木薯誘變育種研究進展

謝向譽　陸柳英　曾文丹　嚴華兵

摘 要：為了加快木薯優良品種選育進程，筆者簡述了近年來國內外木薯誘變育種的研究進展。重點歸納了木薯誘變材料的選擇、誘變方法、誘變方式、木薯誘變效應及突變體的鑒定、篩選及嵌合體的分離策略等方面，同時提出了目前木薯誘變育種存在的突變隨機性和嵌合體等問題及解決方案。指出如何建立一套高效的誘變育種技術將是一個關鍵的問題。另外筆者認為誘變育種技術與離體技術、生物技術結合將是今后木薯研究的重點。

關鍵詞：木薯；誘變育種；研究進展

中圖分類號：S533 文獻標志碼：A 論文編號：2013-0660

0 引言

木薯（Manihot esculenta Crantz）又稱木蕃薯、樹薯、樹番薯，多為二倍體，染色體數目為2n=36[1]。木薯是大戟科（Euphorbiaceae）木薯屬（Manihot）植物屬內有98個種，木薯是唯一的栽培種[2]。木薯起源于南美洲，與甘薯、馬鈴薯合稱為世界三大薯類作物，其產量在糧食作物中排第7位，全世界超過6億人口依賴它提供基本的熱能[3]。木薯用途非常廣泛，不僅是優良的淀粉作物，而且是重要的生物質能源作物[4]。優良的品種是木薯產業發展的保障，但是目前木薯的品種存在著許多問題，比如說：抗病性差，產量低，淀粉含量低等。因此，如何加快木薯優良品種的選育，是木薯產業發展亟待解決的重大問題。

目前，木薯的品種選育手段主要有常規育種，誘變育種，生物技術育種。木薯許多品種基本上都是常規雜交選育而成，然而育種專家發現，雜交育種技術的廣泛用及單一品種的大面積推廣，且雜交育種僅依靠品種間的遺傳重組將會導致生物多樣性減少、遺傳基礎變窄，這對于育種的影響是致命的。此外，常規育種選育品種受到氣候和時間等因素的限制，效率較低；而生物技術育種則由于成本較高、程序復雜、技術難度較高等特點，也具有一定的局限性；相比之下，誘變育種具有性狀穩定快，育種周期短，擴展遺傳基礎等優點。

誘變育種改良作物已經有70多年的歷史，目前世界上已經利用誘變方法育成了2252個品種，誘變育種近年來取得了豐碩的成果[7]。Kharkwal和Shu[7]報道，在未來的幾十年中，誘變育種將在提高世界食物安全方面扮演重要角色?，F將木薯誘變育種相關的近年來的研究概述如下，以期對今后木薯誘變育種的研究提供參考。

1 木薯誘變材料選擇及方法

1.1 受體材料

誘變育種的關鍵之一是誘變材料，它主要根據材料的性質和誘變方法來選擇。木薯誘變材料主要有種子，種莖，體細胞胚及子葉等。Sanchez等[8]用1400顆木薯種子作為誘變材料，獲得了4個新的突變體。Nayar等[9]以木薯種莖為外植體，成功的誘變出了在葉和塊莖中具有高含量HCN的突變體。同時Asare和kantanka等[10]以5個木薯品種的種莖為外植體，也成功的誘導出了新的突變體品種。另外Owoseni等以木薯種莖為誘導，選出了γ射線（60Co）的最佳誘導劑量范圍[11]。Lee等[12]以Mcol 22和Mcol 1505的體細胞胚為材料進行了γ射線（60Co）輻射的初步研究，確定了LD50劑量。Joseph等[13]用“PRC 60a”的木薯體細胞胚作為誘變材料，獲得了S14和S15 2個變異株。陸柳英等[14]在劑量率為1 Gy/min的60Co-γ誘變下對胚狀體子葉進行了研究，確定了適宜輻射劑量。然而以木薯胚型細胞和花粉作為誘變材料的研究還未見報道。

1.2 物理誘變

物理誘變主要是指利用輻射等物理因子誘發基因突變和染色體變異，主要是使植物染色體發生畸變。常見的有γ射線，X射線，中子，α射線，β，離子束，激光等。羅興錄等[15]用60Co-γ不同劑量輻射木薯種莖得出，木薯的株高、莖粗、單株塊根數、塊根淀粉含量差異明顯。陸柳英等[14]采用60Co-γ射線輻射的方法在劑量率為1 G y/min的輻射強度下對帶單芽莖段、體細胞胚與胚狀體子葉進行不同劑量的輻射處理后發現，木薯組培苗帶單芽莖段60Co-γ射線輻射的劑量應小于10 Gy，體細胞胚和胚狀體的子葉的輻射劑量宜選擇在10～20 Gy之間。近年來，科研人員采用激光、電子流、電子束等誘變處理植物，獲得了較好的處理效果。木薯在這方面研究未見報道。木薯誘變育種應擴大誘變源的研究，以期篩選出更好的誘變源。

