宮頸上皮內(nèi)腫瘤及宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中HPV16感染與hTERT、ki67表達(dá)的關(guān)系

摘要：目的 探討宮頸上皮內(nèi)腫瘤及宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中HPV16感染與hTERT、ki67表達(dá)的關(guān)系。方法 以我院129例宮頸病變患者及30例正常患者的宮頸組織為標(biāo)本，運(yùn)用原位雜交、組織芯片及免疫組化等方法技術(shù)檢測(cè)HPV感染和hTERT、ki67的表達(dá)情況。結(jié)果 除CINⅠ以外，其他HPV16陽(yáng)性率均比正常宮頸組織高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宮頸浸潤(rùn)鱗癌的hTERT表達(dá)與Ki67表達(dá)與正常宮頸組織相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。浸潤(rùn)鱗癌的hTERT表達(dá)顯著比原位癌高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。浸潤(rùn)鱗癌、原位癌的Ki67表達(dá)比正常宮頸組織中的檢測(cè)值高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HPV16感染與hTERT表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.335，P<0.01），而與Ki67表達(dá)無(wú)相關(guān)性（r=-0.037，P=0.675>0.05）。hTERT與Ki67表達(dá)存在顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.394，P<0.01）。結(jié)論 HPV16感染后組織中hTERT、ki67表達(dá)發(fā)生改變，導(dǎo)致CIN的發(fā)生并逐步發(fā)展為SCC。通過(guò)hTERT、ki67指標(biāo)檢測(cè)有助于宮頸鱗癌和宮頸癌前病變的診斷。

關(guān)鍵詞：宮頸上皮內(nèi)腫瘤；宮頸鱗狀細(xì)胞癌；HPV16；hTERT；ki67

宮頸上皮內(nèi)腫瘤（CIN）是女性宮頸癌前病變，最終可導(dǎo)致宮頸鱗狀細(xì)胞癌（SCC）的發(fā)生。目前對(duì)CIN到SCC的演變研究較多，對(duì)其二者發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中伴隨的組織標(biāo)記物表達(dá)的水平研究也取得一定成功。本研究主要探討宮頸上皮內(nèi)腫瘤及宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中HPV16感染與hTERT、ki67表達(dá)的關(guān)系，以我院病理科提供的159份宮頸組織石蠟標(biāo)本最為材料，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 以我院病理科提供的129份病變宮頸組織及30份正常宮頸組織石蠟標(biāo)本作為研究材料。129份病理組織中，CINⅠ27份，CINⅡ25份，CINⅢ21份，原位癌7份以及浸潤(rùn)癌49份。所有病理標(biāo)本全部經(jīng)備份HE染色病理學(xué)觀察后確診并分級(jí)。

1.2方法 組織芯片：所有病理切片HE染色后進(jìn)行目標(biāo)組織標(biāo)記，然后對(duì)受體石蠟標(biāo)本進(jìn)行微陣列設(shè)計(jì)和打孔。隨后將目標(biāo)組織放入受體石蠟陣列中，進(jìn)行4um切片裱褙在APES處理的破片上。免疫組化：病理切片經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)后加適量雙氧水，然后加入抗體，最后加增強(qiáng)劑和酶標(biāo)，觀察顯色。原位雜交：經(jīng)內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活，標(biāo)記探針變性后立即冰凍。按探針1：9和雜交液混合后滴加在標(biāo)本上，經(jīng)烘烤使RNA變性后分別按SSC2倍、SSC0.5倍、SSC0.2倍進(jìn)行充分洗滌，然后在37℃下30min后加Strep-AP，30min后NBT/BCIP顯色。

1.3結(jié)果判定 高倍鏡下選定每個(gè)組織3個(gè)野觀察，每視野共計(jì)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。HPV感染陽(yáng)性以所觀察細(xì)胞的細(xì)胞核出現(xiàn)紫藍(lán)色為陽(yáng)性。hTERT、Ki67陽(yáng)性以細(xì)胞核現(xiàn)棕黃色為標(biāo)準(zhǔn)。其中以大于50.00%為（3+），25.00%～50.00%為（2+），10.00%～25.00%為（1+），小于10.00%為（-）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將所有觀察數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。計(jì)數(shù)資料的比較差異χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析采用Speaman等級(jí)相關(guān)分析，以P<0.05為具有相關(guān)性。

2 結(jié)果

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，除CINⅠ以外，其他HPV16陽(yáng)性率均比正常宮頸組織高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。hTERT表達(dá)與Ki67表達(dá)情況分析發(fā)現(xiàn)，CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宮頸浸潤(rùn)鱗癌上述兩種標(biāo)記物檢查均與正常宮頸組織有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。此外，浸潤(rùn)鱗癌的hTERT表達(dá)顯著比原位癌高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。還有浸潤(rùn)鱗癌、原位癌的Ki67表達(dá)也比正常宮頸組織中的檢測(cè)值高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

HPV16感染與Ki67、hTERT表達(dá)的相關(guān)性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HPV16感染與hTERT表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.335，P<0.01），而與Ki67表達(dá)無(wú)相關(guān)性（r=-0.037，P=0.675>0.05），見(jiàn)表2。而hTERT與Ki67表達(dá)的關(guān)系分析結(jié)果顯示，二者之間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=33.743，P<0.01），相關(guān)性分析結(jié)果顯示二者之間存在顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.394，P<0.01）。

3 討論

HPV感染可能與CIN的發(fā)生有著密切的關(guān)聯(lián)性[1]。其中HPV16感染可能與SCC的發(fā)生關(guān)系最為密切。目前，對(duì)HPV感染后組織中Ki67、hTERT表達(dá)情況的研究較多。主要認(rèn)為，HPV編碼的蛋白產(chǎn)物E6蛋白，通過(guò)myc與Sp1 cis 元件激活端粒酶[2]，而端粒酶激活與宮頸癌變?cè)缙谟忻芮嘘P(guān)系，且后期端粒酶表達(dá)更強(qiáng)，因而預(yù)示著CIN與SCC的病變過(guò)程與端粒酶的激活有關(guān)系。同時(shí)，hTERT的表達(dá)與端粒酶最終在組織中的活性相關(guān)。因此可以認(rèn)為，端粒酶的激活與誘導(dǎo)宮頸組織細(xì)胞發(fā)生變化有聯(lián)系。而Ki67作為衡量細(xì)胞增生程度的可靠指標(biāo)，通過(guò)Ki67表達(dá)水平的檢測(cè)，能有效判斷細(xì)胞的癌變進(jìn)展情況。

本研究結(jié)果顯示，CIN和SCC組織與HPV16陽(yáng)性率比較普片高于正常宮頸組織，CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宮頸浸潤(rùn)鱗癌Ki67、hTERT表達(dá)水平也與正常宮頸組織有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明通過(guò)Ki67、hTERT表達(dá)水平的檢測(cè)有助于判斷患者HPV16感染后宮頸細(xì)胞的變化，對(duì)宮頸組織從CIN到SCC的演變也有一定的推斷意義和價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]Wolf JK， Ramirez PT. The molecular biology of cervical cancer[J].Cancer Invest igation，2001，19 （6）：621-629.

[2]Oh ST， Kyo S， Laimins LA. Telomerase activation by human papillomavirus type 16 E6 prot ein： induction of human telomerase reverse transcriptase expression through Myc and GC-rich Sp1 binding sites[J].J Virol，2001，75：5559-5566.編輯/王敏