提取玫瑰基因組DNA幾種方法的比較

王玉　賈錦山　張娜娜　趙蘭勇

摘 要：為了找到一種方便、快捷且經(jīng)濟(jì)高效的玫瑰葉片基因組DNA提取方法，為玫瑰后期的分子生物學(xué)研究奠定良好基礎(chǔ)，以不同品種的玫瑰幼嫩葉片為材料，分別利用CTAB法、SDS法、改良CTAB法、試劑盒法4種方法提取玫瑰基因組DNA，經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳、紫外分光光度法對(duì)所提DNA的質(zhì)量和產(chǎn)量進(jìn)行檢測(cè)比較。結(jié)果表明：4種方法均可從玫瑰葉片中提取到DNA，改良CTAB法作為對(duì)常規(guī)方法的改進(jìn)，在保證經(jīng)濟(jì)實(shí)用的前提下提取到的DNA質(zhì)量最好，濃度最高；而試劑盒法作為一種快速提取植物基因組DNA的新興方法，雖然產(chǎn)量略低，費(fèi)用略高，但操作步驟簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，毒害小，高效快捷。各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)實(shí)際情況選擇適宜的方法。

關(guān)鍵詞：玫瑰；DNA提??；CTAB法；SDS法；改良CTAB法；試劑盒法

中圖分類號(hào)：S688.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 論文編號(hào)：2014-0054

0 引言

DNA作為生物遺傳信息的載體，是重要的生物信息分子。提取高質(zhì)量的DNA分子是對(duì)植物基因組進(jìn)行分子生物學(xué)如分子標(biāo)記輔助育種、圖譜構(gòu)建、基因定位與克隆、遺傳轉(zhuǎn)化和遺傳多樣性分析[1-2]等研究的重要基礎(chǔ)。因此，能否快速且高質(zhì)量的提取到植物基因組DNA將直接關(guān)系到整個(gè)試驗(yàn)的成敗。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)此方面的研究都已有不少。常用的DNA提取方法有十六烷基三乙基溴化銨（CTAB）法[3-5]、十二烷基硫酸鈉（SDS）法[6-9]、高鹽低pH法[10-12]、尿素法[13-15]、試劑盒提取DNA法[16-17]、熱解法、氯苯法等。不同的植物材料要選擇不同的提取方法，有的還要在傳統(tǒng)的方法上加以改進(jìn)。如趙志常等[3]利用改良的CTAB法提取番石榴的基因組DNA并對(duì)其進(jìn)行SCoT-PCR擴(kuò)增，濃度質(zhì)量均符合試驗(yàn)要求；盧東柏等[9]利用改良后的SDS法提取棉花的基因組DNA，解決了棉花DNA提取質(zhì)量不高且易褐變的問(wèn)題；邵峰等[10]通過(guò)對(duì)CTAB法，SDS法和高鹽低pH法3種方法的對(duì)比發(fā)現(xiàn)高鹽低pH法最適合紫色辣椒基因組DNA的提取；而劉順枝等[15]通過(guò)試驗(yàn)對(duì)比得出尿素法更適合超積累生態(tài)型和非超積累生態(tài)型的東南景天DNA的提取；梁玉琴等[16]則利用試劑盒法提取到了質(zhì)量高、雜質(zhì)少的柿屬植物DNA，并簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)方法的操作步驟，縮短用時(shí)，降低毒害。

因目前尚無(wú)對(duì)玫瑰基因組DNA提取方法的比較研究，所以筆者以干燥的玫瑰幼嫩葉片為材料，采用4種DNA提取方法——CTAB法、SDS法、改良CTAB法、試劑盒法分別提取其基因組DNA，分析比較所提取到的基因組DNA質(zhì)量與效率，以期找到一種方便、快捷且高效經(jīng)濟(jì)的玫瑰葉片基因組DNA提取方法，為玫瑰后期的分子生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

研究田間試驗(yàn)于2013年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)試驗(yàn)站進(jìn)行，室內(nèi)試驗(yàn)在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)花卉研究所進(jìn)行。