1.3 化學誘變

化學誘變具有成本低、使用方便、誘變作用專一性強等特點，是一種迅速發展的育種途徑。農作物化學誘變育種是人工利用化學誘變劑誘發作物發生突變，再通過多世代對突變體進行選擇和鑒定，直接或間接地培育成生產上能利用的農作物品種[16]。化學誘變劑種類很多，然而在栽培作物中只有少數化學物質具有誘變效果。在農作物育種中應用較廣泛的是甲基磺酸乙酯（EMS）、疊氮化鈉（NaN3）、平陽霉素（PYM）。EMS是目前運用最廣泛也是公認最為有效的誘變劑。陸柳英等[14]采用常用的化學誘變劑甲基磺酸乙酯（EMS）、EMS與苯甲酰胺的組合、硫酸二乙酯（DES）對木薯品種SC8和SC124進行了誘變研究。

對于木薯化學誘變的研究的報道較少。胡小元等[16]用NaN3和EMS處理木薯克隆的頂端2個莖節，結果表明，它們具有與γ射線和快中子處理相近的效果，并其所產生的損傷較易恢復；NaN3和EMS最適合劑量濃度分別為3.0 mmol/L和0.6%，NaN3誘發M1V1形態變異率高于EMS。此外，陸柳英等[14]研究得出，采用甲基磺酸乙酯（EMS）、EMS與苯甲酰胺的組合、硫酸二乙酯（DES）對木薯品種SC8和SC124的帶單芽莖段進行了化學誘變，確定其半致死濃度分別為：SC8的半致死處理為1.1% EMS、1.1% EMS+5 mmol/L苯甲酰胺、0.9% EMS+10 mmol/L苯甲酰胺以及0.4% DES；SC124的半致死處理為0.8% EMS、0.7% EMS+ 5 mmol/L苯甲酰胺、0.5% EMS+10 mmol/L苯甲酰胺以及0.3% DES。并發現SC8品種的0.3% EMS及0.3% EMS+5 mmol/L苯甲酰胺這2種處理的脯氨酸含量大于SC8低溫處理的材料和抗寒品種SC124低溫處理的材料，故認為這2組經誘變處理并經低溫壓力選擇后的材料很可能存在抗寒性強的突變植株。然而采用平陽霉素或其他藥劑作為木薯的化學誘變劑目前還未見報道。

