高效液相色譜法測定鹽酸伊立替康注射液的含量

王 宇，黃巧巧，謝升谷，鄭國鋼

（浙江省食品藥品檢驗研究院，浙江 杭州 310004）

鹽酸伊立替康（CPT－11）為半合成喜樹堿衍生物，抗癌活性強，毒性較喜樹堿?。?］，水溶性較好；1994年由日本第一制藥和YakultHonsha公司開發上市，用于治療肺癌、卵巢癌和宮頸癌［2］；1998年獲得美國食品與藥物管理局批準，用于標準化療方案治療失敗后轉移性結直腸癌的一線治療。該藥于2001年3月在中國上市，2010年版《中國藥典》尚未收載。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對鹽酸伊立替康注射液的含量測定方法進行了研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀；Mettler XS205DU型電子天平。鹽酸伊立替康對照品（USP對照品，使用前不需干燥，按C33H38N4O6·HCl計，含量為 91.6%，CAT.NO.為 1347609，MD LOT為GOJ233）；鹽酸伊立替康注射液（浙江海正藥業股份有限公司，批號分別為 120801，120802，120803，規格均為 5mL ∶100mg）；鹽酸伊立替康注射液輔料原液（浙江海正藥業股份有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純，無水磷酸二氫鈉、辛烷磺酸鈉均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：AgilentHC－C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（取無水磷酸二氫鈉2.43 g和辛烷磺酸鈉1.66 g，溶

于 1 000mL 水中）－甲醇 －乙腈（57∶25∶18）；流速：1.5mL ／min；

進樣量：15 μL；柱溫：40℃；檢測波長：255 nm。

2.2 溶液制備

溶液制備時均避光操作。精密量取本品5mL（相當于鹽酸伊立替康100mg），置100mL容量瓶中，用稀釋劑（流動相用鹽酸調節pH為3.65）稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。避光操作。取鹽酸伊立替康對照品約50mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取不含鹽酸伊立替康的輔料原液，按供試品溶液制備方法制備得空白輔料溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：按2.1項下色譜條件，取2.2項下3種溶液，分別進樣分析。結果見圖1，可見，供試品溶液色譜主峰的保留時間與對照品溶液色譜峰一致，空白輔料對鹽酸伊立替康的含量測定無干擾。

線性關系考察：取鹽酸伊立替康對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋成質量濃度約為 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 g／L的對照品溶液，分別取15μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以質量濃度（C，g／L）對峰面積（A）作標準曲線，得線性回歸方程A＝29561C＋1043.8，r＝0.9994（n＝7）。結果表明，鹽酸伊立替康質量濃度在0.1831～1.4647 g／L范圍內與峰面積呈良好線性關系。

圖1 鹽酸伊立替康高效液相色譜圖

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液15μL，注入高效液相色譜儀，連續進樣6次。結果的RSD為0.03%（n＝6），表明儀器精密良好。

重復性試驗：取批號為120801的樣品，依法制備6份供試品溶液，分別進樣。結果的RSD為0.46%（n＝6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一份供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12 h時進樣分析，記錄色譜圖。結果峰面積的RSD為0.56%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

回收率試驗：分別取鹽酸伊立替康對照品共9份，精密稱定，分成高、中、低3組，按注射液處方加入輔料原液，用稀釋劑溶解并定量稀釋制成每1mL中約含鹽酸伊立替康0.8，1.0，1.2mg的溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液。取對照品溶液和供試品溶液適量，照2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。結果批號為120801，120802，120803的樣品中鹽酸伊立替康含量分別為標示量的100.3%，100.9%，

表1 鹽酸伊立登康回收率試驗結果（n＝9）

3 討論

將鹽酸伊立替康對照品溶液用稀釋劑稀釋至20μg／mL，于200～400 nm波長范圍進行紫外掃描，其最大吸收波長為255 nm，故確定檢測波長為255 nm。鹽酸伊立替康在干燥狀態下對光穩定，水溶液對光敏感［3］，因此溶液制備過程都需要在避光條件下進行。文獻［4］報道，采用HPLC法測定鹽酸伊立替康含量及有關物質，采用同一色譜條件可使主成分與7－乙基－10－羥基喜樹堿、7－乙基羥基喜樹堿有效分離。但近年來隨著研究的深入，鹽酸伊立替康已知的有關物質已達到7種，該色譜條件已無法滿足要求，需進行進一步研究，本試驗中建立了測定鹽酸伊立替康注射液中鹽酸伊立替康含量的HPLC法，該方法樣品峰形良好，保留時間合適，理論板數達到10000以上，可用于鹽酸伊立替康注射液的質量控制，適當調整后亦可用于血藥濃度的測定［5］，可滿足體內藥物分析的要求。

參考文獻：

［1］ Anonymous.Irinotecan － Antineoplastic［J］.Drugs Future，1996，21（3）：315－317.

［2］孫曉東，岳樹香，李建偉.鹽酸伊立替康臨床應用研究進展［J］.中國藥業，2011，20（14）：79－80.

［3］王世霞.伊立替康脂質體的制備及體內外行為研究［D］.河北：河北醫科大學，2008.

［4］李語如，顧 萍，蔣素梅，等.鹽酸伊立替康及注射液的HPLC測定［J］. 中國醫藥工業雜志，2001，32（6）：268－269.

［5］孫祥德，高 革，齊 偉，等.高效液相色譜法測定血漿中伊立替康的含量［J］. 中國現代應用藥學，2005，22（1）：57 －59.