志賀菌屬的微生物學檢驗分析

摘要：對志賀菌屬的物生物學檢驗方法及臨床意義進分析，屬包括痢疾志賀菌、福氏志賀菌、鮑氏志賀菌及宋內志賀菌四個種。其中痢疾志賀菌引起的菌痢癥狀最重，宋內志賀菌最輕，以福氏和宋內志賀菌引起的菌痢最為多見。本菌屬均可致細菌性痢疾或慢性腹瀉，慢性患者和恢復期帶菌常見。

關鍵詞：志賀菌屬；物生物檢驗；臨床意義

【中圖分類號】R446.5 【文獻標識碼】B 【文章編號】1672-8602（2014）01-0198-01

志賀菌屬包括痢疾志賀菌、福氏志賀菌、鮑氏志賀菌、宋內志賀菌通稱痢疾桿菌，能產生內毒素和腸毒素，為細菌性痢疾的病原菌[1]。急性中毒性痢疾多見于小兒，消化道癥狀常不明顯，主要表現為全身中毒癥狀，高熱、休克。失于正確診斷和治療，病死率很高。對2012年60例志賀菌屬的微生物檢驗分析如下。

1臨床資料

1.1一般資料：本組收治的60例糞便標本立即送檢。

1.2標本采集：盡量在早期（使用抗生素前），采集患者新鮮糞便或膿血黏液便床邊接種，否則應將標本保存于30%甘油緩沖鹽水或卡-布運送培養基內，并盡快送檢。中毒性菌痢患者可取肛門拭子。

1.3檢驗方法

1.3.1標本直接檢查：抗原檢測以志賀菌抗血清通過乳膠凝集試驗、協同凝集試驗、免疫熒光菌球法等，可直接檢測標本中有無志賀菌抗原。核酸檢測可利用PCR法檢測標本中志賀菌大質粒。

1.3.2分離培養：取膿血黏液便或肛門拭子標本接種GN肉湯增菌后，移種腸道選擇培養基（SS、EMB/MAC），37℃孵育18～24 h。志賀菌菌落為無色透明或半透明菌落。

1.3.3鑒定：可疑菌落若氧化酶試驗呈陰性、觸酶試驗呈陽性，則接種到KIA、MIU培養基上，若反應結果符合數據，則可初步鑒定為志賀菌。志賀菌血清學鑒定在生化反應符合志賀菌屬的特征后，先用志賀菌屬A～D群多價血清（包括A群1～2型、B群1～6型、C群1～6型和D群）做玻片凝集試驗。如不凝集，可能為表面K抗原隔離所致，可通過加熱到100℃保持15～30 min破壞K抗原，再做凝集試驗。如仍不凝集，則可能為EIEC菌株，需進一步鑒別。如發生凝集，再用定群和定型診斷血清做玻片凝集試驗以鑒定到群和型。我國以B群多見，若鑒定為B群，需進一步用型因子血清和群因子血清確定其型別及亞型。

凡生化反應符合痢疾桿菌屬者，則需進一步作血清學鑒定。血清學定型方法及步驟如下：首先用四種多價血清進行玻片凝集試驗：如為陽性，再按下記順序進行分型血清鑒定。用福氏血清作玻片凝集試驗：首先用福氏多價血清進行，如反應陽性，參照上述初步生化反應，再用各福氏型、組因子血清進行型及亞型的鑒定。與福氏血清不凝集菌株：靛基質陰性時，可用宋氏血清凝集。與福氏、宋氏血清均不凝集菌株，根據情況如下進行：甘露醇陰性、靛基質陽性者，試用舒密（即志賀2型）血清凝集；甘露醇、靛基質均陽性者，試用志賀（即志賀1型）血清凝集[2]。與福氏、宋氏、舒密及志賀血清均不凝集菌株：可用鮑氏多價血清進行凝集試驗，如為陽性，再以因子血清進行分型。與各型痢疾血清均不凝集菌株：如完全生化反應結果屬于不產氣菌類，其菌落形態與痢疾桿菌又極為相似，則可考慮非典型（血清型）痢疾桿菌。

1.3.4于血清學鑒定工作中，應注意下述事項：

本屬各菌除福氏1a、1b、2b、3、4a和5型細菌以及宋內菌外，均具有K抗原（包膜抗原），其共同特點是能阻抑細菌與O血清的凝集作用。因此，如遇有生化反應符合痢疾桿菌而又不與各種痢疾血清發生凝集時，則可能有K抗原的存在。此時，可將菌落用生理鹽水制成濃厚菌液，隔水煮沸1h，以破壞K抗原。待冷后，再按順序重作玻片凝集試驗。進行玻片法凝集試驗時，如所用血清合乎要求，則所有陽性結果，應于血清與菌液混合后立即出現，至多不遲于1min，且所顯示的凝集顆粒亦極明顯而較粗大。如果遇有凝集反應出現遲緩或凝集顆粒細微時，則應考慮是否為共同抗原的類屬反應。c.血清學鑒定，一般用玻片法進行定性凝集試驗即可，如遇有診斷血清的特異性欠佳、疑有類屬反應或為國內少見菌株時，則還須用試管法進行定量凝集試驗。

2臨床意義

2.1致病物質： 志賀菌借助菌毛黏附于回腸末端和結腸黏膜上皮細胞，繼而穿入上皮細胞內生長繁殖，引起炎癥反應。志賀菌可產生毒性較強的內毒素，除引起內毒素血癥外，還可破壞腸黏膜，形成炎癥、潰瘍、出血，臨床表現為典型的膿血黏液便。內毒素還可作用于腸壁自主神經系統，導致腸功能紊亂、腸蠕動失調、腸道平滑肌痙攣，尤以直腸括約肌最為明顯，常出現腹痛、里急后重等癥狀。A群志賀菌能產生志賀毒素，又稱Vero毒素。具有神經毒性、細胞毒性、腸毒性，可引起中樞神經系統麻痹、上皮細胞損傷和水樣腹瀉。

2.2所致疾病：志賀菌引起的細菌性痢疾.其傳染源為患者和帶菌者。主要通過糞一口途徑傳播。人類對志賀菌普遍易感。菌痢在臨床上有四種類型。①急性菌痢：發病急，主要有發熱、腹痛、腹瀉、里急后重、膿血黏液便等典型臨床癥狀[3]。若治療及時，預后良好。②中毒性菌痢：多見于小兒，常無明顯的消化道癥狀而表現為全身中毒癥狀。如高熱、休克、中毒性腦病。病情兇險，病死率高。③慢性菌痢：急性菌痢治療不徹底或癥狀不典型被誤診，可轉為慢性。病程往往遷延2個月以上。④帶菌者：部分患者恢復后可成為帶菌者，具有高度傳染性，為重要傳染源，故菌痢帶菌者不能從事餐飲業和幼教等工作。病后免疫主要依賴消化道黏膜表面的SIgA的作用，免疫維持時間短，也不牢固。

參考文獻

[1]李夢東，王宇明.實用傳染病學〔M〕.第3版.北京：人民衛生出版社，2004：769-76.

[2]曹秀麗.福氏志賀氏菌耐藥性分析〔J〕.中國社區醫師（醫學專業），2010；12（18）：23.

[3]嚴海明，白紅蓮，李宗良.80例細菌性痢疾臨床特點及藥敏分析[J].現代醫藥衛生，2006，22（6）：833-834.