2 木薯誘變效應研究

目前，木薯育種目標主要為：高產、高淀粉、抗病蟲害、高品質等。高產一直是突變育種的主要目標，在全部突變育種工作中占有主導地位。作物的產量潛力是一種典型的數量性狀，它表現為連續變異，并受環境因子的影響。目前國內外有著越來越多的高產突變新品種被推廣應用[17]。Joseph等[13]采用50、100、200、300 Gy的60Co-γ輻射木薯PRC 60a的嫩葉和不同時期的體細胞胚和子葉后，研究結果表明，球形體細胞胚是最適合的外植體，并獲得了一系列在植株表型及塊根特性方面差異表現的突變株系；其中的突變株S14和S15在塊根產量上分別比野生型的減少17倍和60倍；而S15在淀粉含量和直鏈淀粉含量分別下降了50%和30%。雖然Joseph等[13]的研究沒有達到誘變育種的直接目標，但是通過與母本的基因片段序列分析，可以間接的為以后研究提供寶貴的經驗。此外，Sanchez等[8]利用γ射線誘變種子，篩選獲得一批突變株系，其中一個突變系具有耐PPD的特性，這對于木薯鮮食的市場開發具有重要的意義；另外發現一個突變株系淀粉顆粒小、直鏈淀粉含量高，在食品工業和木薯淀粉降解上有重要應用價值。Amenorpe等[18]對4個當地品種的莖段以35 Gy輻射處理后，發現了4個具有高直鏈淀粉含量（26.8%～32.7%），4個具有低直鏈淀粉含量（11.7%～14.0%），以及無糖變異株系。Nwachukwu等[19]利用γ射線對利日尼亞3個主栽品種的種莖，即TMS30572、NR8817和NR84111進行輻射誘變，獲得了一批氫化物、干物質和淀粉含量差異表面的突變株系，其中14個株系表現較低的氫化物含量，22個品系表現較高的干物質含量。Nayar等[9]研究發現，對木薯莖段進行輻射處理后，得到一種在葉片和塊根中HCN含量很高的變異株。Asare等[10]以種莖（10 cm左右長）為外植體，利用γ射線對IITA來源的幾個材料進行輻射誘變，通過對M1V3和M1V4代材料進行鑒定篩選，獲得了保持高產和高抗病特性，而薯塊加工性能得到提高的突變株系。劉繼紅等[20]研究表明，抗性是與很多不良性狀相連鎖的，傳統的雜交育種要通過多代回交才能除去與其相聯鎖的劣質性狀，而輻射則可以在一定程度上克服這一困難獲得一些具抗性的突變新種質。Ahiabu等[21]以種莖和組培苗莖尖為外植體，利用γ射線對加納品種“Bosom nsia”進行輻射誘變，獲得了ACMV抗性的突變株系。陸柳英等[14]以組培苗帶芽莖段為材料，利用EMS對木薯品種SC8和SC124進行化學誘變，初步建立了以帶芽莖段為外植體的EMS誘變技術體系。陳顯雙等[22]用秋水仙素對大田木薯腋芽生長點進行誘導，結果表明用4 g/L、6 g/L的秋水仙素處理木薯腋芽生長點，其誘導效果比較好。其中6 g/L的誘導后裂葉出現萎縮、缺失，變異面積大。王建嶺等[23]采用木薯組培莖段為材料，采用不同誘導配方，結果發現，MS+2，4-D 2.0+NAA 0.1的誘導效果最好，誘變率比較高，且誘導出的木薯愈傷組織在適當的環境條件下能很快誘導出來芽；誘導后的變異植株表現為葉片變厚，葉色變深。

3 突變體的鑒定、篩選及嵌合體分離策略

3.1 突變體的鑒定及篩選

物理、化學誘變的木薯營養體突變體多以嵌合體的形式存在，因此，分離選擇是獲得突變體的關鍵。目前主要有以下幾種發法。

3.1.1 形態學與細胞學方法 形態學方法主要是通過突變植株與對照植株比對兩者的形態差異來分離突變體。據Lapins等人研究認為試材輻射后生長的初生枝基部芽集中大量的突變細胞，如黑穗醋栗經輻射處理后，枝條下部的芽分離出51.8%的突變體，中部24.2%，上部13.9%[24]。依據突變細胞多集中在枝條基部，對輻射后的枝條從基部進行連續修剪、嫁接或扦插，促進突變芽萌發是分離顯現突變體的基本方法[25]。對突變細胞較集中的芽位進行連續短截修剪，可以使扇形突變體不斷擴大，獲得穩定的周緣嵌合體或同質突變體[26]。這在木薯突變體分離中也可以應用的一種實用的方法。細胞學方法主要是觀察突變體植株的染色體數量和結構。木薯秋水仙素誘導后的變異植株經常應用流式細胞儀進行倍性鑒定突變植株。

3.1.2 離體培養和誘變結合方法 通過誘變技術和離體組織培養法結合來分離篩選突變體也是一種比較好的方法。例如：把早期發現的突變葉片放到組培室中進行分離培養變異組織，從而獲得穩定的變異植株。利用誘導處理材料產生不定芽，由此獲得突變體的方法即通常所稱的“不定芽技術”。采用不定芽技術使頂端分生組織以外的組織器官如葉片、葉柄等產生的體細胞突變得到顯現利用，如果不定芽起源于輻射材料的單個表皮細胞或少數細胞，可以減少體細胞選擇，獲得高頻的周緣嵌合體或同質突變體，大大縮短育種年限[26]。

3.1.3 生理生化方法 通過檢測誘變植株體內的蛋白質含量、同功酶及過氧化物酶活性或通過化學藥劑來選擇突變體。日本Ikeda在研究蘋果誘發有用的突變體中發現，利用幼苗對碘代醋酸的顯色反應可對矮化突變體進行早期鑒定。陳善春等[27]研究發現，所有柑橘無核突變系葉片的過氧化物酶酶譜少了一條帶，因而認為過氧化物酶酶譜帶數的多少可以用作突變體早期選擇和鑒定的生化指標。木薯還沒有此方面的研究報道。

