高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒技術審評規范要點概述

北京市醫療器械檢驗所（0）李正

北京市藥品監督管理局醫療器械技術審評中心（100061）趙陽2 孫嶸3

高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）產品技術審評規范是北京市藥品監督管理局醫療器械技術審評中心2013年制定的一項技術審評規范，其作用在于指導北京地區體外診斷試劑注冊申報人的申報工作，同時規范技術審評工作。目前，該規范已在北京市食品藥品監督管理局網站上公開征求意見，并將于年內正式發布。

高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）產品技術審評規范是心腦血管相關生物指標系列技術審評規范制定工作的組成之一，該系列技術審評規范是我中心參與的國家863課題項目——心腦血管慢性損傷及急救指標等體外診斷試劑研制課題的子課題，主要目的是建立心腦血管損傷相關診斷試劑的質量評價標準，用以指導該類試劑的研制和評價工作。

心腦血管疾病是全球性的重大公共衛生問題，每年約有1700萬人死于心腦血管疾病。在我國，隨著人民生活水平的逐年提高，心腦血管疾病的發病率也明顯升高，嚴重威脅人們的生命健康。高密度脂蛋白膽固醇（HDL）由載脂蛋白、磷脂、膽固醇和少量脂肪酸組成，亦稱為a1脂蛋白。它是冠心病的保護因子，俗稱“血管清道夫”，有抵御斑塊形成的作用，是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，其含量與動脈管腔狹窄程度呈負相關。對高密度脂蛋白膽固醇的檢測，有助于判別高脂蛋白血癥，異常增高可見于原發性高HDL血癥，降低多見于心、腦血管病，肝炎，肝硬化等[1]。截止2013年11月，全國共有有效注冊證約170個（含國產、進口）。根據前期調研發現，該產品名稱多樣、性能及技術指標不統一，缺乏統一的評價標準，為了規范該產品的注冊申報及技術審評工作，特制定本規范。下面就規范中的重點問題進行簡要概述。

1 適用范圍

該規范適用于采用分光光度法原理，利用全自動、半自動儀器或分光光度計，在醫學實驗室進行高密度脂蛋白膽固醇定量檢驗所使用的臨床化學體外診斷試劑（盒）。干式高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）產品不在本文討論范圍之內。

2 試劑盒命名、組成及用途

2.1 試劑盒命名 試劑（盒）名稱由三部分組成：第一部分 被測物名稱：高密度脂蛋白膽固醇；第二部分 用途：測定試劑（盒）；第三部分 方法或原理：如直接法-選擇抑制法。

規范制定之前產品申報名稱方法學不統一，如有高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（一步法）、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（兩步法），現根據《臨床化學體外診斷試劑（盒）命名》行業標準報批稿對產品名稱進行了統一規范。

2.2 反應原理 使用直接法對人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇進行定量檢測的試劑（盒）。如直接法-選擇抑制法：血清中乳糜微粒（CM）、低密度脂蛋白（LDL）及極低密度脂蛋白（VLDL）在多聚陰離子及反應抑制劑作用下表面被遮蔽。HDL-C與表面活性劑、反應促進劑在膽固醇酶試劑的作用下參與Trinder反應而顯色，吸光度與標本中HDL-C濃度成正比。

2.3 產品的預期用途 本試劑（盒）用于體外定量測定人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇的含量。

3 產品的主要技術指標

本產品的性能指標主要參照GB/T26124-2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》、北京市食品藥品監督管理局技術審評規范《臨床化學體外診斷試劑（盒）產品技術審評規范》及《高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）》行業標準報批稿。

3.1 外觀 目測檢查，符合生產企業規定的正常外觀要求。

3.2 凈含量 用通用量具測量，液體試劑的凈含量應不少于標示值。

3.3 試劑空白吸光度 用試劑（盒）測試空白樣本，記錄試劑（盒）參數規定讀數點主波長下的吸光度值，試劑空白吸光度應＜0.05。（注：空白樣本可以是純水樣本、生理鹽水、零校準液等。）

3.4 分析靈敏度 用試劑（盒）測試已知濃度在（1.00～2.00）mmol/L的樣本，記錄在試劑（盒）規定參數下的吸光度差值。換算為1.00mmol/L的吸光度差值，測定1.00mmol/L樣本時，兩點終點法吸光度差值（ΔA）應＞0.04；兩點速率法吸光度差值（ΔA/min）應＞0.01。

3.5 線性范圍 用超出線性范圍上限的樣品和超出或等于線性范圍下限的樣品，混合成至少5個稀釋濃度（xi）。分別測試試劑盒，每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式計算線性回歸的相關系數（r）：

稀釋濃度（xi）代入求出線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差或絕對偏差。試劑盒至少在[0.20，2.50] mmol/L的線性范圍內分析性能應符合如下要求。

