宮頸癌盆腔淋巴結微轉移分子檢測及價值分析

摘要：目的 了解宮頸癌盆腔淋巴結微轉移分子（HPV與端粒酶活性）的表達及其臨床意義。方法 回顧性分析我院2011年12月～2013年12月收治的64例宮頸癌患者的臨床資料，采用熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）與聚酶鏈反應-酶聯免疫吸附測定法（PCR-ELISA），分析其盆腔淋巴結HPV載量、Ⅰa-Ⅱb期宮頸癌組織端粒酶活性表達。結果 與常規病理檢查結果相比較，實驗組端粒酶、宮頸癌淋巴結HPV16/18陽性率明顯較高（P<0.05），對照組均呈陰性；與病理陰性的端粒酶活性、淋巴結HPV16/18拷貝數相比較，病理陽性明顯較高（P<0.05），但較原發灶低（P<0.05）；端粒酶、淋巴結HPV16/18表達呈正比例關系（P<0.05）。結論 在與端粒酶活性表達檢測中，FQ-PCR、PCR-ELISA技術的宮頸癌淋巴結微轉移檢出率較常規病理組織高，值得臨床應用。

關鍵詞：宮頸癌；淋巴結；HPV；端粒酶

本文主要對我院2011年12月～2013年12月收治的64例宮頸癌患者的臨床資料進行回顧性分析，旨在探究宮頸癌盆腔淋巴結微轉移分子表達及其臨床意義，相關報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本組選擇我院于2011年12月～2013年12月收治的宮頸癌患者64例為研究對象，均經活檢組織病理學檢查確診后行全子宮與盆腔淋巴結清掃術，年齡（22～64）歲，平均年齡在（45.12±7.35）歲；9例Ⅰa期，19例Ⅰb期，29例Ⅱa期，7例Ⅱb期；6例腺癌，63例鱗癌；19例高分化，28例中分化，17例低分化。擇取64例良性女性疾病患者的淋巴結為陰性對照組，年齡22～65歲，平均年齡在（45.87±8.05）歲。

1.2 方法

1.2.1 HPV16/18亞型檢測方法 收集宮頸癌、淋巴結組織，1/2送常規病理檢查，另1/2保存備用。取試劑盒HPV16/18陽性標準品，行FQ-PCR反應，包括終2LlDNA模板、HPV16/18反應混合液等。于60℃30s、95℃5s、94℃min、37℃5min擴增條件下，行40次反應循環。對每一濃度標準品行測3次，繪制標準曲線。標本HPV檢測需組織勻漿，將裂解液50mlDNA置入其中，提取DNA，行PCR擴增。

1.2.2 端粒酶檢測方法 取勻漿組織50mg，將裂解液冰浴30min，按照12000轉離心20min，取上清液2m，以備檢測。接著，施加48ml效應體系，涵蓋dNTP、生物素標記引物等，于72℃90s、50℃30s、94℃5min、25℃30min條件下循環30次。擴增產物檢測：取擴增產物5ml、變性液20μI，于10min室溫變性下，施加雜交混合液100ml，在37℃微孔板上雜交持續3h后施加100ml雜交混合液，持續半小時后添入底物緩沖液，當顯色停止效應，測定吸光度值。

1.3觀察指標 分析HPV、端粒酶，其中一項陽性則為淋巴結微轉移。

1.4統計學方法 應用SPSS16.0統計學軟件對上述資料進行數據分析，計量資料采用（x±s）表示，P<0.05時為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1宮頸癌、淋巴結組織HPV16/18檢測結果分析 宮頸癌組織HPV陽性59例，其中54例HPV16陽性，5例HPV18陽性；宮頸癌淋巴結中12例陽性，21例微轉移；對照組淋巴結HPV均呈陰性，三組差異具有顯著統計學意義（P<0.05），見表1。

注：M與原發灶組比較，P<0.05；N與病理陰性淋巴結組比較，P<0.05

2.2 宮頸癌、淋巴結組織端粒酶活性表達分析 在宮頸癌組織64例中，58例端粒酶表達呈陽性；常規病檢轉移的13例淋巴結呈陽性；對照組宮頸癌淋巴結呈陰性，三組差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

注：M與原發灶組比較，P<0.05；N與病理陰性淋巴結組比較，P<0.05。

2.3淋巴結組織中端粒酶活性表達與HPV陽性相關性分析及宮頸癌淋巴結微轉移影響因素淋巴結端粒酶表達與HPV陽性呈正比例關系，見表3。

3討論

淋巴結轉移屬于誘發宮頸癌轉移的關鍵途徑，已成為宮頸癌預后與治療判斷的依據。據相關研究資料顯示，常規病理檢查證實未出現淋巴結轉移的宮頸癌患者術后可能還會誘發盆腔復發與轉移，可能與癌細胞微轉移存在一定的關聯性[1]。在本文研究中，從分子水平出發，檢測宮頸癌淋巴結HPV與端粒酶，從而對微量癌細胞進行預測，補充了病理診斷的缺陷。

本文研究發現，HPV陽性患者轉移淋巴結HPV全部呈陽性，病理陰性淋巴結HPV部分呈陽性，表明宮頸癌淋巴結轉移，其HPV亞型與原發灶一致，提示原發灶可轉移為淋巴結中癌細胞系，且淋巴結病理陽性HPV拷貝數較病理陰性患者高，與相關文獻報道吻合。究其根源，可能與癌細胞數量相關[2]。

有學者認為，常規病理組織檢查癌轉移淋巴結端粒酶表達相對較高[3]。在本研究中，宮頸癌轉移淋巴結組織中的端粒酶表達上升，良性女性疾病患者淋巴結未發現端粒酶活性，提示端粒酶活性表達可預測淋巴結轉移。究其根源，其與癌細胞數量、癌細胞增值程度相關。此外，端粒酶活性表達與HPV間呈正比例關系，轉移癌細胞中的HPV經由癌基因刺激活端粒酶，致使癌細胞增值[4，5]。

綜上所述，宮頸癌淋巴結轉移組織中存在HPV與端粒酶活性表達，已成為宮頸癌淋巴結轉移的重要參考指標，可對淋巴結微轉移進行預測，為預后與術后輔助治療判斷提供了可參考價值。

參考文獻：

[1]吉宏，李蓮英，任錦霞，等.CK19檢測早期宮頸癌淋巴結微轉移的臨床研究[J].甘肅醫藥，2011（02）：74-77.

[2]邵峰，樓寒梅，高永良.早期宮頸癌前哨淋巴結微轉移檢測的臨床意義[J].腫瘤學雜志，2011（05）：385-388.

[3]何善陽，袁力，李捷等.宮頸癌盆腔淋巴結高危型HPV分布及其臨床意義的探討[J].中華腫瘤防治雜志，2011（16）：1259-1261.

[4]劉正玲.高危型HPV在宮頸癌前哨淋巴結微轉移中的研究[J].哈爾濱醫藥，2013（01）：9-10

[5]劉爽，茹明芳，劉開江等.子宮頸癌淋巴結微轉移檢測的臨床研究[J].華中科技大學學報（醫學版），2013（04）：480-483.編輯/王海靜