高效液相色譜－蒸發(fā)光散射法測定芪杞口服液中黃芪甲苷含量

高文平，李 拜，劉 成，李 娟

（陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)天寧制藥有限責(zé)任公司，陜西 綏德 718000）

芪杞口服液由黃芪、枸杞子、麥冬、金銀花等組方，具有補(bǔ)氣健脾、潤肺滋陰、益腎養(yǎng)血的功效，用于脾、肺氣虛，放射治療、化學(xué)治療和手術(shù)后的輔助治療。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者選擇處方中君藥黃芪的有效成分黃芪甲苷作為指標(biāo)，建立了測定芪杞口服液中黃芪甲苷含量的高效液相色譜法－蒸發(fā)光散射檢測法。

1 儀器與試藥

Waters－515型高效液相色譜儀，ELSD 800型蒸發(fā)光散射檢測器 (Alltech公司)。黃芪甲苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為 0781－200311）；芪杞口服液樣品（批號(hào)為 110601，110602，110603）由本公司提供；試驗(yàn)用水為超純水，乙腈為色譜純，正丁醇、氨水均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Promosil C18100? 柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；柱溫：40 ℃ ；流動(dòng)相：乙腈 － 水(35 ∶65)；流速：1．0 mL ／min；載氣流速：0．3 MPa(壓縮空氣)；漂移管溫度：50℃；理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于8 000。分別將黃芪甲苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液注入高效液相色譜儀檢測。結(jié)果供試品溶液色譜圖中，呈現(xiàn)與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間的色譜峰，且基線平穩(wěn)、分離度好，而陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間無色譜峰，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h的黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0．502 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。精密取本品40 mL，置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇溶液提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌 3次，每次40 mL，棄去氨試液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? mL容量瓶中，用0．45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方組成去除黃芪的其余藥味，按工藝要求制成不含黃芪的“芪杞口服液”，按2．2項(xiàng)下方法操作，制得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品12．55 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；按上述色譜條件，分別進(jìn)樣 1，2，5，10，15，20 μL，以峰面積的對(duì)數(shù)值與進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值進(jìn)行回歸，得回歸方程 Y＝1．377 6 X＋4．853 9，r＝0．999 7(n ＝ 6)。結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在 0．502 ～10．04 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液(0．502 g／L)，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣量10 μL，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為 0．46%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一樣品溶液 10 μL，分別于 0，6，12，16，24 h時(shí)進(jìn)樣，記錄黃芪甲苷峰面積。結(jié)果的 RSD為1．23%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，按擬訂含量測定方法，分別制備6份供試品溶液，測定黃芪甲苷的含量。結(jié)果的 RSD為1．78%，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn)：精密取已知含量（0．044 2 g／L）的樣品 (批號(hào)為 110601)20 mL，共6份，分別精密加入 0．502 g／L黃芪甲苷對(duì)照品溶液1，2，3 mL，每個(gè)梯度平行 2份，按上述方法制備供試品溶液，分別精密吸取20 μL，按擬訂色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

2．4 樣品含量測定

3批樣品按上述方法制備樣品溶液，精密量取對(duì)照品溶液10，20 μL，樣品溶液 20 μL注入高效液相色譜儀，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，結(jié)果3批芪杞口服液中黃芪甲苷含量分別為0．044 2，0．042 1，0．043 3 g ／L。

3 討論

供試品溶液制備中，筆者比較了通過D101型大孔樹脂柱處理的樣品和未過樹脂柱處理的樣品圖譜，結(jié)果表明，2種方法色譜圖基本一致，黃芪甲苷色譜峰未受雜質(zhì)峰干擾，但通過樹脂柱處理的樣品中黃芪甲苷的含量低于未過樹脂柱處理的樣品，故選用了不過樹脂柱的方法制備供試液。參照文獻(xiàn)[1－3]，對(duì)流動(dòng)相乙腈－水的比例進(jìn)行了篩選，考察了出峰時(shí)間和色譜分離情況，結(jié)果以乙腈－水(35∶65)為流動(dòng)相時(shí)，黃芪甲苷色譜峰出峰時(shí)間合適，分離效果最佳。

本方法簡便易行，專屬性強(qiáng)，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于芪杞口服液中黃芪甲苷的含量測定。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283．

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[3]焦懷慧，仝立國，方 昆，等．HPLC－ELSD法測定芪芍通絡(luò)口服液黃芪甲苷含量研究[J]．山西中醫(yī)，2011，27(2)：45 －46．