HPLC測定香砂枳術丸中白術內酯Ⅰ和Ⅲ的含量

何培根　李志浩　劉菁

[摘 要] 目的：建立同時測定香砂枳術丸中白術內酯Ⅰ和Ⅲ含量方法。方法：采用DIONEX C18色譜柱（250mm×4.6mm，5?m），流動相：乙腈：甲醇：0.1%磷酸溶液（11：46：43），檢測波長為222nm，柱溫：35℃，流速為1.0mL·min-1。結果：白術內酯Ⅰ和Ⅲ分別在0.1～2.0?g·mL-1（γ=0.9997）和0.2～4.0?g·mL-1（γ=0.9998）濃度范圍內線性關系良好，平均加樣回收率分別為98.7%，98.0% ；RSD 分別為0.68%、1.15%。結論：本方法簡便，準確，重復性好，可用于該制劑的質量控制。

[關鍵詞] 香砂枳術丸；白術內酯Ⅰ；白術內酯Ⅲ；HPLC

中圖分類號：O657 文獻標識碼：B 文章編號：2055-5200（2014）02-064-03

香砂枳術丸為衛生部頒藥品標準收載之品種 [1]。由白術（Rhizoma Atractylodis Macrocephalae）、木香（Radix Aucklandiae）、枳實（Fructus Aurantii Immaturus）、砂仁（Fructus Amomi）等四味中藥所組成的復方中成藥制劑。出自《景岳全書》，具有健脾開胃，行氣消痞之功效。用于脾虛氣滯，脘腹痞悶，食欲不振，大便溏軟等癥。有實驗表明本制劑對不同 的胃腸機能狀態呈不同的作用，對胃腸運動具有調節作用：既能抑制新斯的明引起的胃腸運動亢進，又能改善阿托品所致的胃腸抑制。能顯著增加膽汁、胰液分泌，但對胃液分泌有顯著抑制作用，與甲氰咪呱有協同作用。能顯著增加胰脂肪酶活性，顯著抑制胃蛋白酶活性[2]。白術在本方中用量較大，具有健脾益氣、燥濕利水之功效，主要用于脾虛食少、痰飲等癥。其所含的內酯類化合物具有調節胃腸運動、提高免疫力和促進營養物質吸收的功能[3-4]。筆者參考有關文獻，采用高效液相色譜法測定白術內酯Ⅰ和白術內酯Ⅲ的含量，可提高本制劑的質量標準，確保臨床療效。

1 儀器與試藥

DIONEX液相色譜儀（Chemeleon色譜工作站，UV檢測器），島津AEU-210型電子天平（d=0.1mg，日本島津）；KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器廠）；白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ對照品（西安交通大學藥物分析工程中心提供，純度99.6%），甲醇，乙腈（色譜純，Fish公司），水為去離子水，其他試劑均為分析純。香砂枳術丸（北京同仁堂股份有限公司，規格：10.0g/袋）。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

分別取經減壓干燥器干燥至恒重的白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.002mg白術內酯Ⅰ和每1mL含0.004mg白術內酯Ⅲ的溶液，分別吸取上述兩種對照品溶液各5mL至10mL量瓶中，搖勻，即得混合對照品溶液。

2.2 供試品溶液及陰性對照溶液的制備

取本品5袋，除去包衣，研細，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，浸漬1h，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過（0.45?m微孔濾膜），作為供試品溶液。按上述方法制得不含白術的陰性對照溶液。

2.3 色譜條件

采用DIONEX C18（250mm×4.6mm ，5?m）色譜柱；流動相：乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（46：11：43）[5-10]；檢測波長222nm，流速：1.0mL·min-1；柱溫：35℃；進樣量：10?L；在此色譜條件下，兩峰理論塔板數不小于3000。色譜圖見圖1。

2.4 標準曲線與線性范圍

分別精密吸取混合對照品儲備溶液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0mL置10mL量瓶中，甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，分別取10?L注入液相色譜儀，測定，以濃度對峰面積積分值進行線性回歸，線性方程分別為：白術內酯Ⅰ：Y=62.473X+0.1467，r=0.9997；白術內酯Ⅲ：Y=59.46X-0.2213，r=0.9998，結果表明白術內酯Ⅰ在0.1～2.0?g·mL-1；白術內酯Ⅲ在0.2～4.0?g·mL-1濃度范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取混合對照品溶液，按上述色譜條件，連續進樣6次，測得峰面積的RSD為1.31%、1.47%。

2.6 穩定性試驗

吸取“2.2”項下的供試品溶液，室溫下分別在0，2，4， 8，12h測定峰面積積分值，結果RSD分別為1.62%、1.83%，處理后的樣品溶液在12h內穩定。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品（批號20111206）5份，按“2.2”項下的方法制成供試品溶液，分別進樣測定，計算其平均含量分別為0.024、0.047mg/g，RSD為1.87%和1.18%。結果見表1。