3.1.4 分子生物學方法 隨著分子生物學的發展，人們已逐漸從分子水平對特定變異進行早期鑒定[28-29]。澳大利亞的Novar等用RAPD技術鑒定香蕉特定性狀的變異。Caetano-Anolles等[30]在農作物上利用分子標記對一些突變體進行分析，區別真偽突變體，利用與分子標記連續的關系對突變體基因加以標記。目前TILLING技術已經被IAEA和CIAT合作應用于突變體的鑒定[31-32]。反向遺傳學策略，特別是TILLING技術已經顯示了它作為鑒定物理或化學突變體工具的有效性[33]。TILLING技術已經在擬南芥、水稻、玉米和小麥的突變體的鑒定方面得到了很好的應用，并且不同植物品種的TILLING公共商業服務平臺已經建立[34]。

3.2 嵌合體分離策略

由于木薯是無性繁殖作物，因此在誘變育種過程中經常會出現嵌合體現象。嵌合體主要有扇形嵌合體、邊緣嵌合體、周緣嵌合體3種類型。事實上，扇形嵌合體通常很少出現，它通常不是很穩定，但是容易分離成純合體；而邊緣嵌合體通常也不穩定，容易恢復正?；蜣D化為周緣嵌合體；然而周緣嵌合體較為穩定，許多花卉變異植株中都為周緣嵌合體組織。嵌合體分離主要有以下幾種方法：（1）組織發生不穩定法。利用組織發生不穩定原理最終使植株嵌合體轉變為周緣嵌合體。組織不穩定性可以通過給予莖尖分生組織適當損傷來提高；大劑量的輻射用于誘變植株可以實現不穩定植株的突變轉化。（2）無性繁殖法。通過離體組培誘變，并不斷進行莖尖繼代，可以分離嵌合體。另外還可以通過誘導懸浮細胞培養技術培養的莖尖可以徹底分離嵌合體。有研究表明，嵌合體可以通過體細胞胚誘導產生單細胞來解決[35]。胚性細胞懸浮系可以作為誘導的外植體，從而避免出現嵌合體的出現[36-37]。據報道，多芽誘導技術（multi-apexing）是一種分離嵌合體的有效工具，通過3次繼代培養，它可以將嵌合體從100%降低到8%[38]。（3）種子繁殖法。將種子進行誘變后，通過連續自交來分離嵌合體。但是通常由于植株本身雜合性、自交不親和性等原因，種子繁殖法不用于嵌合體的分離。Jankowicz-Cieslak等[39]研究表明，在結合TILLING技術下，通過多尖端技術，傳統誘變技術，精確的基因型評價去除嵌合現象已經取得了豐碩的成果，并通過化學誘變劑EMS處理分生組織也可以快速分離嵌合體。目前木薯的分離嵌合體技術方案已經被開發，且已經獲得了多倍體變異株[40-41]。

4 木薯誘變育種存在的問題及解決辦法

4.1 突變的隨機性

木薯誘變產生的變異方向是不可預期的，結果有可能是好的，有可能是不好的變異。這將降低木薯誘變育種的效率。依靠分子生物技術策略可以直接通過查詢目標基因的變化來提高誘變效率。研究表明，反向遺傳學策略，特別是TILLING技術已經被應用于誘變育種突變體的鑒定，并且取得了很好的成效。據報道不同植物品種的TILLING公共商業服務平臺已經建立，隨著木薯的基因測序等的完成，木薯誘變育種效率將會邁上一個新的臺階。

4.2 嵌合體的發生

嵌合體現象是木薯誘變育種的常見現象，在誘變處理過程中，常常會表現為各種變異細胞群體與未變異細胞群體共存，這就產生了嵌合體。木薯嵌合體多以扇形嵌合體形式存在。如果不能及時并準確把有利變異細胞或組織分離出來，那么，這些細胞或組織將會被旺盛生長的正常細胞或組織所包圍，植株最終將恢復處理前的正常組織。因此，如何準確并有效的分離嵌合體，將是誘變育種工作者所面臨的重大問題。我們根據前人的相關研究，進行分析，認為目前解決木薯嵌合體較為理想的方案主要有無性繁殖分離法、單細胞誘變法及變異枝條多次分離法。

5 展望

誘變育種具有突變頻率高，變異范圍光；改良作物個別單一性狀比較有效；誘發的便宜較穩定，可以縮短育種時間。但誘變育種也存在突變方向和性質難以掌握及突變體多為嵌合體等問題。目前中國木薯誘變研究主要局限于形態、生理生化與組織解剖上，且存在誘變源單一，誘變材料選擇等問題，今后應從以下幾個方面加強研究。