1.2 供試材料

1.2.1 材料來(lái)源 試驗(yàn)所用玫瑰材料共選取3個(gè)品種15株，3個(gè)品種分別為‘紫枝玫瑰、‘北京單白和‘唐白，全部取自山東農(nóng)業(yè)大學(xué)玫瑰種質(zhì)資源圃。采集新鮮、無(wú)病蟲害的玫瑰幼嫩葉片，以塑封袋分裝后加入硅膠顆粒吸收葉片水分，待葉片完全干燥后放于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 試驗(yàn)藥劑 CTAB提取緩沖液（1.4 mol/L NaCl，20 mmol/L EDTA，100 mmol/L Tris-HCl，2%CTAB，pH 8.0）；SDS細(xì)胞提取液（500 mmol/L NaCl，50 mmol/L EDTA，100 mmol/L Tris-HCl，10 mmol/L β-巰基乙醇，1.5%SDS，pH 8.0）；改良2×CTAB提取緩沖液（1 mol/L Tris-HCl，0.5 mol/L EDTA，1.4 mol/L NaCl，2%CTAB，pH 8.0）；Tris-飽和酚；氯仿-異戊醇（V：V=24：1）；β-巰基乙醇；PVP；異丙醇；5 mol/L KAc；氯仿；70%乙醇；無(wú)水乙醇；RNaseA（5 mg/mL）；TE緩沖液；1×TAE溶液；6×loading buffer等。

1.3 4種方法提取玫瑰葉片基因組DNA

1.3.1 CTAB法提取DNA 具體操作過(guò)程和步驟參考韓玉杰等[18]的試驗(yàn)方法并進(jìn)行改進(jìn)。具體方法如下：（1）稱取200 mg玫瑰干葉，在液氮中研磨成粉末狀。（2）將粉末轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，加入600 ?L預(yù)熱的CTAB提取緩沖液，混勻后65℃水浴保溫20 min。（3）取出離心管，加入等體積的氯仿-異戊醇，充分顛倒混勻。（4）12000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液至新管中。（5）重復(fù)（3）、（4）步驟1次。（6）吸取上清液于新管中，加入0.6 V異丙醇，輕輕混勻。（7）14000 r/min離心10 min獲得沉淀，70%乙醇洗滌后在室溫下自然風(fēng)干。（8）加入200 ?L TE緩沖液溶解DNA。（9）待DNA完全溶解后，RNaseA處理，并再次抽提。（10）獲得上清液后加入2倍體積的無(wú)水乙醇沉淀DNA。（11）70%乙醇洗滌沉淀，晾干后加入50 ?L TE緩沖液溶解，置于-20℃保存。

1.3.2 SDS法提取DNA 參見韓玉杰等[18]方法并進(jìn)行改進(jìn)。（1）取200 mg玫瑰干燥葉片，在液氮中研磨至粉末狀。（2）將粉末轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，加入600 ?L 65℃預(yù)熱的SDS細(xì)胞提取液，搖勻后置于65℃中水浴保溫20 min，期間不時(shí)將離心管顛倒混勻。（3）取出離心管，冷卻至室溫，加入200 ?L 5 mol/L KAc溶液，混勻，冰浴20 min。（4）加入300 ?L氯仿，顛倒混勻，12000 r/min離心15 min。（5）將上清液轉(zhuǎn)移至新管中并加入等體積4℃預(yù)冷的異丙醇，輕輕混勻，-20℃放置30 min。（6）收集沉淀，用70%乙醇洗滌沉淀2次并晾干。（7）加入200 ?L TE緩沖液溶解DNA。（8）DNA完全溶解后，用RNaseA處理，并再次加入氯仿抽提。（9）得到上清液后加入2倍體積的無(wú)水乙醇沉淀DNA。（10）70%乙醇洗滌沉淀，晾干后加入50 ?L TE緩沖液溶解，置于-20℃保存。