2.8 加樣回收率試驗

取6份已知含量（批號20111206，白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ分別為0.024、0.047mg/g）的香砂枳術丸約0.5g，精密加入混合對照品溶液12mL，依法制備供試品溶液，在選定的色譜條件下進樣并計算回收率，結果見表2。

2.9 樣品測定

將制備好的樣品在高效液相色譜儀上測定含量，結果見表3。

表3 樣品測定結果（n=3）

批號 白術內酯Ⅰ（mg/g） 白術內酯Ⅲ（mg/g）

20111206 0.047 0.024

20111218 0.045 0.023

20120104 0.046 0.023

20120115 0.052 0.028

20120124 0.046 0.024

3 討論

3.1 流動相的選擇

曾采用不同流動相系統，但該兩種白術活性成分均有較寬色譜峰形，塔板數也很低，拖尾明顯，定量分析誤差較大。為了能準確分析測定，對不同流動相比例和溶液pH值進行調整，流動相用甲醇-乙腈混合作為有機相，兩者的色譜得到明顯改善，再用0.1%磷酸改變流動相pH值范圍，調整比例為乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（11：46：43）兩者色譜峰與雜質峰能較好分開。而當流動相中不添加磷酸溶液時白術內酯I色譜峰為一平頭峰，且峰寬超過2min。因此確定本系統作為流動相系統。

3.2 提取方法的選擇

分別考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯等提取溶劑，提取方式考察了超聲、回流等，提取時間分別考察了20min、30 min、1 h，提取次數分別為1次、2次，均進行單因素實驗。結果，甲醇超聲30 min 1次即可提取完全（說明：在“2.2 供試品溶液及陰性對照溶液的制備”中提到供試品溶液的制備方法為“超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30min”，即規定了超聲處理的時間和次數），與回流提取相比結果相差很小，為節約提取時間，提高實驗效率，確定用甲醇超聲提取作為提取方法。

參 考 文 獻

[1] 衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準：中藥成方制劑：第一冊[S].WS3-B-0114-89，1998：116.

[2] 譚毓治，胡因銘，趙詩云，等.香砂枳術丸對消化系統的藥理作用[J].中藥藥理與臨床，1992，8（3）：9-11.

[3] 李偉， 文紅梅， 崔小兵， 等. 白術的化學成分研究 [J]. 中草藥， 2007， 38（10）： 1460-1462.

[4] 宿廷敏，王敏娟，阮時寶.白術的化學成分及藥理作用研究概述[J].貴陽醫學院學報（自然科學版）：2008，3（2）：32-35.

[5] 李偉，文紅梅，張愛華，等.白術質量標準研究I—HPLC法測定2種白術內酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2001，21（3）：170-172.

[6] 李志浩，瞿京紅，劉菁，等.高效液相色譜法測定固本咳喘片中白術內酯I和白術內酯Ⅲ 的含量[J].湖北中醫藥大學學報，2011，13（4）：33-35.

[7] 李志浩，李鵬，朱雪松，等.反相高效液相色譜法測定白術茯苓顆粒中白術內酯I與白術內酯Ⅲ含量[J].醫藥導報，2010，29（5）：662-663.

[8] 李鵬，陳琴華，李志浩，等.超聲法提取白術中白術內酯Ⅰ和Ⅲ的正交實驗研究[J].中藥材，2009，32（10）：1615-1618.

[9] 傅春升， 楊培民. 麩炒白術的質量研究[J]. 中成藥，2007，29（1）：92-95.

[10] 陳琴華，李鵬，何婧，等. 白術飲片HPLC指紋圖譜研究[J]. 中藥材，2009，32（1）：35-38.

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3 討論

3.1 流動相的選擇

曾采用不同流動相系統，但該兩種白術活性成分均有較寬色譜峰形，塔板數也很低，拖尾明顯，定量分析誤差較大。為了能準確分析測定，對不同流動相比例和溶液pH值進行調整，流動相用甲醇-乙腈混合作為有機相，兩者的色譜得到明顯改善，再用0.1%磷酸改變流動相pH值范圍，調整比例為乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（11：46：43）兩者色譜峰與雜質峰能較好分開。而當流動相中不添加磷酸溶液時白術內酯I色譜峰為一平頭峰，且峰寬超過2min。因此確定本系統作為流動相系統。

3.2 提取方法的選擇

分別考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯等提取溶劑，提取方式考察了超聲、回流等，提取時間分別考察了20min、30 min、1 h，提取次數分別為1次、2次，均進行單因素實驗。結果，甲醇超聲30 min 1次即可提取完全（說明：在“2.2 供試品溶液及陰性對照溶液的制備”中提到供試品溶液的制備方法為“超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30min”，即規定了超聲處理的時間和次數），與回流提取相比結果相差很小，為節約提取時間，提高實驗效率，確定用甲醇超聲提取作為提取方法。

參 考 文 獻

[1] 衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準：中藥成方制劑：第一冊[S].WS3-B-0114-89，1998：116.

