四君子湯中多糖的提取和含量測定

劉玉紅

摘 要：目的：提取四君子湯中的多糖，并進(jìn)行含量測定。方法：采用熱水法提取、乙醇沉淀制備總多糖；蒽酮-硫酸法測定多糖含量。結(jié)果：總多糖中多糖的含量為61.44%。結(jié)論：四君子湯中多糖的含量為4.97%。

關(guān)鍵詞：四君子湯；多糖；提取；含量測定

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1673-2197（2009）02-0043-02

四君子湯出自宋代《太平惠民和劑局方》，由人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草組成，具有益氣健脾之功效，主治脾胃氣虛證。研究報道四君子多糖具有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用，可用于腫瘤等的輔助治療［1~3］。本文采用蒽酮-硫酸法對四君子湯水煎劑中多糖的含量進(jìn)行了測定。

1 儀器與試藥

WFZ-UV-2102 PC型紫外-可見分光光度計（尤尼柯中國上海儀器有限公司），RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（河南鞏義市英峪予華儀器廠），LXJ-Ⅱ離心沉淀機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠），ZKXF-1型電熱真空干燥箱（上海樹立儀器儀表有限公司）。四君子湯藥材(濟(jì)南建聯(lián)中藥有限公司)。葡聚糖4萬（中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司），蒽酮（上海五聯(lián)化工廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 四君子總多糖的提取

精密稱取四君子湯34g（人參10g，白術(shù)9g，茯苓9g，甘草6g），投入到15倍量的沸水中0.5h，以滅活共存酶，浸泡過夜，95℃提取3次，每次3h，六層紗布過濾，濾液合并，50℃減壓濃縮至30mL，離心，棄去殘渣，上清液加四倍量無水乙醇，沉淀過夜，離心，收集沉淀，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，將沉淀置于有五氧化二磷的真空干燥箱中，50℃真空干燥24h，得四君子總多糖樣品2.75 g。精密稱取四君子總多糖樣品20mg，定容于250mL的容量瓶中，為供試品溶液A，供多糖的含量測定用。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

采用蒽酮－硫酸法［4］測定多糖含量。

葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制：精密稱取干燥至恒重的葡聚糖25mg，加適量蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，加水至刻度，即得0.1g/L的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

蒽酮試劑：0.2g蒽酮溶解于100mL濃硫酸中，當(dāng)日配制使用。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：移液管分別量取0.1g/L葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL、4mL、6mL、8mL、10mL轉(zhuǎn)于10mL容量瓶，蒸餾水補(bǔ)至刻度，各取1mL于試管中并按順序編號1、2、3、4、5，后分別加入4.00mL蒽酮試劑，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后充分振搖均勻，并一同浸入沸水浴中，管口加蓋開始反應(yīng)。自水浴沸騰時起，準(zhǔn)確煮沸10min，自來水冷卻，室溫放置約10min，振搖均勻，以蒸餾水為空白，在λ620nm處測定吸光度A。以吸收度A為縱坐標(biāo)，糖濃度C為橫坐標(biāo)，得回歸方程A=5.8965C+0.0478，r=0.9998。

2.3 精密度試驗(yàn)

按復(fù)方配比取四君子湯藥材10.02g，精密稱定，按2.1項(xiàng)提取制得供試液，取1mL依法重復(fù)測定5次，吸收度值的RSD為0.67%（n=5）。

2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

按復(fù)方配比取四君子湯藥材5 份，各10.02g，精密稱定，依2.1項(xiàng)下提取后，進(jìn)行多糖的含量測定，每份測定3次，取平均值，5份樣品中多糖的含量分別為4.67%、4.98%、4.76%、4.86%、4.73%，計算RSD為2.54%（n=5）。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

對同一供試品液，蒽酮-硫酸法顯色后，分別于0、10、20、40、60min 時在620nm處測定吸收度值，計算RSD為1.64%（n=5），表明吸收度值在1h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 樣品含量測定

取供試品溶液1mL，依法進(jìn)行測定，計算四君子總多糖中多糖的含量為61.44%，由粗多糖中多糖含量折合成四君子湯中多糖的含量為4.97%。

2.7 回收率試驗(yàn)

取已知多糖含量的四君子湯藥材5份，各6.8g，精密稱定，于每份中加入一定量的葡聚糖對照品，按2.1項(xiàng)下提取，依法測定多糖含量，計算得平均回收率為101.52%，RSD為3.20%(n=5)。結(jié)果見表1。

3 討論

蒽酮-硫酸法測定多糖含量，為避免氧化，蒽酮試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配，由于硫酸密度比水大，容易分層，因此樣品加入蒽酮試劑后和紫外測定前一定要振搖充分。結(jié)果表明，該法測定多糖含量，可獲得良好的線性關(guān)系（r=0.9998），回收率較高（101.52%），而且精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)均符合分析要求，方法準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于四君子湯中多糖的含量測定。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 周華，劉良，王培訓(xùn)，等. 四君子湯復(fù)方總多糖口服和注射給藥對免疫功能影響的對比研究［J］. 中藥新藥與臨床藥理，2001，12(5)： 602-902.

［2］ 寧康健，何玉意，呂錦芳. 四君子湯對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響［J］. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2005，(5)： 30-32.

［3］ 劉良，周華，王培訓(xùn)，等. 四君子湯復(fù)方總多糖對小鼠腸道粘膜相關(guān)淋巴組織的影響［J］. 中國免疫學(xué)雜志，2000（17）： 402-602.

［4］ 張惟杰. 糖復(fù)合物生化研究技術(shù)（第二版）［M］.杭州：浙江大學(xué)出版社，1999：12.

（責(zé)任編輯：姜付平）