1.3.3 改良CTAB法提取DNA 參見徐宗大[19]的試驗(yàn)方法并進(jìn)行改進(jìn)。（1）取5～6片玫瑰干葉放于研缽中，加少許PVP，加入液氮迅速研磨成粉。（2）將約0.1 g粉末轉(zhuǎn)移至2 mL離心管中，加入800 ?L 65℃預(yù)熱的改良2×CTAB緩沖液和30 ?L β-巰基乙醇，充分混勻，65℃水浴40 min，期間每隔10 min顛倒混勻一次。（3）離心管取出冷卻至室溫，加入400 ?L Tris-飽和酚和400 ?L氯仿/異戊醇（24：1），顛倒混勻，12000 r/min離心15 min。（4）將上清液轉(zhuǎn)入2 mL離心管中，加入與上清液等體積的氯仿/異戊醇（24：1），混勻，12000 r/min離心10 min。（5）重復(fù)（4）操作。（6）上清液轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，加入2倍清液體積的4℃預(yù)冷無(wú)水乙醇，輕輕搖動(dòng)離心管，管內(nèi)即有白色棉團(tuán)狀DNA沉淀出現(xiàn)，-20℃放置30 min。（7）將沉淀挑入新管中，用70%乙醇洗滌2次。再用無(wú)水乙醇洗滌1次，于試驗(yàn)臺(tái)靜置至乙醇揮發(fā)干凈。（8）加入50 ?L TE緩沖液溶解DNA。（9）待DNA完全溶解后，RNaseA處理樣品，置于-20℃保存。

1.3.4 試劑盒法提取DNA 采用TIANGEN植物基因組DNA提取試劑盒按說(shuō)明書操作步驟提取玫瑰DNA。

1.4 DNA質(zhì)量檢測(cè)

1.4.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) 瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的DNA質(zhì)量檢測(cè)方法。取2 ?L DNA樣品，與1 ?L ddH2O和2 ?L 6×Loading buffer混勻后點(diǎn)樣于濃度為0.8%的瓊脂糖凝膠中，在1×TAE電泳緩沖液，電壓120V下電泳。約30 min后取出放于EB染液中染色20 min，在紫外光下觀察電泳結(jié)果并拍照記錄。

1.4.2 DNA純度檢測(cè) 用紫外分光光度法檢測(cè)DNA樣品的純度與濃度。以ddH2O作為空白對(duì)照，測(cè)得玫瑰基因組DNA樣品在波長(zhǎng)260、280處的OD值，并根據(jù)OD260/OD280判斷DNA的純度。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種方法提取的基因組DNA電泳檢測(cè)結(jié)果與分析

4種方法提取不同品種玫瑰葉片基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果如圖1、2所示。結(jié)果表明，采用以上4種方法均可從干燥的玫瑰幼嫩葉片中提取到DNA，都可呈現(xiàn)一條亮帶，無(wú)明顯降解，且完整性較好。但SDS法和試劑盒法提取得到的DNA在點(diǎn)樣孔中有少許殘留物，說(shuō)明這2種方法所提取的玫瑰DNA中摻有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。相比以上2種方法，CTAB法和改良CTAB法提取的DNA的點(diǎn)樣孔較清晰可見，表明殘留物少，基本上可排除DNA樣品中的雜質(zhì)污染。從圖1、2對(duì)比來(lái)看，改良CTAB法提取到的DNA除‘紫枝玫瑰的2個(gè)樣品有少許拖尾外，效果與CTAB法相近。但在實(shí)際操作過(guò)程中，CTAB法提取到的DNA因含有少量的酚類雜質(zhì)，產(chǎn)生褐色沉淀且不易溶解于TE緩沖液，而改良CTAB法因?yàn)樵谔崛∵^(guò)程中加入了PVP和β-巰基乙醇，減少了酚類及多糖類物質(zhì)對(duì)DNA的污染，得到白色棉絮狀DNA沉淀，提高了DNA的純度。因此，改良CTAB法可作為一種高質(zhì)量提取玫瑰葉片基因組DNA的方法。

