單純皰疹病毒Ⅱ型抗體室內質控血清制備及臨床應用評價

摘要：目的 探討自制外部弱陽性質控血清在檢測血清單純皰疹病毒Ⅱ型（HSVⅡ）試劑盒中應用的可行性，并與康潤公司質控血清進行結果比對。方法 試驗采用對比檢測研究，使用美國Trinity Biotech Plc公司提供抗HSVⅡIgG型和IgM型試劑盒分別檢測自制和康潤公司質控血清 ，采用SPSS16.0進行數據處理。不同月份和不同批號試劑盒間質控血清精密度和穩定性的比較采用均數的t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。結果 自制血清抗HSVⅡIgM S/CO 平均值為（2.56±0.611），CV值11.95%；康潤公司質控血清抗HSVⅡIgM型S/CO值（2.38±0.48），CV值為10.08%，兩種質控血清CV值比較無統計學差異P>0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值（3.57±0.98），CV值13.78%；康潤公司抗HSVⅡIgG型質控血清S/CO值為（3.275±0.822），CV值為12.55%，兩種質控血清CV值比較無統計學差異P>0.05。結論 自制外部弱陽性質控血清在實際檢測中精密度、穩定性符合國家對質控物的要求，基層醫院檢驗科有能力制備，值得推廣應用。

關鍵詞：質控血清；單純皰疹病毒；生殖器皰疹

生殖器皰疹（GH）是皮膚性病科常見的一種由單純皰疹病毒Ⅱ型（HSVⅡ）感染引起的性傳播疾病，常與生殖道致病微生物如淋球菌，支原體，衣原體，梅毒螺旋體混合感染或其他性病治愈后而發病；此病典型臨床表現為生殖器部位的密集水泡，臨床診斷相對容易；部分病例由于臨床癥狀不典型或臨床醫師認識不足常漏診，因此檢測血清HSVⅡ抗體（IgG型和IgM型）可輔助臨床確診此??；尤其是 IgM型抗-HSVⅡ在血清中出現早，上升快，但在血液中存在時間短，可協助臨床早期診斷。為了保證檢測結果準確性，精密度和可靠性，每次實驗均須有內部對照質控血清（陽性及陰性血清）和外部對照質控血清，以外部對照質控血清進行室內質量控制。為了避免商品化質控血清可能存在的基質效應，我們利用檢測病例中抗 HSVⅡ陽性標本分別制備了IgG和IgM型弱陽性外部對照質控血清，結果如下。

1 資料與方法

1.1試劑與儀器 ①試劑：抗HSVⅡIgG型和IgM型試劑盒由美國Trinity Biotech Plc公司提供，批號050，有效期2014-11；外部質控血清IgG型和IgM型（4NCU/ml），廣州康潤生物制品有限公司提供，批號20131202，有效期20141201；②儀器：BIO-RAD680酶標儀及ZL-5洗板機。

1.2抗HSVⅡIgG型和IgM型檢測采用酶聯免疫吸附法（ELISA），按照試劑盒說明書進行操作，以吸光度值/cut-off值（S/CO）判定檢測結果，S/CO≥1.1為陽性；S/CO≤0.9為陰性；S/CO值介于0.9～1.1間為檢測灰區。

1.3弱陽性外部質控血清制備 我們將皮膚性病門診確診為生殖器皰疹病例16例，其中9例為IgG抗體陽性；7例IgM抗體陽性病例再次抽血5ml，并分離血清；同時使用10例健康體檢者血清（肝炎標志物，抗HIV，梅毒抗體均陰性并無脂血、溶血、黃疸）；分別將上述血清混勻，經高速離心20min去除蛋白質等沉淀，56℃加熱30min備用。用處理后的健康人血清對IgG陽性血清和IgM陽性血清進行倍比稀釋，檢測吸光度并計算S/CO值。選擇陽性質控血清濃度（以吸光度OD值表示）為cut-off值的2～3倍上下的稀釋度血清為室內質控血清，過濾除菌并加入0.01%硫柳汞混勻，按50ul用量分裝后，-70℃冷凍保存。

1.4室內質控方法 ①繪制質控圖：在常規條件下，連續檢測抗HSVⅡIgG型和IgM型自制血清20批次，得到20個S/CO值，計算平均值（x）、標準差（s）、變異系數（cv），以S/CO值為縱坐標，以檢測批次日期為橫坐標，繪制質控圖，每次外部對照質控血清的結果（S/CO）依次填入該質控圖中；②自制質控血清的精密度和穩定性觀察：每次取自制50ul質控血清與標本同時測定抗HSVⅡIgG和IgM；持續檢測9個月后統計S/CO的x、SD、CV，并分析各月與第1個月的檢測結果的統計學差異；③用三個不同批號試劑盒檢測室內質控血清，并持續9個月后統計S/CO的x、SD、CV，并分析本批質控血清用不同批號試劑盒間檢測結果的統計學差異。

