PRDX6對(duì)創(chuàng)傷性傷口促愈效果初步研究

摘要：目的 觀察PRDX6輔助治療創(chuàng)傷性傷口促進(jìn)愈合的效果。方法 體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞，用MTT法測(cè)PRDX6作用后其增殖率，外力損傷已經(jīng)貼壁的皮膚成纖維細(xì)胞加入PRDX6后HE染色電鏡下觀看損傷后細(xì)胞修復(fù)狀況。結(jié)果 PRDX6能促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖，并對(duì)損傷后的皮膚成纖維細(xì)胞有促進(jìn)修復(fù)作用。結(jié)論 皮膚創(chuàng)傷后，PRDX6能促進(jìn)傷口進(jìn)愈合。

關(guān)鍵詞：人皮膚成纖維細(xì)胞；PRDX6；創(chuàng)傷性；促愈

創(chuàng)傷常會(huì)帶來(lái)強(qiáng)烈而持久的疼痛。傷口相關(guān)性疼痛是指與開放性傷口直接相關(guān)的有害癥狀或不愉快經(jīng)歷[1]。很多研究結(jié)果[2，3]表明PRDX6在保護(hù)機(jī)體細(xì)胞抗損傷過(guò)程中發(fā)揮重要的抗氧化作用，且對(duì)正常細(xì)胞無(wú)傷害。

1 資料與方法

1.1一般資料 人皮膚成纖維細(xì)胞購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)；IMEM培養(yǎng)基及胎牛血清均購(gòu)于美國(guó)Gibco公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)于含有15%胎牛血清、IMEM完全培養(yǎng)基中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，2～3d換液，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2皮膚成纖維細(xì)胞傳代 當(dāng)細(xì)胞80%融合時(shí)行傳代培養(yǎng)，棄去培養(yǎng)液并用PBS洗2次，每培養(yǎng)皿加1.5ml胰蛋白酶室溫消化1～3min后，倒置顯微鏡下見(jiàn)細(xì)胞退縮變圓漂動(dòng)，傾斜培養(yǎng)皿見(jiàn)細(xì)胞呈流沙樣下滑時(shí)，立即以含10%FBS的培養(yǎng)液終止消化，離心（1000rpm，5min）棄上清液，細(xì)胞以含15%FBS的IMEM重懸后均勻接種在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。

1.2.3 MTT法測(cè)PRDX6對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞增值率 人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)24h后，對(duì)照組加生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組分別加含100，200，300，400，500，600，700，800，900，

1000umol/LPRDX6繼續(xù)培養(yǎng)，48h后MTT法測(cè)定各孔的吸光值（A值）以示細(xì)胞增殖情況，細(xì)胞增值率（%）=實(shí)驗(yàn)組的A值/對(duì)照組的A值×l00%。

1.2.4 PRDX6對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞損傷后的修復(fù)作用 細(xì)胞傳代時(shí)提前在培養(yǎng)皿中放入細(xì)胞爬片，分為兩組。培養(yǎng)24h后分別用移液槍頭劃傷已經(jīng)貼壁的成纖維細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加500umol/L的PRDX6，對(duì)照組加等體積生理鹽水，繼續(xù)培養(yǎng)48h后HE染色電鏡下觀看。

2 結(jié)果

2.1 MTT法檢測(cè)皮膚成纖維細(xì)胞增值率（圖1） 可以看出隨著PRDX6濃度的增高，人皮膚成纖維細(xì)胞的增值率呈現(xiàn)出濃度依賴作用。

2.2 PRDX6對(duì)成纖維細(xì)胞損傷后的修復(fù)作用（圖2） A為對(duì)照組經(jīng)移液槍頭劃傷細(xì)胞后細(xì)胞纖維斷裂，劃痕處無(wú)細(xì)胞生長(zhǎng)貼壁；而B實(shí)驗(yàn)組劃痕處可見(jiàn)被損傷的細(xì)胞有纖維修復(fù)。表明PRDX6可促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞損傷后的修復(fù)。

3 討論

疼痛不但可引起軀體的不舒適反應(yīng)：心率和呼吸增快、血壓升高、出汗等，還可引起負(fù)性心理反應(yīng)：如恐懼、焦慮、緊張、煩躁不安等[4]。成纖維細(xì)胞作為創(chuàng)傷愈合過(guò)程中的主要效應(yīng)細(xì)胞，對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損有著十分重要的作用，其不斷地合成和分泌大量的膠原并沉積于創(chuàng)面促進(jìn)其愈合[5-6]。

本實(shí)驗(yàn)中隨著PRDX6濃度的增高，皮膚成纖維細(xì)胞的增殖率呈遞增趨勢(shì)，表現(xiàn)為一定的濃度依賴性，表明PRDX6對(duì)正常皮膚成纖維細(xì)胞在一定的濃度范圍之內(nèi)有促進(jìn)生長(zhǎng)作用。由圖2可以看出人皮膚成纖維細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，呈長(zhǎng)梭形，核呈卵圓形，呈放射狀，編織狀或漩渦狀排列，輪廓清楚。圖2中對(duì)照組經(jīng)移液槍頭劃傷細(xì)胞后細(xì)胞纖維斷裂，劃痕處無(wú)細(xì)胞生長(zhǎng)貼壁；而圖2實(shí)驗(yàn)組劃痕處可見(jiàn)被損傷的細(xì)胞有纖維修復(fù)，表明PRDX6可促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞損傷后修復(fù)。

綜上所述：PRDX6有促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的作用，證明了其對(duì)正常細(xì)胞生長(zhǎng)的無(wú)毒性且促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)；能保護(hù)機(jī)體正常細(xì)胞的增值并促進(jìn)其損傷后修復(fù)， 可促進(jìn)患者創(chuàng)傷后傷口愈合，減少創(chuàng)傷疼痛時(shí)間。

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編輯/哈濤