2.2 4種方法提取的基因組DNA樣品純度分析

用紫外分光光度法測(cè)定DNA純度時(shí)，純凈的DNA在260 nm及280 nm處的吸光度比值，即OD260/OD280=1.80。一般情況下，提取的基因組DNA的OD260/OD280在1.80～1.90之間時(shí)，說(shuō)明為較純凈的DNA，質(zhì)量較好[20]。4種方法提取到的玫瑰葉片總DNA的吸光度比值如表1所示。用SDS法提取的DNA樣品的OD260/OD280比值在1.63～1.78之間，總體偏低于正常值1.80，表明該DNA樣品中可能混有蛋白質(zhì)或酚類物質(zhì)。試劑盒法所提取的DNA OD260/OD280均大于1.90，結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳分析，照片中的DNA較為完整，排除DNA斷裂的可能性，則可知該DNA樣品中可能含有較多RNA，應(yīng)用RNA酶重新處理樣品。CTAB法和改良CTAB法相比于其他2種方法所提DNA的OD260/OD280比值較好，均在1.80～1.90之間，可見這2種方法對(duì)蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)去除的較為充分，DNA純度較高，完整性較好。仔細(xì)對(duì)比兩者還可發(fā)現(xiàn)，改良CTAB法提取的DNA純度較CTAB法更穩(wěn)定。從前3種方法所得DNA的濃度對(duì)比可知，SDS法提取的DNA濃度最低，說(shuō)明該方法所獲得的DNA量較少，而CTAB法和改良CTAB法所得的DNA量較多。綜合來(lái)看，改良CTAB法所提取的DNA純度與濃度較高，能很好的滿足試驗(yàn)要求，可作為一種優(yōu)選的提取方法。

3 討論與結(jié)論

結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)圖和DNA的純度表中數(shù)值綜合分析可知，4種提取方法都可從玫瑰葉片中提取到基因組DNA。但比較來(lái)看，SDS法提取的DNA樣品OD值在1.63～1.78之間，偏低于正常值1.80，說(shuō)明其提取的DNA中蛋白質(zhì)及酚類雜質(zhì)較多且DNA濃度不高，所以不將其作為玫瑰葉片基因組DNA提取的首選方法；CTAB法和改良CTAB法提取DNA的效果相近，2種方法得到的DNA樣品OD值均在1.80～1.90之間，2種方法對(duì)雜質(zhì)的去除都較為充分，DNA純度高，完整性好；改良CTAB法因其去除色素雜質(zhì)的效果較好[20]且方法穩(wěn)定，因此相比于常規(guī)CTAB法更適合玫瑰基因組DNA的提??；試劑盒法提取的DNA樣品OD值都高于1.90，純度稍低，表明樣品中含有較多RNA，需RNAase的進(jìn)一步純化，但相比于傳統(tǒng)方法操作步驟繁瑣耗時(shí)，有機(jī)試劑危害人體等缺點(diǎn)，其提取到的DNA濃度高，制備方法簡(jiǎn)單、快捷、效率高。

本研究與以往類似的參考文獻(xiàn)相比，相同點(diǎn)在于都是利用幾種不同方法對(duì)某一植物材料基因組DNA進(jìn)行提取，對(duì)比提取效果并選出最合適的提取方法；不同點(diǎn)在于由于試驗(yàn)材料的不同進(jìn)而得到的最佳提取方法也不同，如盧東柏等[9]利用改良后的SDS法能提取到高質(zhì)量的棉花基因組DNA；邵峰等[10]發(fā)現(xiàn)高鹽低pH法更適合紫色辣椒基因組DNA的提?。槐狙芯縿t認(rèn)為改良CTAB法是更適合玫瑰基因組DNA提取的有機(jī)試驗(yàn)方法，而試劑盒法則可作為一種新興的快速制備方法以供選用。玫瑰基因組DNA的提取除徐宗大[19]提出過(guò)的改良CTAB法外至今并無(wú)對(duì)該方面的比較研究，所以本研究以此為切入點(diǎn)開展試驗(yàn)并取得了一定進(jìn)展與創(chuàng)新。研究發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)有機(jī)提取方法以改良CTAB法為優(yōu)，試劑盒法作為新型試驗(yàn)方法也可嘗試采用。并且，在與其他相關(guān)文獻(xiàn)的對(duì)比研究上還可得出結(jié)論：選用的方法雖然類似，但因選取的植物材料特性不同其最適宜的提取方法也不同，即使同為改良后的方法，因改良的側(cè)重點(diǎn)不同，切不可生搬硬套，要因材制宜。