5.1 加強研究木薯誘變機理

今后應加強誘變后木薯植株形態解剖，生理生化，分子水平等的研究，對誘變后染色體結構、數量、DNA損傷、修復及其與突變形成的關系等深入研究，以使突變盡可能向著有利的方向變異，有可能的話進行定向誘變。

5.2 誘變方法與技術的結合

在誘變育種的研究與實踐中，以提高誘發頻率和選擇效率為中心，不斷改進誘變育種的方法。誘變技術與組培技術結合可以加快變異的純合，縮短育種年限，兩者結合起來的育種方法是木薯育種中非常值得開拓的領域。另外許多育種家認為化學誘變與物理誘變結合可以提高誘變效果，即各種誘變因素結合起來，增寬突變譜，增加突變頻率。

5.3 誘變材料的選擇

誘變材料的選擇對于誘變育種來說是一個關鍵因素。目前胚性細胞和花粉是非常有前景的誘變材料，它們具有誘變率高，無嵌合現象等優點。尤其是花藥離體培養誘發突變及篩選技術最引人注目，顯性或隱性突變體都能很好表現，通過染色體加倍，能較快得到穩定且純合的突變系。

參考文獻

[1] Carvalho R， Guerra M. Cytogenetics of Manihot esculenta Crantz （cassava） and eight related species [J]. Hereditas，2002，136：159-168.

[2] Nassar N M A， Graciano-ribeiro D， Gomes P F， et al. Alterations of reproduction system in a polyploidized cassava interspecific hybrid[J]. Hereditas， 2010，147：58-61.

[3] 鄒積鑫，李開綿，王文泉.微衛星分子標記在木薯種質資源遺傳分析中的應用[J].華南熱帶農業大學學報，2005，11（2）：1-3.

[4] 韋本輝.中國木薯蘊具巨大產業經濟開發潛勢[J]. 資源與生產，2001（5）：17-19.

[7] Kharkwal M C， Pandey R N， Pawar S E. Plant Breeding： Mutation Breeding for Crop Improvement. In：H K Jain and M C Kharkwal（Eds.）. Plant Breeding[M]. Germany： Springer Netherlands，2004：601-645.

[8] Sanchez T， Roserob A， Tofino， A P， et al. Induction and identification of useful mutations for root quality traits in cassava. In： Shu Q.Y. （Eds.）. Induced plant mutations in the genomics era[M].Food and Agriculture Organization of the United Nations， Rome，2009：266-269.

[9] Nayar G G.， Nair R B， Rajendran P G. cassava varietal improvement in India. In： Howler R.H.， Kawano K. （Eds.）. Cassava breeding and agronomy research in Asia[M]. CIAT，1987：34-42.

[10] Asare E， Kantanka O S. Improvement of cassava cooking quality through mutation breeding[R]. IAEA-TECDOC-951， IAEA， Vienna ，1997：19-24.

[11] Owoseni O， Okwaro H， Afza R， et al. Radiosensitivity and in vitro mutagenesis in African accessions of cassava （Manihot esculenta Crantz） [J]. Plant Mutation Reports，2006，1（2）：32-36.

[12] Lee K S， Duren M V， Morpurgo R. Somatic embryogenesis in cassava： a tool for mutation breeding[R]. IAEA-TECDOC-951， IAEA， Vienna，1997：55-59.

[13] Joseph R， Yeoh H H， Loh C S. Induced mutations in cassava using somatic embryos and the identification of mutant plants with altered starch yield and composition[J]. Plant Cell Rep.， 2004，23：91-98.

[14] 陸柳英.木薯誘變處理的生物效應以及抗寒突變體的初步篩選[D].廣州：華南熱帶農業大學，2007：51-52.

[15] 羅興錄，樊吳靜.60Co不同劑量輻射對木薯主要農藝性狀影響的研究[J].中國農學通報2012，28（33）：53-59.

[16] 胡小元，王琳清.幾種理化誘變劑對木薯組織生長的影響[J]. 核農學通報，1992，13（6）：258-262

[17] 徐冠仁.植物誘變育種學[M].北京：中國農業出版社，1996，1-2.

[18] Amenorpe G. Mutation breeding for in planta modification of amylase starch in cassava （Manihot esculenta， Crantz）[D]）. University of the Free State， Bloemfontein， South Africa，2010.