[2] 譚毓治，胡因銘，趙詩云，等.香砂枳術丸對消化系統的藥理作用[J].中藥藥理與臨床，1992，8（3）：9-11.

[3] 李偉， 文紅梅， 崔小兵， 等. 白術的化學成分研究 [J]. 中草藥， 2007， 38（10）： 1460-1462.

[4] 宿廷敏，王敏娟，阮時寶.白術的化學成分及藥理作用研究概述[J].貴陽醫學院學報（自然科學版）：2008，3（2）：32-35.

[5] 李偉，文紅梅，張愛華，等.白術質量標準研究I—HPLC法測定2種白術內酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2001，21（3）：170-172.

[6] 李志浩，瞿京紅，劉菁，等.高效液相色譜法測定固本咳喘片中白術內酯I和白術內酯Ⅲ 的含量[J].湖北中醫藥大學學報，2011，13（4）：33-35.

[7] 李志浩，李鵬，朱雪松，等.反相高效液相色譜法測定白術茯苓顆粒中白術內酯I與白術內酯Ⅲ含量[J].醫藥導報，2010，29（5）：662-663.

[8] 李鵬，陳琴華，李志浩，等.超聲法提取白術中白術內酯Ⅰ和Ⅲ的正交實驗研究[J].中藥材，2009，32（10）：1615-1618.

[9] 傅春升， 楊培民. 麩炒白術的質量研究[J]. 中成藥，2007，29（1）：92-95.

[10] 陳琴華，李鵬，何婧，等. 白術飲片HPLC指紋圖譜研究[J]. 中藥材，2009，32（1）：35-38.

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3 討論

3.1 流動相的選擇

曾采用不同流動相系統，但該兩種白術活性成分均有較寬色譜峰形，塔板數也很低，拖尾明顯，定量分析誤差較大。為了能準確分析測定，對不同流動相比例和溶液pH值進行調整，流動相用甲醇-乙腈混合作為有機相，兩者的色譜得到明顯改善，再用0.1%磷酸改變流動相pH值范圍，調整比例為乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（11：46：43）兩者色譜峰與雜質峰能較好分開。而當流動相中不添加磷酸溶液時白術內酯I色譜峰為一平頭峰，且峰寬超過2min。因此確定本系統作為流動相系統。

3.2 提取方法的選擇

分別考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯等提取溶劑，提取方式考察了超聲、回流等，提取時間分別考察了20min、30 min、1 h，提取次數分別為1次、2次，均進行單因素實驗。結果，甲醇超聲30 min 1次即可提取完全（說明：在“2.2 供試品溶液及陰性對照溶液的制備”中提到供試品溶液的制備方法為“超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30min”，即規定了超聲處理的時間和次數），與回流提取相比結果相差很小，為節約提取時間，提高實驗效率，確定用甲醇超聲提取作為提取方法。

參 考 文 獻

[1] 衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準：中藥成方制劑：第一冊[S].WS3-B-0114-89，1998：116.

[2] 譚毓治，胡因銘，趙詩云，等.香砂枳術丸對消化系統的藥理作用[J].中藥藥理與臨床，1992，8（3）：9-11.

[3] 李偉， 文紅梅， 崔小兵， 等. 白術的化學成分研究 [J]. 中草藥， 2007， 38（10）： 1460-1462.

[4] 宿廷敏，王敏娟，阮時寶.白術的化學成分及藥理作用研究概述[J].貴陽醫學院學報（自然科學版）：2008，3（2）：32-35.

[5] 李偉，文紅梅，張愛華，等.白術質量標準研究I—HPLC法測定2種白術內酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2001，21（3）：170-172.

[6] 李志浩，瞿京紅，劉菁，等.高效液相色譜法測定固本咳喘片中白術內酯I和白術內酯Ⅲ 的含量[J].湖北中醫藥大學學報，2011，13（4）：33-35.

[7] 李志浩，李鵬，朱雪松，等.反相高效液相色譜法測定白術茯苓顆粒中白術內酯I與白術內酯Ⅲ含量[J].醫藥導報，2010，29（5）：662-663.

[8] 李鵬，陳琴華，李志浩，等.超聲法提取白術中白術內酯Ⅰ和Ⅲ的正交實驗研究[J].中藥材，2009，32（10）：1615-1618.

[9] 傅春升， 楊培民. 麩炒白術的質量研究[J]. 中成藥，2007，29（1）：92-95.

[10] 陳琴華，李鵬，何婧，等. 白術飲片HPLC指紋圖譜研究[J]. 中藥材，2009，32（1）：35-38.