HPLC法測定糖清膠囊中甘草酸及甘草苷的含量

【摘 要】目的：對糖清膠囊中的甘草酸和甘草苷的含量進行有效測定。方法：采用色譜柱的測量方法來進行測量，其中甘草酸的流動相主要是甘醇、醋酸銨溶液、冰醋酸。檢測的波長為250nm，甘草苷乙腈、冰醋酸為流動相，檢測波長為276nm，二者的色譜柱溫度都為30℃；結果：甘草酸單銨鹽在標準的范圍內呈現出較好的線性關系；而甘草苷呈現出良好線性關系的范圍比甘草酸的范圍要小，二者的回收率也存在著一定的差異。結論：這種操作方式體現出一定的簡單性和準確性，在糖清膠囊的制劑中呈現出一定的穩定性，可以廣泛地應用到藥劑的制作中。

【關鍵詞】高效液相色譜法；草酸；甘草苷；糖清膠囊

從糖清膠囊的藥效上來看，主要具有益氣養陰以及活血化瘀的功效，而且能夠降低血糖，在糖尿病患者的治療工作中他體現出一定的優越性，其主要的廚房成分就是大黃以及甘草等中藥成分。其中甘草對于脾胃和胃度具有一定的補充效果，可以達到益氣復脈的特性，較為常見的組成成分是三萜皂甙以及黃酮類等。在甘草中的主要活動成分為甘草酸以及甘草苷等等。因此，為了研究甘草的質量，可以對其中的甘草苷和甘草酸成分來進行研究。采用的主要方式還是薄層色譜鑒別的方法，同時對于HPLC的方法來對二者的含量進行測量，這種操作方式由于其操作方法較為簡單，在實際的的藥物測定工作中得到廣泛的應用。

1.儀器與試藥

1.1儀器

在此次實驗中主要采用的是美國生產的2695高效液相色譜儀和2996二極管陣列檢測器等等。除此之外還有層析板、點樣器以及層析缸等等。

1.2試藥

在對藥物檢測的過程中主要是對甘草酸單銨鹽的對照品以及甘草苷對照品進行測定，而且這些藥品都是由比較權威的中國藥品管理部門經過鑒定只有提供的。其中甲醇、乙腈主要為色譜純、檢測用水為高純水、鹽酸、氯仿等杜威分析純類。

2.方法和結果

2.1甘草薄層鑒別

2.1.1供試液制備

首先需要取粉末狀的甘草藥品，加入定量的乙醚，在加熱回流一個小時之后進行濾過，然后在藥渣中加入適量的乙醇溶液，仍然需要回流一個小時，濾過之后將濾液蒸干。將藥物的殘渣加入一定量的水分，待其溶解之后進行藥物的提取。經過多次的洗滌之后，將得到的溶液作為供試品溶液。

2.1.2標準品溶液制備

采用甘草的對照藥物1g，也采用以上的方法制成一定量的對照藥材溶液，然后去甘草酸銨對照品加入甲醇之后對照品溶液。以上三種溶液都要參與測定，取每種溶液的一滴，分別滴入到硅膠G薄層板上，然后將乙酸乙酯、甲酸以及水等相應的溶液按照標準的比例制成展開試劑，然后將其取出，晾干，噴射10%的硫酸乙醇溶液，將其加熱至出現褐色斑點位置。然后將其放置在紫外線燈光下進行檢測，然后在對照藥材色譜的相應位置上，觀察斑點的大小以及顏色。

2.2甘草酸的含量測定

2.2.1色譜條件

在所用的色譜柱中，流動相主要以比例為65：35：1的甲醇、醋酸銨以及冰醋酸溶液，色譜柱的溫度為恒溫30℃。同樣將流速和進樣量控制在可測的范圍內，檢測到的波長為250nm，從理論上來看，甘草酸的數量不能低于2000。