3.5.1 線性相關系數（r）應不小于0.995。

3.5.2 [0.20，2.50]mmol/L區間內，線性偏差應不超過±0.10mmol/L或不超過±10%。

3.6 精密度

3.6.1 重復性 根據文獻[2]參考值范圍，對該產品檢測時用兩個水平的血清樣品或質控樣品，濃度分別為（0.80±0.20）mmol/L和（1.50±0.50）mmol/L[3]，重復測試10次，分別計算測量值的平均值（）和標準差（s）。所得結果的變異系數（CV）應不大于4%。

3.6.2 批間差 用（1.50±0.50）mmol/L的血清樣品或質控樣品分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值（i=1，2，3），按以下公式計算相對極差（R）：

3.7 準確度 試劑（盒）測試可用于評價常規方法的有證參考物質（CRM）或其他公認的參考物質進行3次平行測定，計算測定結果的均值，以相對偏差來表示測定結果的不準確度，按以下公式分別計算相對偏差B，如果3次結果的相對偏差應不超過±10%，即判為合格。如果大于等于2次的結果不符合，即判為不合格。如果有1次結果不符合要求，則應重新連續測試20次，并分別按照公式計算相對偏差，如果大于等于19次測試結果的相對偏差應不超過±10%，即判為合格[4]。B%＝（M－T）/T×100%，式中：M為測試結果均值；T為標準物質標示值。［注：型式試驗時，可采用上述方法測試試劑（盒）的準確度。出廠檢驗時，根據企業實際質量控制情況，生產企業可以選擇以上檢驗方式，也可以使用具有溯源性的企業（工作）校準品或正確度質控物質進行準確度實驗，但企業每年應以型式檢驗的方式對產品的準確度進行驗證。］

3.8 穩定性 效期穩定性：試劑（盒）在規定的貯存條件下保存至有效期末，產品的性能應至少符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性、準確度和重復性的要求。

3.9 校準品和質控品（如適用） 若試劑盒配套校準品和質控品，應提供校準品溯源性說明及質控品定值說明。（注：校準品溯源應列出溯源圖，并描述不確定度的計算方法和限制范圍。質控品定值應采用不同實驗室賦值的方式。）

4 產品的臨床要求

試劑（盒）按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（試行）、《體外診斷試劑臨床研究技術指導原則》及《北京市第二類體外診斷試劑臨床試驗指導原則》進行臨床試驗。執行的基本原則至少包括以下幾個方面。

4.1 在兩家省級醫療衛生單位完成臨床研究。

4.2 “已有同種批準上市”的試劑（盒）應與已批準上市產品針對臨床樣本進行比對試驗。

4.3 臨床樣本的要求：綜合不同地區人種、流行病學背景、病原微生物的特性等因素選擇研究單位，癥狀典型和非典型的，一般臨床研究的總樣本數至少為200例。

4.4 如果申報的試劑產品同時適用于血清、血漿樣本。血清（或血漿）的試驗例數按照《體外診斷試劑臨床研究技術指導原則》要求的例數進行；同時，還要進行血清、血漿檢驗結果一致性的比對。

4.5 異常樣本、正常樣本應均勻分布，異常樣本量應不少于80例。

5 試劑（盒）說明書、標簽、包裝標識

5.1 試劑（盒）說明書 試劑（盒）說明書應當符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，需要注意以下內容。

5.1.1 產品名稱 通用名稱：如高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒（直接法－選擇抑制法）；商品名稱：與企業聲稱一致。英文名稱：high density lipoprotein cholesterol Assay Kit。

5.1.2 應說明試劑（盒）的包裝規格 不得多于企業標準中所列的包裝規格。

5.1.3 預期用途 本試劑（盒）用于體外定量測定人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇的含量。

5.1.4 臨床意義 高密度脂蛋白（HDL）具有抵御斑塊形成的作用，是一種抗動脈粥樣硬化的脂蛋白，它的含量與動脈管腔狹窄程度呈負相關[1]。（注：生產企業可根據自身產品情況編寫，如有新的臨床意義，應提供相應依據。）

5.1.5 檢驗原理 企業應根據自身產品的方法學，簡要說明反應原理或以化學方程式表達，內容至少包括主要反應物、主波長數以及酶促反應等相關信息。

5.1.6 主要組成成分 對于產品中包含的試劑組分應有名稱、數量、每一組分中的主要成分在反應體系中的比例或濃度，如果對于正確的操作很重要，應提供其生物學來源、活性及其他特性；對于試劑盒中含有校準品、質控品，說明主要組成成分及其生物學來源，注明校準品的定值及其溯源性，注明質控品的允許范圍。

5.1.7 應說明貯存條件及有效期。

5.1.8 應說明可適用儀器的名稱及型號。

5.1.9 應說明對樣本的要求，包括樣本采集過程中的注意事項，為保證樣本各組分穩定所必需的抗凝劑或保護劑，已知的干擾物、能夠保證樣本穩定的貯存、處理和運輸的方法。

