公安干警脂溢性角化癥皮損MMP—1的表達及干預

摘要：目的 比較公安干警脂溢性角化癥（Seborrheic keratosis，SK）患者的長時間接受紫外線照射曝光部位的皮損、非曝光部位皮損以及正常皮膚MMP-1的表達，探討SK的發病與皮膚光老化之間的關系。 方法 ①選取曝光部位的SK皮損50例，非曝光部位皮損50例，正常皮膚30例。采用免疫組化Elivison法來檢測曝光部位、非曝光部位皮損以及正常皮膚MMP-1的表達情況；②選取SK皮損90例，分為三組，分別為外用遮光劑二氧化鈦霜組，外用安慰劑組和未用藥組，用藥后3個月比較三組皮損MMP-1表達有無差異。結果 ①曝光部位SK皮損MMP-1的表達陽性率為60.00%，正常對照組陽性率為（30.00%），二者有顯著性差異，非曝光部位SK皮損MMP-1的表達陽性率為42.00%，與正常無顯著性差異；②3個月后，二氧化鈦霜組、安慰劑組、未用藥組SK皮損MMP1的表達陽性率分別為36.67%、56.67%、60.00%。外用二氧化鈦霜組MMP1的表達陽性率明顯減低（P<0.05）。結論 MMP-1在曝光部位的SK中呈現高表達。長期紫外線照射導致的皮膚光老化可能是曝光部位SK發生的一個誘發因素。

關鍵詞：SK；MMP-1；皮膚光老化

脂溢性角化癥（Seborrheic keratosis，SK），是表皮的良性腫瘤。在老年人高發，其病因尚未完全闡明，有研究認為可能與遺傳因素，年齡、HPV感染等多種因素有關[1]。其中，紫外線照射在SK發生中的作用近年來日益受到學者們的重視[2]。基質金屬蛋白酶MMP是一類鋅離子依賴的蛋白酶，在細胞外基質的降解和重塑中起著重要的作用。同時參與了血管生成、炎癥反應、腫瘤形成等多種生理及病理過程。其中MMP-1又稱間質膠原酶，與皮膚光老化有關[3]。本研究采用免疫組化Elivison法來檢測SK患者曝光部位皮損、非曝光部位皮損以及正常皮膚MMP-1的表達，以期對SK的發病與皮膚光老化的關系做出一定的探討。

1 資料與方法

1.1一般資料 實驗一：所有患者均來自2011年～2014年來我院門診就診的公安干警，選取均為皮損典型、臨床和病理診斷明確的SK患者作為研究對象，觀察組由從事交通協勤等戶外工作5年以上的公安人員中選取，對照組由從事非戶外性工作的公安人員中選取，所有患者均為男性，皮膚外科門診手術切除或病理室環鉆取材，石蠟包埋組織塊。觀察組選取曝光部位（面部，手背，前臂等處）的SK皮損50例，患者年齡29～57歲，平均（48.59±6.86）歲。非曝光部位（腹、背、臀部等處）的SK皮損50例，患者年齡26～58歲，平均（48.61±6.25）歲。對照組選取非曝光部位正常皮膚30例，年齡32～60歲，平均（48.70±6.61）歲。

實驗二：選取曝光部位（面部，手背，前臂等處）發生的SK共90例，全部患者均為男性，年齡30～58歲，平均（47.71±6.78）歲。隨機分為三組，每組30例，觀察組、對照組、安慰劑組樣本在性別、年齡方面具有可比性（P>0.05）。

1.2主要試劑 ①兔抗人MMP-1多克隆抗體（購自武漢博士德生物工程有限公司，產品編號：BA0568）；②增強型二步法免疫組化檢測試劑盒（購自北京中杉金橋生物技術有限公司，通用性kit，產品編號：PV-6000）。

1.3藥物 ①二氧化鈦霜：由天津市公安醫院制劑室提供。主要成分組成：每100g二氧化鈦霜含二氧化鈦5g，基質成分：單硬脂酸甘油酯，液體石蠟，硬脂酸，羊毛脂，白凡士林，三乙醇胺，羥苯乙酯。批準文號：津藥制字H2007129。SPF值：9；②安慰劑采用市售凡士林霜。

1.4方法

1.4.1標本制備及免疫組化染色 所有標本均經10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚度連續切片，進行免疫組化染色。

