山楂含片中熊果酸的含量測定

摘要：目的 建立山楂片中熊果酸的含量測定方法。 方法 采用高效液相色譜法測定熊果酸。色譜柱：phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm），流動相：以乙腈-0.1%磷酸水洗脫，流速1.0ml/min，檢測波長：210nm，柱溫40℃。結果 陰性對照無干擾，熊果酸在13.5～53.9ng范圍內線性關系良好（r=0.9999），平均回收率為98.3%，RSD=0.9（n=9）， 該法操作簡便，方法穩定，專屬性強，可作為三箭草和堂山楂含片的質量控制方法。

關鍵詞：山楂含片； HPLC；熊果酸；含量測定

三箭草和堂山楂含片由山楂、白砂糖制成。山楂中富含熊果酸等成分，具有疏肝理氣，活血化瘀，助消化等功效，主要用于治療脂肪肝和肝纖維化等癥狀。本研究采用 HPLC法對三箭草和堂山楂含片中指標成分熊果酸進行含量測定。經查閱文獻，尚未有對其成分熊果酸做含量測定的報道。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Aglient 1260生物惰性四元高效液相色譜儀 ，德國梅特勒-托利多XA205DU電子分析天平。

1.2樣品 山楂含片：廣西梧州三箭制藥有限公司保健品廠出品（批號20120816，20121217，20120320）；陰性樣品：按處方缺山楂按工藝制備。熊果酸對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號：110742-200517，供含量測定用）；其他化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm）；乙腈-0.1%磷酸水溶液（68：32）為流動相；流速為1.0ml.min-1；檢測波長為210nm。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取熊果酸對照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品粉末3g，置于50ml錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，稱定重量，超聲20min，放置室溫后用甲醇補足重量，搖勻，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定法 分別精密吸取對照品和供試品溶液各 4μl，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值。按外標法以峰面積計算，即得。

2.5 專屬性考察 取陰性樣品， 按2.3制備陰性供試品溶液，按2.1 色譜條件測定。結果表明在該色譜條件下，陰性對照無干擾，見圖1。

2.6 標準曲線的制備 精密稱取熊果酸對照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度（濃度為： 1.078mg.mL-1）作為對照品儲備液，精密吸取對照品儲備液，1ml置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度（濃度為：0.1078mg.mL-1），搖勻，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，取續濾液，按2.1色譜條件分別進樣分別吸取上述對照品溶液1、5、8、10、20μl，注入高效液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標（Y），熊果酸對照品進樣量（mg）為橫坐標（X）繪制標準曲線，得線性方程： Y=1941.82X +0.185（r=0.9999）結果表明：熊果酸在13.5～53.9ng范圍內，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.7 精密度實驗 取同一份供試品溶液，按2.1色譜條件，連續進樣5次，測定峰面積積分值，RSD=0.3%。表明儀器精密度良好。

2. 8 穩定性實驗 取同一份樣品溶液，放置0、2、4、6、8、10h， 按2. 1色譜條件，分別測定峰面積積分值，按外標法以峰面積計算RSD為0.8%。結果表明待測物在10小時內穩定。

2.9 重復性實驗 精密稱取同一批的樣品（批號：20120816），按2.3 供試品溶液的制備方法試驗，平行操作5份，按2.1色譜條件近樣測定，按外標法以峰面積計算，結果平均含量是5.3mg.g-1，RSD=0.6%。 結果表明本方法重復性良好。

2.10 加樣回收率實驗 精密稱取已測定含量的山楂含片（批號：20120816），（熊果酸含量為5.3mg.g-1）1.0g，平行取樣9份。分別上述濃度為1.078mg.mL-1的熊果酸對照品溶液0.5、0.8、1ml，每個加樣量平行做3份。按2.3 供試品溶液的制備方法制備供試品溶液、按2.1色譜條件測定，按外標法以峰面積計算回收率，平均回收率為98.3%（n=9），RSD=0.9%。

2.11 樣品含量測定 按2.3 供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，2.1的色譜條件， 2.4 測定法測定了本品2批樣品中的熊果酸含量，見表1。

3討論

3.1 提取方法的比較 比較甲醇加熱回流與超聲提取的對實驗結果的影響，結果熊果酸含量基本一致；甲醇超聲20、30、50min的比較，發現超聲時間熊果酸含量一致，說明甲醇超聲20min乙腈能把山楂含片中熊果酸完全提取出來，出于對簡便易行的考慮，決定采用超聲20min；故采用甲醇作為提取液，超聲20min提取熊果酸。

3.2 流動相的選擇 比較甲醇-0.1%磷酸（68：32），乙腈-0.1%磷酸（68：32）的效果，結果有機相選用乙腈時，峰型分離度較好。

3.3 檢測波長的選擇 參考《中國藥典》2010年版一部木瓜中熊果酸的檢測[1]，選擇210nm作為熊果酸的檢測波長。

參考文獻：

[1]中國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010（一部）：57.編輯/許言