HPLC法測定透骨消痛膠囊中異嗪皮啶的含量

摘要：目的 建立測定透骨消痛膠囊異嗪皮啶含量的方法。方法 采用色譜柱Nova-pak C18（250×4.6mm，4um），流動相為甲醇-0.1%甲酸（25：75），檢測波長344nm。結果 用稀乙醇回流提取的方法效果較好，異嗪皮啶在0.6712μg/ml～67.12μg/ml范圍內與峰面積呈現良好的線性關系（r=0.9999），平均加樣回收率為101.6%，RSD為1.09%。結論 該法具有良好的重現性、穩定性，可控制透骨消痛膠囊的質量。

關鍵詞：透骨消痛膠囊；異嗪皮啶；高效液相色譜法

透骨消痛膠囊是根據劉獻祥教授用于治療骨性關節炎的臨床經驗方研制而成的中藥制劑[1，2]，由腫節風、杭白芍、川芎等組成，具有補腎柔肝、活血祛風的功效，對防治膝骨性關節炎（OA）療效確切[3]。異嗪皮啶為腫節風中的有效成分，藥典規定其在腫節風中的含量，本實驗通過建立高效液相色譜法測定透骨消痛膠囊中異嗪皮啶的方法，達到控制其質量的目的。

1 儀器與試藥

1.1儀器 1100型安捷倫高效液相色譜儀；超純水器；超聲波發生器。

1.2對照品及試劑 異秦皮啶對照品；乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件與系統適應性試驗 色譜柱：Nova-pak C18（250×4.6mm，4um）；流動相：甲醇-0.1%甲酸（25：75）；檢測波長：344nm；柱溫：室溫；流速：1ml.min-1；進樣量：10μl（自動進樣）。理論塔板數：按異嗪皮啶計算不得低于2000。見圖1。

2.2提取方法的選擇

2.2.1取樣品0.8g，分別精密加入甲醇、稀乙醇溶劑25ml超聲處理30min，取續濾液進樣，測定異嗪皮啶成分的峰質比。見表1。

2.2.2提取方法的選擇 見表2。

2.3對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液的制備

2.3.1對照品溶液的制備 取異嗪皮啶對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1ml含異嗪皮啶5μg的混合溶液，即得。

2.3.2供試品溶液的制備 取本品研細，取約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，加熱回流30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻濾過，取續濾液，即得。

2.3.3陰性樣品溶液的制備 按處方項下取各味藥材，制作空白樣品，并按供試品溶液制備方法制備腫節風陰性樣品溶液。

2.4專屬性試驗 分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，按2.1項下色譜條件進行測定，實驗結果陰性樣品溶液在與對照品相應的保留時間處無色譜峰出現，表明方中其他各味藥材不干擾異嗪皮啶的測定。

2.5方法學考察

2.5.1線性關系考察 見表3。

2.5.2穩定性試驗 見表4。

2.5.3重復性試驗 取同一批號樣品，按正文含量測定方法進行6次平行測定，結果表明本法具有良好的重現性。

2.5.4回收率試驗 見表5。

3 討論

透骨消痛膠囊由腫節風、巴戟天、杭白芍等組成。腫節風為植物草珊瑚Sarcandra glabra .Nakai的干燥全株，味苦，性平，苦能燥濕，辛能發散，行氣活血，能祛風除濕，活血通絡。中國藥典規定本品含異嗪皮啶；不得少于0.020%。本文通過建立高效液相色譜法測定透骨消痛膠囊中異嗪皮啶的含量，并進行科學方法考察，并進行科學方法考察，結果較為滿意，可以作為透骨消痛膠囊的質量控制標準。

參考文獻：

[1]林木南，劉獻祥.透骨消痛方治療骨性關節炎30例[J].福建中醫藥，2005，36（4）：15-16.

[2]吳追樂，許惠鳳 ，李西海，等.透骨消痛膠囊含藥血清對軟骨細胞活性的影響[J].福建中醫藥大學學報，2012，04：24-27.

[3]唐勇，姜杰，孟輝.補腎益氣行血方治療膝骨性關節炎44例[J].時珍國醫國藥，2005，16（9）：902-903.

編輯/哈濤