萊克多巴胺ELISA間接非競爭檢測方法的建立

摘要：本快速測定方法使用甲醇提取液超聲波提取動物源性制品中萊克多巴胺，采用樣品與抗體預(yù)混的間接非競爭法測定樣品中的萊克多巴胺。沒有采用常規(guī)的間接競爭法，而是預(yù)先混合抗體和待測物質(zhì)，使得檢出限底，達到0.0044ng/mL，其含量在0.0044～11ng/mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2=0.9799，回收率在65%～89%之間，具有較好的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和回收率，能滿足實驗室的檢測要求。

關(guān)鍵詞：ELISA 萊克多巴胺 間接非競爭法 低檢出限

中圖分類號：S859.8 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）02-0015-06

1 材料與實驗方法建立

1.1 試劑

萊克多巴胺人工偶聯(lián)牛血清白蛋白抗原（RAC-BSA），萊克多巴胺小鼠單克隆抗體，辣根過氧化物酶標記羊抗小鼠二抗，牛血清白蛋白（BSA），均由北京奧博森提供。磷酸二氫鉀，十二水合磷酸氫二鈉，氯化鈉，氯化鉀，碳酸鈉，碳酸氫鈉，一水合檸檬酸，吐溫-20，二甲基亞砜，30%雙氧水，硫酸，以上試劑均為國產(chǎn)分析純試劑。

試劑配制：

精確稱取氯化鈉4.0000g、十二水合磷酸氫二鈉 1.4500g、氯化鉀0.1000g和磷酸二氫鉀0.1000g，混合后用超純水溶解并定容至500mL，得到磷酸鹽緩沖液（PBS），該磷酸鹽緩沖液的pH值為7.4，磷酸鹽緩沖液過0.22μm微孔濾膜除菌，并保存在4℃下。

精確稱取碳酸鈉0.3975g和碳酸氫鈉0.7425g，混合后用超純水溶解并定容至500mL，得到碳酸鹽緩沖液（CBS），該碳酸鹽緩沖液的pH值為9.6，碳酸鹽緩沖液過0.22μm微孔濾膜除菌，并保存在4℃下。

精確稱取一水合檸檬酸2.5514g和十二水合磷酸氫二鈉9.1951g，混合后用超純水溶解并定容至500mL，得到底物緩沖液，該底物緩沖液的pH值為5.0，底物緩沖液過0.22μm微孔濾膜除菌，并保存在4℃下。……