5.1.10 說明 應說明檢驗方法，至少包括試劑配制、試驗條件、校準程序、校準間隔、質量控制程序、試驗結果的計算。

5.1.11 應有參考值范圍，并簡要說明確定的依據，如健康成年男性：1.16～1.42mmol/L；健康成年女性：1.29～1.55mmol/L。參考值范圍參考《全國臨床檢驗操作規程》（第3版），并經過對120例臨床樣本驗證獲得，并注明各臨床實驗室應建立自己的參考范圍區間。

5.1.12 應有檢驗結果的解釋，說明可能對試驗結果產生影響的因素。

5.1.13 應說明檢驗方法的局限性。說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結果產生偏離，并給出含有各干擾物質的最大量。如血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯會干擾檢測結果。若超出線性范圍可稀釋后測定，應明確最大稀釋比例。

5.1.14 應說明產品性能指標，并符合注冊產品標準的要求。

5.1.15 應說明必要的注意事項，如本品僅用于體外診斷；應該嚴格按照樣本要求進行操作，若該產品含有人源或動物源的物質時，應給出具有潛在感染性的警告說明等[2]。

5.1.16 注明引用的參考文獻。

5.1.17 注明生產企業，包括企業名稱、生產/注冊地址、聯系方式。

5.1.18 注明醫療器械生產企業許可證編號。

5.1.19 注明醫療器械注冊證書編號。

5.1.20 注明產品標準編號。

5.1.21 注明說明書批準日期及修訂日期。

5.2 外包裝標簽

5.2.1 生產企業名稱和地址。

5.2.2 試劑（盒）名稱。

5.2.3 批號：如試劑（盒）包含不同批號的組件時，外包裝的批號應該能夠保證每個組件的批號可從生產企業的生產記錄中溯源。

5.2.4 規格：應包含體積或復溶后的體積。

5.2.5 預期用途：如試劑（盒）名稱不能反映試劑（盒）的預期用途，應提供簡要的預期用途說明。

5.2.6 體外診斷用途。

5.2.7 儲存和處置條件。應提供在未開封狀態下可保證試劑、校準品和質控物質的穩定狀態的必要儲存條件；應規定影響穩定性的其他條件（如適用）；應規定產品處置時所采取的所有其他特殊措施（如適用）。

5.2.8 失效期。應明示在規定儲存條件下的失效期；失效期應以年、月，適當時以日表示；如僅給出年月，失效期應為指定月的最后一天；外包裝標簽上明示的失效期應為最早到期組件的失效期。

5.2.9 警告和預防措施。如體外診斷試劑（盒）被認為有危險性（如化學，放射性或生物危害性），外包裝應標示有適當的警示危險的文字或符號說明，YY/T 0316的要求適用；對于化學危害，如試劑（盒）沒有隨帶含有適當的危險和安全性說明的使用說明，則應在外包裝的標簽上進行說明[2]。

5.3 初始包裝標簽 如初始包裝同時也是外包裝，規定對外包裝標簽的要求也適用。初始包裝標簽上應提供如下信息：小標簽規定。如瓶標簽上可利用的空間太小以致于不能包括下述所需全部信息，則5.2.5、5.2.6和5.2.7項的信息可省略或刪除。①生產企業名稱或等同的商標或標志。②產品名稱。③批號。④規格。如質量，體積，復溶后的體積。⑤體外診斷用途。⑥儲存和處置條件。⑦失效期。⑧警告和預防措施。

6 其他相關要求

6.1 注冊單元劃分的原則 試劑（盒）的注冊單元應為單一試劑（盒），一個注冊單元可以包括不同的包裝規格。

6.2 出廠檢驗原則 每批試劑（盒）出廠檢驗至少進行以下幾項內容：外觀、裝量、試劑空白吸光度、準確度、批內重復性。

7 結語

本規范主要依據《醫療器械監督管理條例》、《體外診斷試劑注冊管理辦法》（試行）、《體外診斷試劑臨床研究技術指導原則》、《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》進行編寫。產品的主要技術指標參考了GB/T 26124-2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》及《高密度脂蛋白膽固醇》行業標準報批稿，在規范的制定過程中征求了如北京醫院、安貞醫院、煤炭總醫院等眾多臨床檢驗領域的專家意見，還征求了包括北京九強、利德曼、中生北控等生產企業的意見。

本文所介紹的規范已經用于指導和規范北京市高密度脂蛋白膽固醇產品的技術審評工作，幫助審評人員更深入地理解和掌握該類產品的反應原理、性能指標、包裝標識等內容，把握技術審評工作的基本要求和尺度，對產品安全性、有效性做出更全面的系統評價。同時，規范的實施也更有利于指導生產企業的注冊申報工作，促進產品安全有效上市。