此外，改良CTAB法作為一種高質(zhì)量且經(jīng)濟(jì)有效的提取玫瑰葉片基因組DNA的方法，應(yīng)注意該方法在提取過(guò)程中的操作要點(diǎn)，以免因?yàn)椴僮髟蛴绊慏NA的提取質(zhì)量。（1）取材。材料的選取對(duì)玫瑰DNA的提取質(zhì)量有關(guān)鍵性的影響[20]。該試驗(yàn)采用的材料是玫瑰的幼嫩葉片，以幼葉紅色褪去，葉片呈現(xiàn)鮮綠色時(shí)為最佳的取材時(shí)期，此時(shí)葉片中不僅DNA含量豐富且多糖、色素、酚類及蛋白質(zhì)等次生代謝物質(zhì)較少，便于去除，利于獲得高質(zhì)量的DNA。當(dāng)不便采取新鮮葉片使用時(shí)，采樣后應(yīng)及時(shí)裝入帶有硅膠顆粒的塑封袋中使葉片迅速干燥，并于-20℃下保存，最大限度地減少DNA的降解。（2）磨樣和水浴時(shí)間。材料研磨不充分或水浴時(shí)間不夠都會(huì)影響DNA的產(chǎn)量[20]。因此，在用液氮研磨葉片材料時(shí)應(yīng)多研磨幾次。研磨所得的粉末越細(xì)越好，粉末顏色以灰綠色或白綠色為最佳。為了獲得高質(zhì)量的玫瑰DNA，在材料充分研磨的前提下，將水浴時(shí)間定為40 min，期間每隔10 min還要上下顛倒幾次，使得改良2×CTAB緩沖液能充分裂解細(xì)胞。（3）防止褐化。玫瑰葉片中的多糖、多酚、色素及蛋白質(zhì)等次生代謝物質(zhì)易使DNA在提取過(guò)程中出現(xiàn)褐化，造成DNA的質(zhì)量下降[21]。改良2×CTAB緩沖液中含有高濃度的鹽，可有效沉淀多糖；提取過(guò)程中通過(guò)飽和酚、氯仿：異戊醇（24：1）的多次抽提，能有效去除蛋白質(zhì)；β-巰基乙醇和PVP的加入，可防止酚氧化和酚類物質(zhì)與DNA的結(jié)合[22]，最終通過(guò)乙醇的洗滌獲得高質(zhì)量的DNA。（4）避免剪切力。除了DNA的純度對(duì)后續(xù)試驗(yàn)影響較大外，DNA的完整性對(duì)試驗(yàn)結(jié)果也有一定的影響[23]。DNA對(duì)剪切力非常敏感，為了得到片段較為完整的DNA，在提取過(guò)程中要盡量簡(jiǎn)化操作步驟，減少轉(zhuǎn)移次數(shù)，并對(duì)離心速度和時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)控制等；提取過(guò)程中應(yīng)避免劇烈震蕩，溫和操作，用減去尖端的槍頭吸取上清液，吸取過(guò)程中避免產(chǎn)生氣泡。這樣可以得到片段較大的DNA，保證后期的擴(kuò)增結(jié)果。

改良CTAB法作為對(duì)常規(guī)CTAB法的改進(jìn)，提取到的玫瑰基因組DNA濃度高且片段完整，雜質(zhì)少，色澤透明純凈，質(zhì)量好，是提取玫瑰基因組DNA優(yōu)選的有機(jī)方法。但因其操作步驟的繁瑣和耗時(shí)性，該方法更適用于樣品材料不多，試驗(yàn)時(shí)間充裕的情況下。試劑盒法作為一種新興的提取方法，能方便、快捷、高效地提取到符合操作要求的玫瑰基因組DNA，簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)方法的操作步驟且更加安全，但費(fèi)用比傳統(tǒng)方法略高。因此，在經(jīng)費(fèi)允許的情況下，試劑盒法可作為一種快速制備玫瑰基因組DNA的方法以供選用。各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)試驗(yàn)條件，經(jīng)費(fèi)支出，人員配備等具體情況，結(jié)合這2種方法的優(yōu)缺點(diǎn)選擇合適的提取方法。在以后的研究中還要對(duì)目前的方法予以不斷改進(jìn)，如進(jìn)一步改良CTAB法，減少操作步驟，縮短操作時(shí)間；增強(qiáng)試劑盒法對(duì)復(fù)雜操作環(huán)境和植物材料的適應(yīng)能力，保證穩(wěn)定高效的提取效果，降低使用成本等。希望日后的研究能在現(xiàn)有的基礎(chǔ)上探索出更完善、更適合玫瑰基因組DNA提取的方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 周春陽(yáng)，謝立波，李景福，等.辣椒葉片基因組DNA提取方法的研究[J].辣椒雜志，2011（3）：35-37.

