艾滋病病毒檢測方法研究

艾滋病病毒會對人體免疫系統造成較為嚴重的侵襲，使得人體出現較多的疾病。而艾滋病預防控制工作的重點就在于正確地診斷出HIV感染[1]， 只有確定了傳染源，才能夠對艾滋病傳播進行更好的控制。而只有通過檢測HIV的病毒分離培養、核酸、抗原、特異性抗體等之后，才能夠確診是否感染HIV [2]，從目前來看，實驗室檢測HIV的主要方法依舊是血清學實驗。本文就艾滋病病毒檢測方法研究進展進行探討。

1 HIV 抗體檢測

確證試驗和初篩試驗是目前較為常用的HIV 抗體檢測技術，確證試驗包括放射免疫沉淀實驗、條帶免疫實驗、免疫印跡試驗；篩查試驗包括明膠顆粒凝集試驗、膠體金免疫滲濾實驗、免疫熒光、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。

2 HIV核酸測定

目前臨床上檢測HIV最為敏感的方法就是HIV核酸測定，多用于對病毒載量（HIV RNA 拷貝數）進行測定。人若感染HIV 后，血漿中病毒載量會與病情發展速度呈正相關關系。在艾滋病發病晚期和艾滋病初期感染時，HIV 病毒載量通常都是處于最高水平，但是也能夠在慢性潛伏期檢出。連接酶酶促鏈式反應、核酸序列依賴性擴增、分支DNA 信號放大系統、逆轉錄多聚酶鏈反應是四種測定方法。雖然病毒核酸檢測方法的靈敏度較高，但是由于HIV 基因存在著較大的多樣性，會讓檢測的敏感性存在著較大的限制。此外，在檢測病毒核酸時，通常對于操作人員要求較高，操作復雜，檢測試劑昂貴，檢測儀器昂貴，既不能快速檢測大量患者，又不能推廣應用于基層醫院[3]。

3 HIV的分離培養

HIV的分離培養通常都采用將受檢者標本（精液、血漿、全血、PBMC及其他體液）與靶細胞（PBMC）共培養的方法，樣本可采用精液、血漿、全血、PBMC及其他體液，但是新鮮抗凝全血是其首選樣本。HIV分離培養結果為陰性，則不能排除HIV感染；但是只要結果為陽性，那么就說明其為HIV感染。HIV的分離培養可輔助診斷HIV感染，也可檢測HIV表型耐藥性，還可以用于研究HIV生物學特征[4]。

4 濾紙干血片法（DBSS）

近年來，傳統方式的樣本儲存、樣本運輸、樣本采集等方面的困難都被DBSS HIV-1 抗體檢測方法所彌補。DBSS HIV-1 抗體檢測方法能夠定量檢測HIV-1DNA RNA，生物穩定性較佳，實驗的特異性和敏感性也不會隨著而降低[5]。

5 免疫功能檢查

通 常都采用非流式細胞儀測定法和流式細胞儀測定法來計數CD8+T淋巴細胞和CD4+淋巴細胞，檢測設備多采用流式細胞儀，HIV感染者免疫狀況可以通過CD4+T淋巴細胞計數來進行評價， 以此來作為臨床治療和分級指標的輔助條件； 可判斷是否需要預防性治療及預后狀況，也能夠對HIV感染者的感染風險和疾病進展進行有效地評估。據研究，CD4T淋巴細胞/CD8T淋細胞越低，那么則證明免疫缺陷越嚴重。

6 抗原檢測

p24 抗原檢測技術是目前臨場上較為常見的HIV 抗原檢測。 p24抗原在病毒的成熟過程和包裝過程中往往都會起到較為重要的作用，是HIV的主要結構蛋白。缺失 p24，會造成無法正常組裝病毒的情況，p24 抗原是較好地檢測機體是否感染 HIV的病原學標志。 HIV在感染后2～3w就能夠被有效地檢測出來，抗原高峰期則是在感染后1～2 月。 隨著時間的推移，HIV 感染者就會進入到無癥狀期，p24 抗原濃度會出現大幅度地降低，直至難以測出。當血清中HIV 抗原再度增長，那么就說明HIV感染者已瀕臨艾滋病發作期，免疫系統被破壞，病毒大量繁殖。HIVp24在艾滋病的基礎研究、新疫苗的評價、藥物療效評價、鑒定新生兒感染、早期診斷HIV 感染、判斷預后、監測病程進展等方面具有極為重要的作用。

HIVp24 抗原檢測主要包括IFA（免疫熒光分析技術）、RIA（放射免疫分析）、ELISA（酶聯免疫吸附試驗）三種技術，其中，對HIV 感染檢測最為敏感的常規方法就是測定 p24 抗原技術，以夾心法 ELISA 為基礎。

7 HIV耐藥性檢測

HIV 耐藥變異株隨著HAART（高效抗逆轉錄病毒聯合療法）的廣泛開展而不斷出現，還很容易出現藥物交叉耐藥的現象。從目前來看，表型檢測法和基因型檢測法是檢測各種HIV-1耐藥性的主要方法。

8 HIV-1新近感染檢測

總之，特異度高、靈敏度高的分析方法能夠便于早期診斷HIV，有利于對疾病進程進行監測和預測，避免漏檢，縮短檢測的窗口期。隨著醫療技術的快速發展，HIV 的實驗室檢測正朝著自動化、準確、敏感、快速、簡便的方向不斷發展。

參考文獻：

[1] 姜擁軍，王亞男，張子寧，等. 艾滋病病毒感染者/艾滋病病人臨床實驗室檢測方法研究[J]. 中華檢驗醫學雜志. 2013，26（03）：102-104.

[2] 趙立慶，雷素萍，李連學，等. ELISA法檢測尿液中HIV-1抗體的研究分析[J]. 中國艾滋病性病. 2013，33（05）：130-136.

[3]Weber B， Berger A， Rabenau H， et al . Evaluation of a New Combined Antigen and Antibody Human Immunodeficiency Virus ScreeningAssay ，VIDAS HIV DUO Ultra[J]. J Clin Microbiol ， 2012， 40（4）： 1420-1426.

[4]Celum CL， Coombs RW， Jones M， et al. Risk factors for repeatedly reactive HIV-1 EIA and indeterminate western blots. A population-based case-control study[J]. Arch Intern Med ， 2014， 154（5）： 1129-1137.

[5]Weber B，Fall EH，Berger A，et al.Reduction of diagnostic windowby new fourth-generation human immunodeficiency virus screening assays[J]. Journal of Clinical Microbiology，2012，68（14）：130-135.

[6]Schüpbach J，Flepp M，Pontelli D，et al.Heatmediated immune complex dissociation and enzymelinked immunosorbent assay signal amplification render P24 antigen detection in plasma as sensitive as HIV 1 RNA detection by polymerase chain reaction，AIDS，1996，10（10）：1085-1090.編輯/許言