貝那普利防治順鉑腎損傷的實(shí)驗(yàn)研究

李淑貞，顧 宇，張?zhí)m蘭

（滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 滄州 061001）

腎素－血管緊張素系統(tǒng)（RAS）是一個復(fù)雜的多成分酶－激 素系統(tǒng)。除傳統(tǒng)內(nèi)分泌性RAS外，局部組織或細(xì)胞都可分泌這類活性物質(zhì)，這些局部分泌的RAS在機(jī)體損傷中可能較循環(huán)中的RAS起著更重要的作用。血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）是腎素－血管緊張素系統(tǒng)的重要效應(yīng)分子［1－2］。腎臟中腎素、血管緊張素的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血液，腎皮質(zhì)中AngⅡ的濃度是血漿中的1000倍［3］。本試驗(yàn)旨在觀察新一代血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）貝那普利對順鉑腎損傷大鼠腎功能和AngⅡ的影響，闡明其防治順鉑腎損傷的作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試藥與動物

貝那普利（商品名洛汀新，北京諾華制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20030514，規(guī)格為14 mg×14 s）臨用前用0.9%氯化鈉注射液配制成0.1 g／L的混懸液；順鉑針劑（濟(jì)南齊魯制藥有限公司，批號為610044CF，規(guī)格為每支10mg）臨用前用0.9%氯化鈉注射液配制成1 g／L的溶液。健康成年雄性 SD大鼠36只，體重180～200 g，河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號為SCXK（鄂）2004－2007。

1.2 模型建立及分組

將健康成年SD大鼠36只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常組、模型組、貝那普利組，各12只。參考文獻(xiàn)［4］，并根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，模型組、貝那普利組大鼠給予順鉑溶液（用0.9%氯化鈉注射液配制成1 g／L的溶液）5mg／kg尾靜脈注射，每周1次，連續(xù)3次，復(fù)制順鉑腎損傷模型；正常組用等量0.9%氯化鈉注射液尾靜脈注射。從第1次尾靜脈注射順鉑開始，按大鼠與人等效劑量折算方法，每天定時進(jìn)行藥物灌胃。貝那普利組給予貝那普利1mg／（kg·d）灌胃，正常組和模型組給予等量0.9%氯化鈉注射液灌胃，均每日1次，每次灌胃液體均按每100 g體重1mL計(jì)算。

1.3 檢測指標(biāo)及方法

試驗(yàn)期間，動物普通飼料喂養(yǎng)，自由攝食、飲水，6周后禁食不禁水12 h，收集24 h尿液測尿蛋白（24 h Upro）的含量；10%水合氯醛4mL／kg腹腔注射麻醉，股動脈取血4mL，檢測血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）的含量。取血完畢迅速取出其中1只腎臟，肉眼觀察大體情況后沿冠狀面切成兩半，一半放入10%多聚甲醛固定以備行HE、Masson、PAS染色；另一半腎臟放入液氮中保存待測腎組織AngⅡ含量。取液氮保存標(biāo)本100 mg，加預(yù)冷的0.9%氯化鈉注射液2mL，冰浴條件下勻漿，再將該勻漿液置于預(yù)冷的含3.0mmol／L乙二胺四乙酸二鈉、3.4mmol／L 8－羥基喹啉和3.2mmol／L二巰丙醇的試管中，煮沸10min，以3000 r／min的速率，4℃時離心10min，吸取上清液，按照AngⅡ放免分析盒說明書測定AngⅡ的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（One－Way－ANOVA），檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05，若差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則進(jìn)一步使用q檢驗(yàn)行兩兩比較。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

在整個試驗(yàn)過程中，正常組大鼠精神狀態(tài)良好，皮毛光滑潤澤，緊貼身體，大便正常，進(jìn)食無異常，體重直線上升；模型組大鼠注射順鉑后當(dāng)日或次日開始出現(xiàn)少動閉眼、蜷臥拱背、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、攝食量明顯減少、糞便稀薄、皮毛凌亂、缺乏光澤、體重下降，貝那普利組大鼠也有類似改變，但程度較模型組輕，恢復(fù)亦較快。