1.5統計學方法 采用SPSS16.0進行數據處理。不同月份和不同批號試劑盒間質控血清精密度和穩定性的比較采用均數的t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1抗HSVⅡIgM、IgG型弱陽性質控血清檢測 自制抗HSVⅡIgM、IgG型質控血清和康潤公司抗HSVⅡIgM、IgG型質控血清連續檢測20d的結果：自制血清吸光度值（S）均在CO值3倍左右，達到了外部質控血清的要求，與康潤公司抗HSVⅡIgM、IgG型質控血清S值基本相似。經統計學處理結果如下（以x±s表示）：自制血清抗HSVⅡIgM S/CO 平均值為（2.56±0.611），CV值11.95%；康潤公司質控血清抗HSVⅡIgM型S/CO值（2.38±0.48），CV值為10.08%，兩種質控血清CV值比較無統計學差異P>0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值（3.57±0.98），CV值13.78%；康潤公司抗HSVⅡIgG型質控血清S/CO值為（3.275±0.822），CV值為12.55%，兩種質控血清CV值比較無統計學差異P>0.05。

2.2自制質控血清精密度和穩定性觀察 每月檢測自制血清抗HSVⅡIgM、IgG型S/CO值的X、S、CV結果變化分別見表1；康潤公司質控血清抗HSVⅡIgM型結果表2。按照室內質控要求，以第1個月的結果（S/CO）為基準，以后每月與第1個月的檢測結果比較無統計學差異（P>0.05）。進行16～20次/月檢測，持續檢測9個月，自制質控血清抗HSVⅡIgM型S/CO的均值2.493，CV值為13.30%，每月的cv值均小于20%，沒有超出試劑盒規定的質控范圍。

2.3三個不同試劑批號檢測抗HSVⅡIgM型精密度、穩定性檢測結果 用三個不同批號的試劑盒檢測自制質控血清抗HSVⅡIgM，每個批號檢測20次，持續檢測3個月結果的CV值均<20%（表3），不同批號試劑盒檢測結果比較無統計學差異（P>0.05），表明本批自制質控血清的精密度和穩定性符合質控要求。

3 討論

人體免疫系統對致病微生物可產生體液免疫或細胞免疫。在產生體液免疫時，在感染的窗口期后可以在血液中檢測到特異性抗體，HSVⅡIgM型抗體分子量大，出現早，一旦檢測結果為陽性，再結合臨床資料有不潔性接觸史或其他接觸途徑，盡管臨床檢查無癥狀或不明顯，可診斷為HSVⅡ早期感染的生殖器皰疹（GH）；當HSVⅡIgG和IgM抗體均陽性時，此時臨床癥狀明顯，可明確診斷為生殖器皰疹（GH）；當僅有HSVⅡIgG抗體陽性，可結合臨床資料是否有藥物治療史，可診斷為既往HSVⅡ感染的生殖器皰疹[1]。

可見血清抗體檢測在臨床診斷生殖器皰疹（GH）重要性，認真進行室內質量控制是保證檢測結果穩定及可靠的要素之一；室內質控目的是控制實驗室每天檢測結果的可靠性，是實驗室管理的基本措施。外部對照質控血清是為了監控檢測的重復性和試劑盒反映批間或批內差異而由實驗室設置的一套對照血清，而弱陽性對照最能反映檢測結果的差異，即能顯示半定量分析或定性分析上的假陰性結果或誤差[2]。盡管試劑盒中設有陰陽性對照，但從實際檢測中我們發現其陽性對照質控的吸光度值是試劑盒CO值的10倍及以上，僅能說明試劑盒的有效性和可靠性。當血清中抗體濃度較高時，檢測結果是符合臨床預期的；當濃度在CO值左右時，如果不同時檢測外部弱陽性質控血清，很容易忽視該檢測結果，一般報告陰性結果，形成漏診的可能性極大[3]。

所以我們采用健康人血清稀釋抗HSVⅡIgM、IgG型陽性血清制備弱陽性質控血清，避免了用其他類稀釋劑稀釋陽性血清而必然存在的基質效應[4]。根據與外購康潤公司質控血清檢測結果對比，自制弱血清質控效果和穩定性也符合國家對質控物的要求，基層醫院檢驗科有能力制備，值得推廣應用。

參考文獻：

[1]呂新民，蔡衛華，等.血清單純皰疹病毒Ⅱ型抗體檢測分析及臨床應用評價[J].檢驗醫學與臨床，2011，8：2104-2105.

[2]孔祥沙，季穎，張?，?，等.甲型肝炎病毒抗體室內質控血清制備及評價[J].中華檢驗醫學雜志，2013，36：1146-1147.

[3]王治國. 臨床檢驗質量控制技術[M].北京：人民衛生出版社.，2011：198-205.

[4]曹向紅，董玉林，徐敏，等. 酶聯免疫吸附試驗的干擾因素和對策[J].實用醫技雜志，2011，18：1321-1322.編輯/哈濤