轉錄因子YY1在非小細胞肺癌中的表達研究

摘要：目的 探討轉錄因子YY1表達與非小細胞肺癌（non-small-cell lung carcinoma，NSCLC ）發生和發展的關系。方法 應用免疫組織化學法檢測45例非小細胞肺癌組織和相應癌旁組織中轉錄因子YY1的表達。結果 轉錄因子YY1在非小細胞癌組織和相應癌旁組織中陽性表達率分別為73.3%和31.1%，差異有統計學意義（P=0.001）；轉錄因子YY1表達與非小細胞肺癌分化相關（P=0.000），與患者年齡、性別，腫瘤分型、分期和淋巴結轉移無關。結論 轉錄因子YY1與非小細胞肺癌發生和發展相關。

關鍵詞：YY1；非小細胞肺癌；免疫組化

肺癌是常見的惡性腫瘤，嚴重危害人類健康。80%的肺癌在組織類型上屬于非小細胞肺癌[1]。轉錄因子YY1是多功能蛋白，參與調控正常的生理過程，如發育、分化、復制和細胞增殖。越來越多的研究表明，轉錄因子YYl通過與不同的蛋白輔助因子相互作用調控腫瘤相關基因，在腫瘤的發生、發展中發揮重要作用。本研究采用免疫組化的方法檢測非小細胞肺癌以及相應癌旁組織中轉錄因子YY1的表達，以探討轉錄因子YY1與非小細胞肺癌發生、發展的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 肺癌組織取自2010年8月～2013年8月，徐州市腫瘤醫院手術標本45例，鱗癌18例，腺癌27例，其中高分化5例，中分化29例，低分化例11例； 淋巴結無轉移者有23例， 有轉移者有22例。臨床分期，依據1997年國際抗癌聯盟（Union for International Cancer Control， UICC） TNM分期標準，其中Ⅰ期20例，Ⅱ期10例，Ⅲ期15例。本組男25例，女20例， 其中≤70歲組22例，>70歲組23例。所有患者術前均未經任何化療和抗腫瘤治療，經臨床及病理學檢查確診為非小細胞肺癌non-small cell lung cancer （NSCLC）。同時取相應癌旁組織（45例）設為對照，進行配對研究。標本經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，制備切片。

1.2 試劑與方法 即用型鼠抗人YY1免疫組化單克隆抗體（sc-281）和即用型快速免疫組化MaxVi-sionTM檢測試劑盒（KIT-5001）購自福州邁新生物技術開發有限公司。 實驗步驟按照試劑提供的說明書進行。PBS替代一抗作為陰性對照，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結果和照相。

1.3 結果判斷 結果判斷標準：YY1蛋白表達于細胞核。按陽性細胞所占的百分比計分：在高倍鏡下取4個不同視野， 各計數200個細胞，計算陽性細胞的百分比，0分為陰性，1分為陽性細胞≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為>75%；按染色強度計分：0分為無色，1分為淺黃色，2分棕黃色，3分為棕褐色。兩項積分乘積≥3分為陽性，否則為陰性。

1.4 統計學處理 應用SPSS13.0軟件包對資料進行x2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 非小細胞肺癌組織中YY1的表達 YY1的陽性產物主要定位于細胞核，胞核被染成棕黃色。 非小細胞肺癌組織和相應的癌旁組織中YY1蛋白陽性表達率分別為73.3%（33/45）和31.1%（14/45），有顯著性差異（P=0.001），表1和圖1～2。

2.2 非小細胞肺癌中YY1的表達與臨床病理特征的關系 非小細胞肺癌組織中YY1的表達與年齡、性別、是否有淋巴結轉移、病理分型和 TNM分期無關。低分化和中分化的非小細胞肺癌組織中YY1的陽性表達率分別為100% （11/11）和72.4%（21/29），高分化的非小細胞肺癌中YY1無表達，差異有統計學意義（P=0.000）。見表2。

3討論

YY1又稱δ、NF-E1、UCRBP或CF1是鋅指類轉錄因子GLI-Krüppel家族中的一員，也是多梳蛋白家族（polycomb protein group，PcG）中的一員。目前國內外學者對YY1 研究廣泛，除了細胞增殖、分化、凋亡方面的研究外，還包括B細胞發育、基因印跡、X染色體失活、病毒感染等[2-3]。YY1在大部分腫瘤組織和細胞中表達升高的現象，表明其可能參與腫瘤的發生發展。Seligson等用免疫組織化學方法檢測發現，YYl蛋白在前列腺癌和正常組織之間的表達存在差異，前列腺癌及前列腺上皮內瘤變組織中YYl的表達明顯高于正常或良性前列腺肥大組織，轉移灶內YYl的表達明顯高于原發灶，表明YY蛋白隨著臨床分期及病理分級的升高而升高。de Nigris等通過免疫組化方法發現骨肉瘤組織較正常對照YY1 高表達，且進一步研究表明原發骨肉瘤YY1 高表達的病人與骨肉瘤的轉移和預后質量差相關。本研究中，45例NSCLC中陽性表達率為73.3%， 顯著高于癌旁組織的31.1%，差異有統計學意義（P<0.01）， 缺失表達率在癌組織和相應癌旁組織分別為26.7%和68.9%。 進一步提示YY1的過表達與非小細胞肺癌相關。

本研究發現YY1表達與非小細胞癌的分化程度相關。有研究報道YYl在急性髓細胞樣白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤中也呈高表達，且高度惡性淋巴瘤（如彌漫性大B細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤）組織內YYl表達水平明顯高于低度惡性淋巴瘤和正常B細胞，YYl高表達可促進腫瘤細胞的生長并增強其侵襲性，YYl的表達水平可作為分析高度惡性淋巴瘤有效的主要臨床和生物學指標，生存分析顯示YYl表達增高與預后不良有關。YYl在惡性腫瘤的發生發展和轉移中起重要作用。本實驗45例NSCLC中高、中分化病理類型陽性表達率分別為0%和72.4%，顯著低于低分化病理分型陽性表達（100%），差異有統計學意義（P<0.01），本研究發現有淋巴結轉移的非小細胞癌中YY1陽性率高于未有淋巴結轉移者；TNM分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組中YY1陽性率逐漸升高，但差異均無統計學意義，這可能和樣本數量較小有關。本研究發現鱗癌中YY1陽性表達率為72.2%，腺癌中YY1陽性表達率為66.7%，但差異無顯著意義，對YYl進行更深一步的研究會給人NSCLC基礎研究和臨床工作提供更加有力的幫助。

參考文獻：

[1]Yang L，Parkin DM，Ferlay J，et al.Estimates of cancer incidence in China for 2000 and projections for 2005[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2005，14（1）：243-50.

[2] Pan X，Jones M，Jiang J，et al.Increased expression of PcG protein YY1 negatively regulates B cell development while allowing accumulation of myeloid cells and LT-HSC cells[J].PLoS One，2012，7（1）：e30656.

[3] Thiaville MM，Kim J .Oncogenic potential of yin yang 1 mediated through control of imprinted genes[J].Crit Rev Oncog，2011，16（3-4）：199-209.

編輯/王海靜