五味子藥材特征圖譜質(zhì)量標準研究

張 敏，董 慧

（1．吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033； 2．中國人民解放軍裝甲兵技術(shù)學院醫(yī)院，吉林 長春 130117）

五味子主產(chǎn)遼寧、吉林、黑龍江、河北等地，商品習稱北五味子，為木蘭科植物五味子 Schisandra chinensis(Turcz．)Baill．的干燥成熟果實，具有斂肺、滋腎、生津、收汗、澀精的功效，用于治療肺虛喘咳、口干作渴、自汗、盜汗、勞傷羸瘦、夢遺滑精、久瀉久痢。現(xiàn)代研究證明，五味子含有木脂素、揮發(fā)油、有機酸、維生素、三萜、倍半萜及多糖等多種化學成分[1]。木脂素類成分為五味子藥材的主要活性成分，具有降酶保肝、增強肝臟解毒功能、去除人體自由基等多種作用，分析方法有薄層色譜法、高效液相色譜法等。目前采用的質(zhì)量標準中多是對五味子中的五味子醇甲、五味子乙素進行鑒別和含量測定。五味子中木質(zhì)素類成分主要有五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲、五味子酯乙等。為了提供五味子木質(zhì)素類成分更多、更全面的信息，筆者采用高效液相色譜法，以五味子甲素為參照物，建立木脂素類成分特征圖譜鑒別方法。

1 儀器與試藥

Agilent－1200型高效液相色譜儀（美國 Agilent公司），AG135型電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）。甲醇、正己烷(分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；乙腈為色譜純，水為超純水。本試驗所用對照品均來源于中國食品藥品檢定研究院。本次共收集到五味子藥材10批，產(chǎn)地分別為吉林、遼寧、東北、甘肅、河北。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Phenomenex Luna C18柱 (250 mm ×4．6 mm，5 μm)，Agilent Zorbax C18柱（250 mm × 4．6 mm，5 μm）。兩根色譜柱在不同的色譜條件下均可使供試品溶液分離良好，均呈現(xiàn)包括對照品在內(nèi)的13個特征峰，見圖1。由于Agilent Zorbax C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）相對分析時間較短，且使用較為普遍，因此，作為試驗用色譜柱。

測定波長的選擇：分別取五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL各含0．1 mg的溶液，經(jīng)紫外光譜掃描，結(jié)果4種對照品均在220 nm波長處有最大吸收。因此，采用220 nm作為本試驗的測定波長。

提取溶劑的選擇：本試驗考察了80%甲醇，90%甲醇，甲醇，正己烷4種溶劑，結(jié)果以正己烷作為提取溶劑，各特征峰分離效果最好，五味子醇甲、五味子甲素與五味子乙素均能達到基線分離。

流動相的選擇：考察表1中4種流動相系統(tǒng)對五味子各成分的分離效果。結(jié)果，乙腈－水流動相梯度洗脫可使供試品溶液中各主要色譜峰達到基本分離，并可使五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素均達到基線分離，明顯優(yōu)于其他流動相，故選擇其作為流動相。

表1 流動相系統(tǒng)考察結(jié)果(%)

采集時間的考察：采用所選色譜條件，取供試品溶液注入高效液相色譜儀，采集100 min，結(jié)果在75 min之后無色譜峰出現(xiàn)，故確定采集時間為75 min。

特征峰的提取與結(jié)果判定：按所選方法，對9批樣品進行測定，記錄色譜圖，見圖1，考察各圖譜中的色譜峰，綜合提取13個共有特征峰，依次標號為1～13號，與參照物峰對照，其中1號峰為五味子醇甲峰，7號峰為五味子酯甲峰，9號峰為五味子甲素，12號峰為五味子乙素峰。選擇9號峰為參照峰，計算其他9個共有特征峰的相對保留時間。

圖1 五味子藥材特征圖譜（產(chǎn)地吉林1）

結(jié)果判定：供試品溶液色譜中，應(yīng)具有13個特征峰，其中1，7，9，12號峰應(yīng)分別與4個對照品五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素峰保留時間一致。以五味子甲素峰（9號峰）作為參比峰。計算其他峰的相對保留時間，各峰相對保留時間應(yīng)在表中規(guī)定數(shù)值的±2%以內(nèi)。

2．2 方法學考察

精密度試驗：取同一供試品溶液（產(chǎn)地吉林 1）5 μL，連續(xù)進樣6次，以五味子甲素峰為參比峰，計算其他特征峰的相對保留時間。結(jié)果各特征峰的相對保留時間的 RSD（%）小于1%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（產(chǎn)地吉林1），分別在 0，4，10，24，48 h時，照正文方法測定，按相對保留時間計算。結(jié)果未發(fā)生明顯變化，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一供試品（產(chǎn)地吉林1）6份，依法獨立測定，計算相對保留時間。結(jié)果各特征峰相對保留時間的 RSD（%）均小于1%，表明方法重復(fù)性良好。

2．3 樣品含量測定

按照上述方法測定樣品9批，結(jié)果見表2。經(jīng)鑒定為南五味子的藥材，通過高效液相特征圖譜鑒別試驗，可得到明確的區(qū)分，圖譜顯示，除在相對保留時間 0．219（1 ± 2%)及 0．606（1 ±2% ）范圍內(nèi)有共有峰外，均未檢出其余共有峰。

表2 9批樣品測定結(jié)果

3 討論

木脂素類成分為五味子藥材的主要活性成分，具有降酶保肝、增強肝臟解毒功能、去除人體自由基等多種作用。分析方法有薄層色譜法、高效液相色譜法等[2－3]，目前采用的質(zhì)量標準中多是對五味子中的五味子醇甲、五味子乙素進行鑒別和含量測定。

五味子中木質(zhì)素類成分主要有五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲、五味子酯乙等[4]。為了給出五味子木質(zhì)素類成分更多、更全面的信息，本試驗采用高效液相色譜法，以五味子甲素為參照物，建立了木脂素類成分特征圖譜鑒別方法。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：61－62．

[2]李明軍，肖 靜．強力腦清素片中五味子、鹿茸的薄層鑒別[J]．中國藥業(yè)，2007，16(1)：30 －31．

[3]劉憲麗，劉憲軍，尹青青．五味子與南五味子的鑒別[J]．中國藥業(yè)，2003，12(5)：61．

[4]李奉勤，史冬霞，張瑞紅等．五味子中五味子乙素提取工藝研究[J]．中國藥業(yè)，2006，15(7)：46．