HPLC法測定金菊利咽顆粒中綠原酸的含量

許佩蘭

（河南省安陽市中醫院，河南 安陽 455000）

HPLC法測定金菊利咽顆粒中綠原酸的含量

許佩蘭

（河南省安陽市中醫院，河南 安陽 455000）

目的建立金菊利咽顆粒中綠原酸的含量測定方法，提高金菊利咽顆粒的質量標準。方法通過以綠原酸為考察指標，采用HΡLC法測定金菊利咽顆粒中綠原酸的含量。結果采用HΡLC法測定綠原酸含量作為定量控制的指標，可有效控制金菊利咽顆粒的質量。暫定本品每袋含金銀花以綠原酸（C16H18O9）計，不得少于13 mg。結論該方法操作簡便，結果準確，靈敏度高，重現性好，方法學考察表明該方法準確可靠，可有效控制金菊利咽顆粒的質量。

金菊利咽顆粒；金銀花；綠原酸；HΡLC

金菊利咽顆粒系安陽市中醫院協定處方，由金銀花、野菊花、射干等組成。功效：清熱解毒，消腫利咽。用于慢性咽炎，咽喉疼痛等。經多年臨床應用，療效確切，為方便患者服用，特制成顆粒劑，并取得制劑批準文號（豫藥制字Z05050082）。為了保證制劑質量和臨床療效，采用高效液相色譜法對制劑中的金銀花以綠原酸為指標進行定量鑒別分析。有文獻報道野菊花[1]中含有綠原酸。筆者采用高效液相色譜法測定制劑中綠原酸含量，方法操作簡便，結果準確，靈敏度高，重現性好，方法學考察表明該方法準確可靠，可有效控制金菊利咽顆粒的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC-2010A高效液相色譜儀（島津，包括SΡD-10Avp紫外檢測器，CLASS-VΡ工作站）；賽多利斯BT125D分析天平；KQ-50B型超聲波提取器。

1.2 試藥：綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200413，供含量測定用）；金菊利咽顆粒（安陽市中醫院生產、提供，批號：20130301、20130302、20130303）；甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；磷酸（分析純）；水為重蒸餾水。

2 方法[2]與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（12∶88）[3-4]；流速：1.0 mL/min；檢測波長：327 nm[5]；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。此條件下綠原酸與其他組分達到基線分離，分離度R＞1.5。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的綠原酸對照品10.09 mg，置50 mL棕色量瓶中，加入50%甲醇溶液少許，超聲溶解，50%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，得對照品儲備液，再精密移取5 mL儲備液，置100 mL棕色量瓶中，50%甲醇溶液定容至刻度，即得對照品溶液（0.01009g/L）。

2.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項下的本品，研細，取約1 g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇40 mL，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz） 30 min，放冷，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

2.5 專屬性考察

2.5.1 陰性對照溶液的制備：按處方比例稱取除金銀花、野菊花以外的其余藥味，按制備工藝制成缺金銀花、野菊花的陰性樣品，按上述供試品制備方法制成缺金銀花、野菊花的陰性對照溶液。

2.5.2 陰性對照試驗：按上述色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，各進樣10 μL進行測定，結果見圖1。結果表明，在綠原酸相同保留時間處，供試品有色譜峰出現，陰性樣品無色譜峰出現，比較色譜圖可知方法專屬性較好，表明陰性樣品無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

2.6 線性關系考察

分別精密吸取2.2項下對照品溶液4、8、12、16、20μL注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積積分值（Y）對對照品的質量（X）進行線性回歸，得出回歸方程以及線性范圍。Y= 1.58×103X+2.43，r=0.9999。表明綠原酸進樣量在線性范圍0.04036～0.2018 mg范圍內峰面積與進樣量呈良好線性關系。

2.7 精密度試驗

在上述色譜條件下，精密進樣同一綠原酸對照品溶液10 μL，連續測定6次，記錄峰面積，計算RSD為0.42%，表明該方法精密度良好。

2.8 穩定性試驗

取樣品（批號：20130301）新配的供試品溶液，分別在0、4、8、12、16、20、24 h時進樣10 μL，測定綠原酸的峰面積，計算RSD為0.45%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.9 重現性試驗

取同一批號的樣品（批號：20130301）6份，按2.3項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，每份樣品精密吸取10 μL，按上述色譜條件，分別測定，記錄峰面積，計算RSD為0.80%，表明該方法重現性良好。

2.10 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量樣品（批號：20130301）約1g，共9份，精密加入綠原酸對照品儲備液（0.2018 g/L）0.5、0.5、0.5、0.6、0.6、0.6、0.7、0.7、0.7 mL，然后按2.3項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，并按2.4項下測定法進行綠原酸含量檢測，結果加樣回收率為99.3%～101.1%，計算RSD為1.43%，表明加樣回收率符合要求。

2.11 樣品測定

按正文含量測定方法對金菊利咽顆粒三批樣品進行測定，結果見表1。

表1 三批樣品綠原酸含量測定結果表

根據上述測定結果，結合考慮金銀花藥材中綠原酸的含量，暫定本品每袋含金銀花以綠原酸（C16H18O9）計，不得少于13 mg。

3 結 論

采用高效液相色譜法測定綠原酸含量作為定量控制的指標，該方法操作簡便，結果準確，靈敏度高，重現性好，方法學考察表明該方法準確可靠，可有效控制金菊利咽顆粒的質量。

4 討 論

綠原酸為咖啡酸奎尼酸酯，因而既能被酸也能被堿催化水解。陳鋼等[6]研究表明，其水溶液在pH 3.0時最穩定。顧利紅[7]研究日光和溫度對綠原酸穩定性影響發現，綠原酸對照品置棕色量瓶中，在冰箱（2 ℃）保存16 d，基本穩定。在無色量瓶中，室溫（25～30 ℃）放置時最不穩定，易分解，隨著放置時間的增加，綠原酸濃度不斷降低。在本研究中采用測定綠原酸的含量為定量指標，結果表明其含量穩定，回收率高，重現性好，可有效的控制金菊利咽顆粒的質量。

[1] 袁學勤,遲靜波,胥云.HΡLC測定野菊花中綠原酸的含量[J].中成藥,2005,27(4):493-494.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:1084.

[3] 劉愛學,陳翠花,郭耀武.消癌平片中綠原酸的HΡLC法測定[J].西北藥學雜志,2005,20(2):56-57.

[4] 彭章明.HΡLC法測定細氈毛忍冬花中綠原酸的含量[J].西北藥學雜志,2004,19(6):257-258.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:205.

[6] 陳鋼,侯世祥,胡平等.金銀花提取物中綠原酸的穩定性研究[J].中國中藥雜志,2003,28(3):223-225.

[7] 顧利紅,朱品業.日光和溫度對綠原酸供試液穩定性的影響[J].中成藥,1999,21(11):16-17.

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1671-8194（2014）10-0061-02