高效液相色譜串聯質譜法測定黃酒中的甜蜜素

甜蜜素在食品添加劑中屬于甜味劑，其化學名稱為環己基氨基磺酸納，其甜度是蔗糖的30～40倍，過量攝人會對人體的肝臟和神經系統造成危害。我國GB2760-2011《食品添加劑使用衛生標準》中規定，甜蜜素在一些常用食品（如水果罐頭、腌制蔬菜、復合調味料、蜜餞、糕點、面包等）中可以使用，在配制酒中的最大使用量為0.65g/kg，而在葡萄酒、黃酒、果酒等發酵酒中是禁止添加甜蜜素的。在已發表的有關酒中甜蜜素的檢測方法中，大多數關注的是白酒和葡萄酒中甜蜜素的檢測。目前采用液相色譜質譜聯用的方法對黃酒中甜蜜素的檢測尚無研究，本文對此進行了研究摸索。

1 實驗部分

（1）試劑與儀器

儀器：液相色譜串聯質譜儀（美國Agilent公司）；天平。試劑：甜蜜素標準物質（純度為99.3%）由中國計量科學研究院提供；甲醇、乙酸為色譜純；實驗用水為超純水（蒸餾水經過超純水系統制備）。

（2）色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18（4.6mm×100mm，3.5μm）；柱溫：室溫；流動相：60%甲醇（含0.1%乙酸）；流速：0.3mL/min。

（3）質譜條件

電離方式：電噴霧電離（ESI）、負離子模式；霧化氣壓力：35psi；干燥氣：氮氣；流速：12L/min；溫度：350℃；采集方式：多反應監測（MRM）。

（4）標準溶液的配制

準確稱取0.02g的甜蜜素標準物質，用蒸餾水溶解定容至100.0mL，得到濃度為200mg/L的標準貯備液。準確移取0.5mL標準貯備液用蒸餾水稀釋定容至10.0mL，配制成濃度為10mg/L的標準使用液，再逐級稀釋得到濃度在（20～2000）μg/L之間的系列標準工作溶液。

（5）樣品測定

將樣品用水稀釋定容后，經0.45um濾膜過濾，備用。取處理后的樣液和系列標準工作溶液各5μl分別注入液相色譜串聯質譜儀中測定，以選擇離子峰峰面積外標法定量。

2 結果與討論

（1）色譜條件的優化

本研究采用Agilent Eclipse Plus C18（4.6mm×100mm，3.5μm）色譜柱進行分離，待測物在6min內出峰。還分別考察了60%甲醇（含0.1%乙酸）和60%乙腈（含0.1%乙酸）兩種體系的流動相。結果表明，采用60%甲醇（含0.1%乙酸）作為流動相時，對甜蜜素有更好的峰形和分析靈敏度。

（2）質譜條件的優化

將甜蜜素標準物質稀釋成1mg/L的標準溶液，通過直接進樣法，利用全掃描模式、選擇離子監測、子離子掃描進行質譜條件優化，使母離子與特征碎片離子強度達到最大。得到甜蜜素的母離子m/z178、子離子m/z79.7、最佳碎裂電壓380V、最佳碰撞能量20eV。

（3）線性范圍和檢出限

將甜蜜素稀釋成系列標準工作溶液，使濃度分別為20、100、500、2000g/L，進樣5l，測定峰面積。以峰面積對濃度進行線性回歸，得到標準物質的線性方程為y=1061.899327x+2201.570616和相關系數r=0.99994；以噪音響應的3倍來計算甜蜜素的檢出限為0.02mg/L，說明此方法令人滿意。

（4）方法回收率和精密度

取空白黃酒樣品，進行2個水平加標實驗，加標濃度為100、500g/L，重復測定3次，計算回收率和精密度結果見表1。表明該方法穩定性強、重現性好，能滿足黃酒中甜蜜素檢測的要求。

表1 甜蜜素的平均回收率、精密度測定結果

3 結論

本工作建立了液相色譜串聯質譜法檢測黃酒中甜蜜素的檢測方法。該方法步驟簡單、回收率高、精密度良好，為檢測黃酒中的甜蜜素提供了科學的檢測方法，為政府執法部門開展風險監控工作提供了有力的技術支持。