2.2 對順鉑腎損傷大鼠血清BUN及Scr含量的影響結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血清BUN及Scr含量比較（ ± s，n＝12）

表1 各組大鼠血清BUN及Scr含量比較（ ± s，n＝12）

注：與正常組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05。

組別正常組模型組貝那普利組BUN（mmol／L）5.31±0.8922.70±5.98*16.70±4.40△Scr（μmol／L）108.08±11.94142.13±12.92*123.18±14.18△

2.3 對順鉑腎損傷大鼠24 h Upro含量的影響

模型組大鼠 24 h Upro含量為（14.59±3.97）mg／L，明顯高于正常組的（8.32±2.06）mg／L（P＜0.01）；經(jīng)用藥干預(yù)，貝那普利組大鼠 24 h Upro含量為（10.39±3.33）mg／L，明顯低于模型組的含量（P＜0.05）。見圖 1。

圖1 各組大鼠24 h Upro含量

2.4 對順鉑腎損傷大鼠腎組織AngⅡ含量的影響

模型組大鼠腎組織 AngⅡ含量為（1.18 ±0.13）ng／mg，顯著高于正常組的（0.69±0.17）ng／mg（P＜0.01）；經(jīng)用藥干預(yù)，貝那普利組大鼠腎組織 AngⅡ含量為（0.89±0.18）ng／mg，明顯低于模型組的含量（P＜0.01）。見圖2。

圖2 各組大鼠腎組織AngⅡ的含量

2.5 HE，M asson，PAS 染色結(jié)果

光鏡下，模型組大鼠部分腎小球輕度充血，近曲小管上皮細(xì)胞明顯水腫，部分小管上皮細(xì)胞不同程度壞死、脫落，管腔內(nèi)有大量蛋白管型，腎小管萎縮，間質(zhì)水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤、纖維母細(xì)胞增生。PAS染色顯示，部分腎小管基底膜皺縮，不規(guī)則增厚。Masson染色可見膠原纖維呈條索狀增生，貝那普利組病理改變明顯減輕，正常組大鼠腎小球和腎小管及間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常。

3 討論

臨床研究表明，順鉑的療效與劑量密切相關(guān)。由于其主要通過腎臟排泄，對腎臟有明顯的毒性［5］，且毒副作用隨劑量增加而增加，在高劑量或連續(xù)給藥時，可造成腎小管不可逆性損傷。連續(xù)3次尾靜脈注射順鉑后，大鼠24 h Upro及血清中BUN、Scr含量明顯升高，光鏡下近曲小管上皮細(xì)胞明顯水腫、壞死、脫落，腎小管萎縮，管腔內(nèi)有大量蛋白管型，間質(zhì)水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤，膠原纖維呈條索狀、網(wǎng)狀增生，表明順鉑腎損傷模型復(fù)制成功。

許多大規(guī)模的前瞻性研究表明，ACEI能夠通過阻斷RAS對腎臟起保護(hù)作用，顯著減慢了糖尿病和非糖尿病患者腎衰竭的進(jìn)展［6－7］，其保護(hù)機(jī)制依賴于其血流動力學(xué)的影響，即降壓作用和非降壓作用。ACEI能抑制 RAS，同時激活激肽 －緩激肽系統(tǒng)（KKS），發(fā)揮雙系統(tǒng)保護(hù)作用，能有效抑制AngⅡ的產(chǎn)生，使出球小動脈擴(kuò)張，灌注壓降低，尿蛋白減少。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，貝那普利能減輕腎臟病理改變，降低血清BUN，Scr，Upro／24 h和腎組織AngⅡ含量水平，提示貝那普利能通過抑制AngⅡ的產(chǎn)生，對腎臟起保護(hù)作用，顯著減慢順鉑腎損傷的進(jìn)展。

參考文獻(xiàn)：

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