兔自然呼吸，備皮、消毒后緊貼胸骨左緣3、4肋間縱行切開皮膚、游離出3～4cm縱行切口，小心撥開縱膈胸膜，充分暴露心臟，仔細觀察兔左冠狀動脈及其分支（或左室支）的解剖位置。于前降支中上1/3處結扎。直視下可見左心室前壁和心尖部心肌顏色逐漸變暗乃至蒼白，搏動減弱。心電圖可見Ⅰ、aVL導聯ST段逐漸抬高，表明心肌梗死形成。術后逐層關胸。心肌梗死模型制作完畢24h后將兔隨機分為心梗組和藥物干預組。假手術組左前降支下穿線，但不結扎。自術后第1d開始，藥物干預組給予瑞舒伐他?。?0mg/kg，阿斯利康制藥生產）灌胃8w，心梗組及假手術組以等量生理鹽水灌胃8w。手術中及手術后死亡兔共4只，最終獲得具有完整實驗資料的兔共24只，心梗組（MI， n=7）、藥物干預組（Rt， n=8）、假手術組（S， n=9）。

1.2 標本采集 灌胃8w后稱取體重，應用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉后再次開胸，迅速取出心臟，分離出左房分成兩部分，一部分組織凍存于液氮中，另一部分組織放入4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片。

1.3 免疫組化法測定酪氨酸羥化酶及膽堿乙酰轉移酶 常規石蠟脫水，浸蠟，包埋，連續切片（厚度3～4μm），脫蠟，水化，抗原修復，清除內源性過氧化物酶。滴加一抗（抗TH抗體采購自PL Laboratories，抗CHAT抗體采購自美國abcam公司）4℃過夜，第2d取出切片于37℃復溫30min后滴加辣根過氧化物酶標記的二抗（北京中山金橋公司）。每一操作步驟間均用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）沖洗，最后用DAB試劑盒顯色（顯示棕色顆粒為陽性）。分別對各組兔心房肌組織進行免疫組化檢測，應用計算機圖像分析系統（Image Pro Plus）計算神經密度（density）。每張切片檢測5個神經纖維密度最高的區域，用陽性神經纖維在選區中所占的面積比值表示。

1.4 統計學方法 計量資料以（均數±標準差）表示，應用SPSS17.0統計軟件包進行統計分析，兩兩比較采用單向方差分析檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

心房肌TH與CHAT陽性神經纖維再生現象：實驗8周后免疫組化實驗結果顯示（圖1）：假手術組兔心房肌TH和CHAT陽性神經纖維較少，心梗組TH和CHAT陽性神經纖維較多，而藥物干預組較少。統計學分析結果示：心肌梗死組兔的心房TH和CHAT陽性神經纖維密度明顯高于假手術組，而藥物干預組的TH和CHAT陽性神經纖維密度明顯低于心梗組，具有統計學差異（P<0.05）；藥物干預組上述指標與假手術組水平無明顯統計學差異（P>0.05），表1。

3 討論

既往研究[7]表明，心肌梗死后心房顫動發生可能與心房結構重構有關，但具體機制仍不十分清楚。對于心律失常的研究目前較為廣泛的集中在心臟結構重構方面，且仍不能夠全面解釋其他心臟疾病易出現心律失常的原因。所以，我們應該對神經重構在心律失常中的作用做進一步研究。TH存在于腎上腺素能神經纖維的胞漿內，是去甲腎上腺素（NE）生成的限速酶，其表達水平影響心肌NE分布，從而影響心臟電生理特性；同時它能夠作為交感神經纖維標記物以探討心律失常發生的神經機制[8-9]。目前認為CHAT是反映迷走神經分布及在分布的標志，是膽堿酯酶存在的特異性標志酶。

本研究說明瑞舒伐他汀具有抑制心房自主神經重構的作用，此結果與我們以往的實驗[10]和Liu[11]等的研究相一致。目前他汀類藥物在心血管疾病中的應用已相當廣泛，這可能與其多效性有關，如改善心臟重構及抗心律失常，這些作用有益于改善心肌梗死患者的預后。具體機制有待進一步研究。

綜上所述，他汀類藥物能夠影響MI兔心房神經再分布，其發生機制尚不明確，但這為他汀類藥物在臨床的應用提供了一定的理論依據。

參考文獻：

[1]Abuissa H， O’keefe J H， bykee K A. Statins as anti-arrhythmics： a systematic review part II： effects on risk of ventricular arrhythmias[J]. Clin cardiol， 2009， 32（10）： 549-552.

[2]Pedersen T R， Faergeman O， Kastelein J J， et a1. For the Incremental Decrease in End Points Through Aggressive Lipid Lowering（IDE-AL） Study Group. High-dose atorvastatin vs usual-dose simvastatin for secondary prevention after myocardial infarction.The IDEAL Study：a randomized controlled trial[J]. JAMA， 2005， 294： 2437.

[3]Ole Dyg Pedersen. Increased risk of sudden and non-sudden cardiovaseular death in patients with atrial fibrillation/flutter following acute myocardial infarction[J]. Eur Heart J， 2006， 27： 290-295.

[4]Kumagai K， Nakashima H， Saku K. The HMG-CoA reductase inhibitor atorvasttin prevents atrial fibrillation by inhibiting inflammation in a canine sterile pericarditis model[J]. Cadiovasc Ras， 2004， 62（1）： 105-111.

[5]Fujita M， Morinoto Y， Ishihara M， et al. A new rabbit model of myocardial infarction without endotracheal intubation[J]. Surg Res， 2004， 116： 124-128.

[6]Yuan M J， Huang C X， Tang Y H， et al. A novel peptide ghrlin inhibits neural remodeling after myocardia infarction in rats[J]. Eur J Pharmacol， 2009， 618（1-3）： 52-57.

[7]Hwang HJ， Ha JW， Joung B， et al. Relation of inflammation and left atrial remodeling in atrial fibrillation occurring in early phase of acute myocardial infarction[J]. International journal of cardiology，2011，146（1）：28-31.

[8]Chen P S， Chen L S， Cao J M， et al. sympathetic nerve sprouting， electrical remodeling and the mechanisms of sudden cardiac death[J]. Cardiovasc Res， 2001，50： 409-416.

[9]Zhou S， Cao JM， Tebb ZD，et al. Modulation of QT interval by cardiac sympathyetic nerve sprouting and the mechanisms of verntricular arrhythmia in a canine model of sudden cardiac death[J]. Cardiovascu Electrophysiol， 2001， 12： 1068-1073.

[10]王衛杰， 張玉嬌， 高梅等. 瑞舒伐他汀對心肌梗死兔心房結構重構的影響[J]. 山東大學學報（醫學版）， 2012， 50（4）： 29-32.

[11]Liu YB，Lee YT， Pak HN，et al.Effects of simvastatin on cardiac neural and electrophysiologic remodeling in rabbits with hypercholesterolemia[J]. Heart Rhythm， 2009， 6（1）： 69-75.編輯/蘇小梅