1.4.2免疫組化染色 采用增強型二步法（Elivison法）進行檢測，按試劑盒說明書操作：常規石蠟切片于多聚賴氨酸處理的防脫片上，67℃烤片2h；切片放入二甲苯中浸泡2次，10min/次；梯度乙醇水化；微波抗原修復；滴加一抗，4℃孵育過夜；PBS沖洗3次，每張切片滴加1滴酶二抗聚合物， 常溫孵育30min；PBS沖洗3次，DAB顯色；自來水沖洗5min；蘇木素復染，水洗；1%鹽酸乙醇分色2s；梯度乙醇脫水；二甲苯透明，中性樹膠封片，觀察結果，顯微鏡拍照。

1.4.3用藥方法 三組皮損，分別為外用二氧化鈦霜組；安慰劑組和未用藥組。在同一患者的相同部位分別外用二氧化鈦霜和凡士林，用藥3個月后取材，免疫組化檢測。

1.5結果判定標準 以表皮細胞胞漿和真皮淺中層細胞胞漿和出現棕黃色顆粒為陽性結果。隨機選取5個高倍視野（×400），計數200個細胞中陽性細胞數，先按染色強度打分：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；再按陽性細胞所占百分比打分：陽性細胞<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。將染色程度和陽性細胞百分比的乘積進行評分：0-4分為陰性（-），大于4分為陽性（+）。

1.6主要分析軟件及統計學方法 主要分析軟件采用北航圖象中心病理圖文管理系統4.10版。統計學軟件采用SPSS18.0統計軟件進行統計分析。

2 結果

正常對照組皮膚MMP-1表達陽性率為30.00%（9/30），曝光部位SK皮損MMP-1的表達陽性率為60.00%（30/50），經χ2檢驗二者有顯著性差異（P<0.05）；非曝光部位SK皮損MMP-1的表達陽性率為42.00%（21/50），與正常對照組無顯著性差異（P>0.05）。見表1。外用二氧化鈦霜和安慰劑3個月后，二氧化鈦霜組、安慰劑組、未用藥組皮損MMP1的表達陽性率分別為36.67%（11/30）、56.67%（17/30）、60.00%（18/30）。外用二氧化鈦霜組MMP1的表達陽性率明顯減低（P<0.05）。安慰劑組與未用藥組MMP1的表達陽性率無顯著性差異（P>0.05）。見表2。

3 討論

SK是發生于角質形成細胞的一種腫瘤，與遺傳因素有關，發病機制尚不明確，近年有學者研究認為，日光紫外線的照射在SK的發生中起到重要的作用。Yeatman的研究發現日光暴露區域比非暴露區域更容易發生SK[4]。

基質金屬蛋白酶MMP是一類鋅離子依賴的蛋白酶家族[5]。MMP分為四個亞組，即膠原酶、明膠酶、基質溶解素、膜型基質金屬蛋白酶，可降解各類膠原、蛋白多糖及基質蛋白。基質金屬蛋白酶的作用可被MMP抑制劑所抑制，其中MMP-1的作用以降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原為主[3]，與皮膚光老化有關。皮膚光老化的基本特征之一是細胞外基質持續或反復的蛋白酶解。紫外線的照射可以誘導角質形成細胞和真皮的成纖維細胞分泌的基質金屬蛋白酶MMP-1、 MMP-3產生過量[6]，降解皮膚細胞外基質成分，基質金屬蛋白酶的活化在皮膚紫外線光老化中起到至關重要的作用[7]。MMP-1在正常皮膚組織中呈現低表達[7]。Tsukifuji等的研究發現，紫外線損傷的皮膚中有MMP-1、 MMP-7的沉積[8]。紫外線作用于皮膚后，表皮和真皮細胞的生長因子受體和細胞因子受體被活化，進一步激活絲裂原，從而活化蛋白激酶途徑，其效應為激活轉錄因子激活蛋白，刺激基質金屬蛋白酶基因的轉錄[9]。

我們的研究結果顯示，皮膚光老化的特征性指標-MMP-1在曝光部位SK皮損呈現高表達，提示紫外線照射導致的皮膚光老化在SK的發病中起到了一定的作用，皮膚光老化可能是曝光部位SK發生的一個誘發因素。而非曝光部位SK皮損MMP-1的表達與正常對照組無顯著性差異，提示非曝光部位SK的發病可能還存在其它多種復雜的因素。

二氧化鈦屬物理性遮光劑，是無機防曬劑中使用最多的成分。對紫外線可以起到反射、散射及部分吸收的作用。二氧化鈦對中長波紫外線都具有防護作用[10]，我們的研究顯示防曬劑二氧化鈦可以減少曝光部位SK皮損MMP-1的表達，提示防曬劑對曝光部位發生SK具有一定的保護作用。因此，長期接受紫外線照射的室外工作者如果能加強對紫外線的遮光防護可能對預防SK的發生有裨益。

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編輯/哈濤