[19] Nwachukwu E C， Mbanaso E N A， Ene L S O. Improvement of cassava for high dry matter， starch and low cyanogenic glucoside content by mutation induction. IAEA-TECDOC-951[R]. IAEA， Vienna，1997：93-98.

[20] 劉繼紅，胡春根，鄧秀新，等.中國果樹輻射誘變育種研究進展[J].中國果樹.1999（4）：48-50.

[21] Ahiabu R K， Lokko Y， Danso K， et al. Mutagenesis for ACMV resistance in a Ghanian cassava cultivar “Bosom Nsia”[R]. IAEA-tecdoc-951， IAEA， Vienna，1997：9-18.

[22] 陳顯雙，韋麗君，田益農等.木薯多倍體植株的誘導研究[J].廣熱帶農業科學，2008，8（1）：17-20.

[23] 王建嶺.木薯多倍體育種技術研究[D].南寧：廣西大學，2008，06：1-59.

[24] Lapins K O. Mutation Breeding. In： J.N.Moore and J.Janick， Methods in fruit Breeding[M]. Purdue univ.Press，W.Lafayette，IN，1983：74-79.

[25] 宋恒，王長泉，鞏向忠.C射線輻照杜鵑試管苗誘發突變體的研究[J].核農學報，2003，17（5）：347-349.

[26] 王長泉，李雅志，催德才.果樹誘變育種研究進展[J].山東農業大學學報.1996，27（4）.

[27] 陳善春，周育彬，張進仁，等.輻射誘育柑桔無核品系的遺傳性及同工酶研究.園藝學報，1992，19（2）：105-110.

[28] Yan H， Lu L， Hershey C， et al. Cassava Mutation Breeding： Current Status and Trends[J]. Plant Mutation Reports， 2013，1（3）：37-44

[29] 李雅志.無性繁殖植物輻射育種的新方法[M].北京：原子能出版社：1991.

[30] Caetano-Anolles G， Bassam B J， Gresshoff P M. Enhanced detection of polym or phic DNA by multiple arbitrary amplicon profiling of endonuclease digested DNA[J] . Molecular Genetics， 1993，241：57-64

[31] Tofino A， Cabal D， Ceballos H， et al. Phenotypic selection of inbred irradiated cassava germplasm progeny for TILLING analysis[J]. Multiciencias 2009，9（3）：233-241 （in Spanish）.

[32] Tofino A， Cabal D， Ceballos H， et al. Validation of TILLING in the evaluation of inbred progenies of irradiated cassava. Agronomia colombiana[J]. 2009，27（3）：313-321 （in Spanish）.

[33] Henikoff S， Till BJ， Comai L. TILLING： Traditional mutagenesis meets functional genomics[J]. Plant Physiol.，2004，135：630-636.

[34] Kurowska M， Golec A D， Gruszka D， et al. TILLING - a shortcut in functional genomics[J]. J. Appl. Genetics ，2011，52：371-390.

[35] Tomaszewski Z J R， Conger B V， Brunner H， et al. Effects of gamma radiation on the in vitro response of Dactylis glomerata leaf segments[J]. Environmental & Experimental Bot.，1988，28：335-341.

[36] Roux N S， Toloza A， Dolezel J， et al. Usefulness of embryogenic cell suspensions cultures for the induction and selection of mutants in Musa spp. In： Jain S.M.， Swennen R. （Eds）. Banana improvement： cellular， molecular biology and induced mutations[M].Science Publishers， USA，2004：33-43.

[37] Roux N.S.， Toloza A， Strosse H， et al. Induction and selection of potentially useful mutants in Banana. In： Jones D. and Van den Bergh I. （Eds）. Proc. IS on Banana Crop Prot.， Sust. Prod.， Acta Hort M].ISHS，2009：315-322.

[38] Roux N S， Dolezel J， Swennen R， et al. effectiveness of three micropropagation techniques to dissociate cytochimeras in Musa spp. Plant Cell， Tiss. Org.，2001，66：189-197.

[39] Jankowicz-Cieslak J， Huynh O A， Brozynska M， et al. Induction， rapid fixation and retention of mutations in vegetatively propagated banana. Plant Biotechnol. J.，2012，10（9）：1056-1066.

[40] Nayar G G， Nair R B， Rajendran P G. cassava varietal improvement in India. In： Howler R.H.， Kawano K. （Eds.）. Cassava breeding and agronomy research in Asia. CIAT，1987：34-42.

[41] Nassar N M A. Fertility and chimera induction in cassava， Manihot esculenta Crantz interespecific hybrids. Gene Conserve，2003，2（9）：118.