高效液相色譜法測定消食健胃片中熊果酸含量

李 培，潘廣洲

（山東省聊城市藥品檢驗所，山東 聊城 252000）

消食健胃片由山楂、六神曲、麥芽、檳榔組方，具有開胃消食、 消積的功效，用于食欲不振、消化不良、脘腹脹滿。原質量標準收載于《衛生部藥品標準·中藥成方制劑（第十一冊）》，僅有性狀、鑒別等簡單的檢驗項目。為了更好地對產品進行質量控制，筆者對方中主要成分山楂所含熊果酸進行了含量測定研究。經過反復試驗，制訂了合理的供試品溶液制備方法及測定的色譜條件，建立了測定消食健胃片中熊果酸含量的高效液相色譜（HPLC）法，并制訂出合理的含量限度。

1 儀器與試藥

Agilent1200型高效液相色譜儀及色譜工作站（美國安捷倫公司）；TU－1901型紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；BT 125 D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。熊果酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110742－200313）；消食健胃片（山東臨清華威藥業有限公司，批號為20120112，20120114，20120118）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Ultimate LP－C18柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇 － 水 － 乙酸銨（85 ∶15 ∶0.4）；流速：1 mL ／min；檢測波長：218 nm，柱溫：30℃。在上述色譜條件下，理論板數按熊果酸計算應不低于3000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取減壓干燥至恒重的熊果酸對照品10.72mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（質量濃度為0.4288 g／L）。取本品10片，精密稱定，研細，稱取約0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加入乙醚適量，加熱回流提取5 h，提取液回收乙醚至干，殘渣用石油醚（30～60℃）浸泡2次，每次10mL，每次浸泡約5min，傾去石油醚，殘渣用甲醇溶解，轉移至25mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液［1］。缺山楂陰性對照品為山東臨清華威藥業有限公司按消食健胃片處方制備工藝去掉山楂制備而成，取陰性對照品約0.5 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：取陰性對照品溶液并進樣測定。色譜圖中，在熊果酸對照品峰處無峰出現，表明該方法提取時其他藥材對測定無干擾（圖 1）。

線性關系考察：分別精密量取熊果酸對照品貯備液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，置 10mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。按2.1項下色譜條件進樣10μL，記錄色譜圖，以進樣量（X，μg）與峰面積（Y）作回歸計算，得回歸方程Y＝659.13X－393.24，r＝0.9995（n＝6）。結果表明，熊果酸對照品進樣量在0.4288～4.288μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

重復性試驗：精密稱取同一批樣品（批號為20120112）6份，按2.2項下方法操作，制得供試品溶液，測定峰面積并計算熊果酸含量。結果熊果酸平均含量為每片0.992 7mg，RSD＝0.89%（n＝6），表明該法重復性良好。

穩定性試驗：精密稱取樣品（批號為20120112）1份，依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，8，10 h時測定峰面積。結果峰面積的RSD＝1.55%，表明供試品溶液在10 h內穩定性良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，連續進樣5次，每次10μL，記錄峰面積。結果峰面積的RSD＝0.71%（n＝5），表明方法精密度良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的樣品（批號為20120112）約0.5 g，精密稱定，分別精密加入一定量的熊果酸對照品貯備液，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，依法進樣測定含量，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 熊果酸加樣回收試驗結果（n＝6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液。取供試品溶液和對照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定含量。結果批號為20120112，20120114，20120118的每片樣品中熊果酸含量分別為0.9886，0.9785，0.9921 mg（n＝3）。結合 3 批樣品含量測定結果，考慮山楂藥材中熊果酸的含量及制備工藝中的其他影響因素，暫訂本品每片含山楂以熊果酸計，應不得低于0.75mg。

3 討論

試驗前用紫外分光光度計在200～320 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果熊果酸在207 nm波長處有最大吸收峰；當波長小于210 nm時為紫外末端吸收，在此波長范圍檢測雜質干擾較大，信噪比太小，基線不平穩。試驗發現，熊果酸在218 nm波長處有吸收，且在此波長處基線平穩，雜質對測定無干擾，適合含量測定，因此選擇218 nm為檢測波長。

通過大量試驗證實，流動相的選擇極其重要［1］。當選擇乙腈時，由于極性較大，使熊果酸與后面的雜質峰分離不理想；改用甲醇并加入乙酸銨后，分離效果有所變化；當調節甲醇－水－乙酸銨比例為85∶15∶0.4時，熊果酸與后面雜質的分離度最理想。

本試驗中建立了測定消食健胃片中熊果酸含量的HPLC法，方法操作簡便、結果準確、靈敏度高、重復性好、回收率高，可作為控制消食健胃片質量的有效方法。

參考文獻：

［1］丁建寶，格日勒，張建民.HPLC法測定山楂精降脂片中熊果酸的含量［J］. 中國中醫藥信息雜志，2006（8）：41 －43.