PCNA與MMP—9的表達與宮頸鱗癌放療敏感性的關系

摘要：目的 檢測增殖細胞核抗原（PCNA）、基質金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）在宮頸鱗癌組織、正常組織中的表達水平，研究兩者與宮頸鱗癌放療敏感性的關系。方法收集38例宮頸鱗狀細胞癌患者放療前、放療中鱗癌組織樣本和放療后正常宮頸粘膜組織樣本，采用免疫組化SP法檢測樣本中和PCNA、MMP-9的表達水平，對其結果進行對比分析。結果 PCNA、MMP-9在宮頸鱗癌組織的陽性表達高于正常宮頸粘膜組織（P<0.05），且隨著放療劑量的增加，宮頸鱗癌組織中的PCNA、MMP-9的表達水平較放療開始前明顯下降（P<0.05）。結論 宮頸鱗癌組織中PCNA、MMP-9的高表達提示腫瘤惡性程度高，對放射治療敏感。

關鍵詞：宮頸鱗狀細胞癌；增殖細胞核抗原；基質金屬蛋白酶-9；放療＼

宮頸癌是中國女性最常見的惡性腫瘤之一，宮頸鱗癌大多數對放射治療敏感。早期宮頸鱗癌以手術為主，中晚期患者以放療為主，這是近年來大多數專家學者所達成的共識。要實現依據患者癌組織對放療敏感性的不同而制定不同的個體化治療方案，首先要找到一些指標預測不同個體宮頸鱗癌患者對放療的敏感性。本研究應用SP免疫組化技術研究對比宮頸鱗癌患者放療前、中的癌組織標本及放療后正常宮頸粘膜標本中PCNA、MMP-9表達的檢測，來探討其作為宮頸鱗癌放療敏感性預測分子標志物的可能性，從而為實現早期準確預測宮頸鱗癌患者的放療預后提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年6月～2014年6月在我院接受根治性放射治療的39例宮頸鱗狀細胞癌患者，年齡34～77歲，平均57.49歲。根據FIGO（1995）分期，IB期3例，IIA期5例，IIB期23例，III期8例。所有患者在放療前均未接受其他任何抗腫瘤治療。

1.2方法

1.2.1放療設備 美國瓦里安公司，計劃系統Eclipse，加速器Varian 23EX，北京科霖眾后裝放療機。

1.2.2放療方法 盆腔外照射50 Gy/25 fr，后裝放療600 cGy/次×5次，宮頸A點劑量達80 Gy。

1.2.3取材方法 每例患者放療前鉗取宮頸鱗癌組織標本，在放療中A點劑量達40 Gy時再次鉗取宮頸殘留腫瘤組織，在放療結束后鉗取部分原腫瘤組織處的宮頸粘膜組織。

1.2.4免疫組化方法 鼠抗人MMP-9單克隆抗體、兔抗人PCNA單克隆抗體、免疫組化檢測S-P試劑盒購于福州邁新公司，嚴格按照說明書進行操作。

1.2.5結果判定 PCNA是腫瘤細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性，陰性（-）：無陽性細胞或陽性細胞數<10%；陽性（+）：陽性細胞數11%～24%；陽性（++）：陽性細胞數25%～50%；陽性（+++）：陽性細胞數>50%。MMP-9在腫瘤細胞漿中出現棕黃色顆粒為陽性，陰性（-）：無明顯陽性細胞；陽性（+）：陽性細胞數<25%；陽性（++）：陽性細胞數25%～74%：陽性（+++）：陽性細胞數>75%。

1.3統計學方法 采用SPSS 12.0軟件包進行統計分析，MMP-9、PCNA為計數資料，其差異性比較采用χ2檢驗，兩指標問的相關性研究采用相關分析，各檢驗方法皆以P<0.05為差異顯著標準。

2結果

PCNA與MMP-9在組織樣本的表達卡方檢驗結果顯示：PCNA在放療前宮頸鱗癌組織樣本、放療中宮頸鱗癌組織、放療后宮頸粘膜組織的陽性表達率為74.36%、58.97%、23.08%，三者間的差異有統計學意義（P<0.05），見表1，同樣MMP-9在這三種不同組織樣本中的陽性表達率為79.49%、58.97%、28.21%，差異也有統計學意義（P<0.05），見表1。

PCNA和MMP-9均陽性者19例，PCNA（+）/MMP-9（-）者4例，PCNA（-）/MMP-9（+）者12例，PCNA和MMP-9均陰性者4例。PCNA與MMP-9在宮頸鱗癌組織樣本中表達的相關性Spearman相關分析結果表明，二者在宮頸鱗癌組織樣本中表達呈顯著正相關（r=0.847，P<0.05），見表2。

3討論

PCNA在增殖細胞DNA的合成中發揮重要作用，是判斷腫瘤增殖能力和惡性程度的一項重要指標。Maeda[1]等對胃癌組織研究發現，PCNA表達以癌組織浸潤深度、淋巴結轉移、血管浸潤、肝轉移及腹膜轉移等有顯著相關性。孫淑娥[2]等也在研究中證實PCNA在良性、交界性、惡性卵巢上皮性腫瘤中均有不同程度的表達，其陽性率呈上升趨勢，低分化組表達高于高分化組，PCNA能參與調節腫瘤細胞的增殖活性，影響腫瘤的分化，進而影響腫瘤生物學行為。本文發現隨著放療劑量的增加，腫瘤細胞中PCNA的表達逐漸下降，這也和文獻報道相符，這也說明PCNA的表達與宮頸鱗癌的放療敏感性呈正相關，即PCNA高表達的宮頸鱗癌細胞放射敏感性好。

近年研究發現，細胞外基質的降解是腫瘤侵襲轉移的關鍵步驟之一，在腫瘤發生發展過程中，基質金屬蛋白酶（MMP）常過渡表達，在腫瘤轉移中產生多種作用，包括降解細胞外基質、參與基底膜的降解，促進腫瘤血管新生以及調節腫瘤細胞問及宿主細胞間黏附等[3-4]。本研究發現，MMP-9在放療前的癌組織中表達最高，放療后呈逐漸下降趨勢，在正常宮頸粘膜中鮮有表達，這也反面驗證了侵襲性強的腫瘤細胞放療更為敏感，這為早期宮頸鱗癌選擇放療或手術的方式提供一定的依據。

許多學者[2，5-6]在研究中發現，PCNA和MMP-9在卵巢癌、結直腸癌癌、骨肉瘤中的表達呈正相關，且有統計學意義。我們發現PCNA和MMP-9在宮頸鱗癌中的表達亦呈正相關（P<0.05），說明二者可能在宮頸鱗癌的細胞增殖、新生血管網形成、侵襲和轉移中起著協同作用。

參考文獻：

[1]Maehara Y，Kabashima A，Koga T，et al.Vascularinvasion and potential for tumor angiogenesis and metastasis in gastric carcinoma[J].Surgery，2000，128（3）：408-416.

[2]孫淑娥，田立糧，于紅麗.MMP-9、PCNA在卵巢上皮性腫瘤中的表達及臨床意義[J].中國婦幼保健，2008，23：975-977.

[3]Edwards DR，Murphy G Protases-invasion and more[J].Nature，1998：394-527.

編輯/肖慧