對兩種濃度腺嘌呤誘導腎陽虛不育大鼠的評估

摘要：目的 對兩種濃度（200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d）腺嘌呤誘導腎陽虛不育大鼠的評估。方法 將18只成年雄性SD大鼠隨機分成三組，正常對照組、模型A組（200 mg/Kg/d）和模型B組（300 mg/Kg/d），每組6只。對照組與模型組分別予以蒸餾水和腺嘌呤灌胃21 d。觀察大鼠體征、血清性激素、血清肌酐、血清尿素氮、睪丸與腎臟重量及精子密度的變化。結果 與正常對照組相比，2個模型組睪酮、雌二醇、體重、睪丸重量與精子密度明顯降低（P<0.05），卵泡刺激素與黃體生成素水平無明顯變化（P>0.05），血清肌酐、血清尿素氮與腎臟重量明顯升高（P<0.05）。模型B組精子密度低于模型A組（P<0.05），其余指標在2個模型組間無明顯差異（P>0.05）。結論 兩種濃度腺嘌呤均可成功誘導腎陽虛不育模型，較高濃度腺嘌呤對抑制精子發生具有明顯作用。

關鍵詞：腺嘌呤；腎陽虛；不育；大鼠

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A

祖國醫學對治療不育癥有其獨特優勢，腺嘌呤誘導腎陽虛不育動物模型是研究不育最常用的動物模型。本研究探討兩種常用腺嘌呤濃度（200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d）對腎陽虛不育大鼠建模的評估。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實驗動物 SD雄性大鼠，體重280～300 g，18只，清潔級（由廣西中醫藥大學動物實驗中心提供）。

1.1.2藥品及試劑 腺嘌呤（Sigma公司），睪酮（testoterone，T）、黃體生成素（luteotrophic hormone，LH）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、雌二醇（estradiol，E2）放射免疫分析試劑盒（北京北方生物技術研究所）。

1.2方法

1.2.1分組及建模 大鼠適應性喂養1 w后，隨機分成三組：正常對照組、模型A組（200 mg/Kg/d）和模型B組（300 mg/Kg/d），每組6只。正常對照組按2 mL/d劑量予以蒸餾水灌胃，模型組每次給藥前稱體重，A、B組分別按200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d計量并用蒸餾水制成2 mL混懸液灌胃，灌胃21 d。停止灌胃后第2 d處死動物，期間或建模后做下列檢測。

1.2.2指標檢測 ①每天測量體重（確定腺嘌呤用量）、飲食量及尿量，觀察動物一般情況。②性激素及腎功能的檢測：戊巴比妥麻醉后，腹主動脈取血7～8 mL，血標本凝集后取血清2～3 mL，用放免法檢測T、LH、FSH與E2，生化檢測技術檢測血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）與血清肌酐（serum creatimine，SCr）含量。③睪丸與腎臟器官稱重。④精液的提取和分析：將附睪取出，在其頭和尾各沿縱向垂直剪2次，用營養液2 mL孵育10 min，進行精子密度分析。

1.2.3統計學分析 計量資料用（x±s）表示，數據統計采用SPSS13.0 for Windows軟件進行統計學分析。

2結果

2.1一般狀態觀察 正常對照組大鼠發育正常，體重不斷增加，對外界刺激反應靈敏、活動正常，毛發潤澤光滑。2個模型組灌胃1 w后，大鼠都出現畏寒肢冷，蜷縮拱背；2 w起活動減少，反應遲鈍，飲食差，體毛枯疏，失去光澤，并開始出現脫毛，陰囊皺縮，睪丸回升，肛周污染。模型B組在灌胃第3 d出現多尿，模型A組在灌胃第9 d出現多尿。兩組模型組體重明顯減少，持續到死亡或結束實驗。正常對照組無死亡，模型A組在第3 w內死亡2例，模型B組在第1 w內死亡1例、第2 w內死亡1例、第3 w內死亡2例，見表1，圖1。實驗中死亡的動物經尸體解剖檢查，肺組織中未發現藥液及出血點，排除因灌胃操作失誤造成死亡。而每只死亡大鼠均出現大白腎，有的腎表面有出血點。

2.2血清檢測指標變化比較 與正常對照組比較，兩組模型組E2、T顯著降低（P<0.05），BUN、SCr顯著升高（P<0.05），FSH與LH無明顯差異（P>0.05）。2個模型組之間E2、T、BUN、SCr、FSH與LH無明顯差異（P>0.05），見表2。