2.2.2溶液的制備

精密稱取甘草酸的單銨鹽作為對照品，加入定量的甲醇溶解然后制成相應的對照品溶液。然后將0.5g的糖清膠囊放置到50毫升的測量瓶中，加入適當的甲醇溶液，采用超聲的方式對其進行處理，時間約為半個小時左右，然后將其放冷，待溶液中的甲醇定容之后，將其搖勻，再用過濾器進行過濾，將這一溶液作為供試品，然后按照規定的處方稱取適量的其他藥物，按照制備糖清膠囊的方式來值得沒有甘草成分的陰性試劑，然后采取同樣的方式來對陰性樣品的溶液進行制取。

2.2.3方法的專屬性

將各種供試品的溶液取出，對于陰性的對照溶液和對照品的溶液進行比對，同時要標注相應的標記，將取出的溶液注入到液相色譜儀器中，然后對其進行測定，將色譜的圖像進行記錄，同時保證陰性樣品溶液不會受到任何的干擾。

2.2.4線性關系的考察

分別精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10μl，進樣，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為Y=4.316×106X+7.801×104，r=0.9998，表明甘草酸單銨鹽在0.52～2.6μg具有良好的線性關系。

2.2.5精密度試驗

精密吸取對照品溶液l0μl進樣，重復5次，測得甘草酸單銨鹽峰面積的RSD分別為0.75%，表明儀器精密度良好。

2.2.6穩定性考察

精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24h進樣l0μl，測得甘草酸單銨鹽峰面積的RSD為1.42%。結果表明供試品在24h內穩定。

2.2.7重復性試驗

取同一批供試品，按供試品溶液制備方法，重復制備樣品6次，進行含量測定，測得的甘草酸單銨鹽含量為10.75mg·g-1，RSD為1.82%，表明方法重復性良好。

2.2.8加樣回收率試驗

取已知含量的樣品5份，每份約0.5g，精密稱定，分別精密加入甘草酸單銨鹽對照品，計算甘草酸單銨鹽回收率為98.1%，RSD為1.32%。

2.2.9含量測定

分別精密稱取6批樣品，按供試品溶液的制備項下方法制備，按上述色譜條件進行測定。分別精密吸取各供試品溶液10μl、對照品溶液5μl注入液相色譜儀，測定峰面積，計算樣品中甘草酸單銨鹽含量，折算成甘草酸含量。

2.3甘草苷含量測定

2.3.1色譜條件

Cl8色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）。流動相為乙腈-0.5%冰醋酸（18：82）；柱溫：30℃；流速為1.0ml·min-1，進樣量10μl；檢測波長276nm；理論板數以甘草苷峰計算不低于4000。

2.3.2溶液的制備

精密稱取甘草苷對照品適量，加流動相制成每1ml含甘草苷0.15mg的對照品溶液。精密稱取糖清膠囊內容物約0.5g，置于50ml量瓶中，加流動相適量，超聲處理30min，放冷，加流動相定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。取缺甘草的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。

2.3.3方法的專屬性

分別精密吸取供試品溶液，陰性對照溶液和對照品溶液l0μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，陰性樣品溶液無干擾。分別精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10μl，進樣，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為Y=1.716×106X+3.521×105，r=0.9998，表明甘草苷在0.30～1.5μg具有良好的線性關系。

2.3.4精密度試驗

精密吸取對照品溶液l0μl進樣，重復5次，測得甘草苷峰面積的RSD分別為1.01%，表明儀器精密度良好。

3.討論

（1）采用HPLC發測定中藥復方制劑中的甘草酸，文獻報道可采用多種不同組成的流動相，如甲醇-水-醋酸（67：26：7）、甲醇-0.2mol·l-1醋酸銨溶液-冰醋酸（67：33：1）以及它的不同配比，摸索色譜的最佳測定條件，結果表明，選用甲醇-0.2mol·l-1醋酸銨溶液-冰醋酸（65：35：1），甘草酸單銨鹽的出峰時間適宜，與其它成分分離度較好，達基線分離，且陰性無干擾，專屬性強。

（2）在甘草苷的含量測定中，文獻報道曾采用的流動相有，用甲醇為溶劑制備對照品溶液和供試品溶液，但甘草苷的峰形較差，因此改用流動相為溶劑，結果色譜峰對稱性良好。 [科]

【參考文獻】

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