[2] 林強(qiáng)，邱長(zhǎng)玉，朱芳榮，等.2種桑樹基因組DNA提取方法的比較研究[J].廣西蠶業(yè)，2011，48（2）：1-5.

[3] 趙志常，陳業(yè)淵，高愛平，等.改良CTAB法提取番石榴總DNA的初步研究[J].北方園藝，2013（09）：123-125.

[4] 高洪曉，楊凱，劉建斌.3種植物DNA提取法中多糖類物質(zhì)去除效果的研究[J].北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，26（1）：70-72.

[5] Kur T C， Heien C C. RAPD analysis of Lycium barbarum medicine in Taiwan market[J].Bot Bull A，Acad Sin，2000，41（1）：11.

[6] 陸鑾眉，朱旸，潘一山.幾種常見方法提取番荔枝基因組DNA的比較[J].福建熱作科技，2011，36（3）：10-12.

[7] 肖婷婷，朱艷，葉波平，等.鳶尾屬藥用植物總DNA提取方法的比較研究[J].中國(guó)野生植物資源，2010，29（3）：46-50.

[8] 王珍，方宣鈞.植物DNA分離[J].分子植物育種，2003，1（2）：281-288.

[9] 盧東柏，李曉方，劉志霞.改良SDS法提取棉花基因組DNA研究[[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（5）：14-16.

[10] 邵峰，乙引，徐娟，等.紫色觀賞辣椒基因組DNA提取及ISSR-PCR體系的優(yōu)化[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（28）：101-104.

[11] 姚丹，閆偉，關(guān)淑艷.高鹽低pH法提取大豆不同組織DNA的效果[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（12）：50-53.

[12] Miyake T， Yahara T. Isolation of polymorphic microsatellite loci in Hemerocallis fulva and Hemerocallis citrina（Hemero callidaceae）[J].Molecular Ecology Notes，2006（6）：909-911.

[13] 龍茜，劉洪章，劉樹英.玉簪種質(zhì)資源遺傳多樣性SSR分析[J].北方園藝，2013（17）：100-103.

[14] 徐虹，鄭敏，章軍，等.三種樟科植物的細(xì)胞總DNA提取[J].云南植物研究，2004，26（4）：451-457.

[15] 劉順枝，劉雯，江月玲，等.東南景天DNA提取方法的比較[J].廣州大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，11（1）：27-31.

[16] 梁玉琴，李芳東，傅建敏，等.柿屬植物基因組DNA提取方法比較[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（4）：170-173.

[17] 黃鳳蘭，郭志強(qiáng)，孟凡娟，等.試劑盒法提取蓖麻基因組DNA的條件優(yōu)化[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，25（1）：31-33.

[18] 韓玉杰，賈煒瓏，王自霞，等.幾種提取植物DNA方法的比較[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（7）：17-19.

[19] 徐宗大.玫瑰遺傳多樣性的SRAP分析與品種指紋圖譜構(gòu)建[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

[20] 劉鍇棟，袁長(zhǎng)春，陳燕，等.不同方法提取野生荔枝基因組DNA效果的比較[J].北方園藝，2012（23）：105-109.

[21] 郭寶林，劉萬(wàn)水，黃文華，等.影響總DNA提取因素的探討[J].中國(guó)中藥雜志，2006，31（11）：924-926.

[22] 肖鯤，葛曉軍，李小瓊，等.改良CTAB法提取石斛總DNA[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，32（2）：213-214.

[23] 李珊，王瑪麗，趙桂仿.廟臺(tái)槭總DNA提取及鑒定[J].西北植物學(xué)報(bào)，2001，21（2）：232-236.