2.3精子密度與睪丸與腎臟器官稱重 2個模型組的腎臟重量明顯高于正常對照組，睪丸重量與精子密度明顯低于正常對照組（P<0.05）。模型A、B組間腎臟睪丸的重量變化無差異（P>0.05），模型B組的精子密度明顯低于模型A組（P<0.05）。

3討論

不育癥是臨床上常見的疾病，世界衛生組織已將該疾病與心血管病、腫瘤并列，成為當今影響人類生活和健康的3大主要疾病。不育原因涉及男女雙方，據歐美國家統計，不育困擾著世界范圍內10%～15%的夫婦，其中有50%與男性因素相關。基于祖國醫學\"腎為先天之本\"、\"腎主生殖\"的理論基礎，從腎論治男性不育是該研究領域同行的共識。Adachi Y等[1]發現腺嘌呤可直接降低17β-羥類固醇脫氫酶的活性導致睪酮合成減少，或通過腎素-血管緊張素-固酮系統影響睪丸血液循環而損害性腺。袁源等[2]認為腺嘌呤模型，可使睪丸參與代謝的酶及參與精子形成過程的酶活性下降，生精功能低下，睪丸組織病理發生改變，皮質醇及血漿促性腺激素含量下降。腺嘌呤誘導所致的不育大鼠表現為腎陽溫煦生化功能不足，水液代謝異常，生殖機能衰退證候，即：日益消瘦，畏寒肢冷，倦縮拱背，精神萎頓，體毛脫落，基礎體溫降低，多尿，排泄尿素和肌酐能力降低。血中睪丸酮、雌二醇等激素含量降低。腎組織中與糖、脂肪、蛋白質代謝有關的各種酶活性明顯減弱。睪丸組織退行性變，精子產生減少或缺如等[3]。因此，腺嘌呤誘導模型是目前證候特征吻合較理想的一種\"腎陽虛\"模型。

本研究用兩種濃度（200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d）腺嘌呤灌胃大鼠，2個模型組大鼠都出現畏寒肢冷，蜷縮拱背，反應遲鈍，飲食差，體毛枯疏，失去光澤，脫毛；陰囊皺縮，體重減輕，尿量增多等體征；實驗檢測發現睪酮、雌二醇、體重、睪丸重量與精子密度明顯降低，血清肌酐、血清尿素氮與腎臟重量明顯升高，說明2種濃度腺嘌呤均可成功誘導大鼠出現腎陽虛不育癥。在本研究中2個模型組都有死亡例數，兩組之間腺嘌呤致死率無差別。實驗中死亡的動物經尸體解剖檢查，肺組織中未發現藥液及出血點，排除因灌胃操作失誤造成死亡。而每只死亡大鼠均出現大白腎，有的腎表面有出血點，提示腎損傷可能是動物死亡的主要因素之一。盡管兩個模型組之間E2、T、BUN、SCr、FSH與LH無明顯差異，但模型B組在灌胃第3 d出現多尿，模型A組在灌胃第9 d才出現多尿，說明較高濃度腺嘌呤對腎功能的影響更明顯，可致動物較早出現腎陽虛的癥狀。精子密度可直接反映大鼠的生殖能力，本研究中兩個模型組的精子密度明顯低于正常對照組，并且較高濃度的腺嘌呤對精子發生的抑制作用更明顯。影響精子發生的因素很多，包括睪丸特異性生化酶，如：乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）和谷氨酰基轉移酶（Gamma-glutamyltransferase，γ-GT）。其中LDH 可參與生精上皮的成熟；γ-GT 可促進精子的成熟[4]。因此，腺嘌呤抑制精子發生的作用機制還需做進一步的研究。

參考文獻：

[1]Adachi Y， Nakada T. Effectof experimentally induced renal failure on testicular testosterone synthesis in rats[J]. Arch Androl，1999，43（1）：37-45.

[2]袁源，曹貴珠，卞慧敏.補腎法治療男性不育癥的實驗研究概況[J].時珍國醫國藥，2003，14（5）：306-307.

[3]鄭平東，朱燕俐，丁名城，等.腺嘌呤制作慢性腎功能不全動物模型[J].中華腎臟病雜志，1989，5（6）：342-343.

[4]黃天倫，夏明珠，任開明.腺嘌呤致雄性不育和慢性腎衰大鼠模型的相關性研究[J].中國男科學雜志，2003，17（3）：171-173.編輯/肖慧