原發(fā)免疫性血小板減少性紫癜的遺傳學(xué)研究進(jìn)展＊

徐顏美，鄧立彬綜述，王小中△審校

（1.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 330006；2.南昌大學(xué)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究院 330006）

原發(fā)免疫性血小板減少性紫癜（primary immune thrombocytopenic，ITP）是一種獲得性自身免疫性疾病，主要由血小板生成減少和血小板破壞增多引起，臨床表現(xiàn)為全身皮膚黏膜及內(nèi)臟出血。目前，研究廣泛認(rèn)為遺傳因素在ITP發(fā)病過(guò)程中起至關(guān)重要的作用，但其具體分子機(jī)制仍不清楚。最新流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示ITP的家族發(fā)病率為2.57%（12／466）。基于樣本量和研究方法的局限，既往研究大多采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR－RFLP）和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）等方法從基因和蛋白水平尋找ITP致病因素。迄今為止，研究者發(fā)現(xiàn)至少63種基因與ITP存在關(guān)聯(lián)，為深入闡釋其發(fā)病機(jī)制提供了重要線索。本文主要從免疫和DNA甲基化兩個(gè)方面對(duì)ITP的遺傳學(xué)研究進(jìn)展進(jìn)行簡(jiǎn)要綜述。

1 免疫相關(guān)基因

ITP是一種自身免疫性疾病，因此免疫方面相關(guān)基因成為研究ITP遺傳的重點(diǎn)。研究主要集中在細(xì)胞因子、分化抗原簇、Fcγ受體及人類白細(xì)胞抗原（HLA）等方面的基因。

1.1 細(xì)胞因子

1.1.1 白細(xì)胞介素（interleukin，IL） IL由淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，主要對(duì)T、B細(xì)胞的成熟、活化及其生物學(xué)功能的調(diào)節(jié)起作用。IL－1參與B淋巴細(xì)胞整個(gè)發(fā)育過(guò)程。研究報(bào)道IL－1RN VNTR和IL－2－330多態(tài)性與巴西人群ITP有顯著性相關(guān)，IL－1RA A1／A2多態(tài)性與土耳其ITP有關(guān)聯(lián)［1－2］，而IL－1β（－511C／T和＋3953T／C）多態(tài)性與日本ITP人群的關(guān)聯(lián)結(jié)果不一致，結(jié)果提示IL－1可能是ITP的致病基因之一，但仍需要進(jìn)一步研究證實(shí)［3］。IL－3參與巨核細(xì)胞發(fā)育成熟全過(guò)程，直接影響血小板生成。IL－4、IL－6、IL－10主要由 Th2細(xì)胞產(chǎn)生，通過(guò)調(diào)控Th1／Th2極化參與ITP發(fā)病機(jī)制。Wu等［4］報(bào)道IL－4intron3和IL－10（－627）基因多態(tài)性與兒童慢性ITP存在顯著關(guān)聯(lián)，與IL－6無(wú)關(guān)。然而，Chen等［5］發(fā)現(xiàn)IFN－γ＋874A／T和IL－4intron 3VNTR多態(tài)性與中國(guó)ITP人群無(wú)關(guān)。因此，IL－4intron3基因多態(tài)性與中國(guó)ITP的關(guān)聯(lián)性仍有爭(zhēng)議。

1.1.2 其他細(xì)胞因子 Ruchira等［6］應(yīng)用全基因組DNA芯片對(duì)ITP進(jìn)行基因表達(dá)譜分析，發(fā)現(xiàn)ITP組IFN基因表達(dá)增高，提示IFN基因異常可能引起ITP致病。Pehlivan等［2］對(duì)多種細(xì)胞因子與土耳其ITP的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)TGF－β（codon10）TT基因型頻率在病例組顯著降低（P＝0.016），TNF－α（－308）AG基因型和IFN－γ（＋874）TT基因型頻率顯著增高（P＜0.05），提示以上細(xì)胞因子在ITP發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。

1.2 分化抗原簇（cluster of differentiation，DC） CD分子中CD70或CD11a有助于T、B淋巴細(xì)胞生存，從而間接增強(qiáng)ITP患者血小板破壞的功能。研究發(fā)現(xiàn)ITP組CD70和CD11a mRNA水平顯著高于健康組。有研究認(rèn)為抑制CD47／SIRPα信號(hào)來(lái)調(diào)控血小板吞噬是ITP的發(fā)病機(jī)制之一［7］。CD41和CD61作為巨核細(xì)胞表面特異性標(biāo)記分子，在巨核細(xì)胞形成和血小板產(chǎn)生過(guò)程中起至關(guān)重要的作用。CD72是B細(xì)胞的抑制性受體，有文獻(xiàn)報(bào)道急性ITP患者CD72mRNA表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（P＝0.0296）［8］，提示CD72可能通過(guò)增強(qiáng)B細(xì)胞受體信號(hào)參與ITP發(fā)病。此外，CD86可能通過(guò)CD86／CD28共刺激途徑參與ITP發(fā)病機(jī)制。血小板表面Toll樣受體（TLRs）是新近發(fā)現(xiàn)的天然免疫受體，識(shí)別并結(jié)合病原微生物，激活信號(hào)傳導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)某些免疫效應(yīng)分子的表達(dá)。兒童ITP患者存在天然免疫的缺陷，由于某些未知機(jī)制使CD86表達(dá)增高，獲得性免疫應(yīng)答過(guò)強(qiáng)導(dǎo)致一系列細(xì)胞因子失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致ITP的發(fā)生。

1.3 FcγR相關(guān)的易感基因 研究表明由FcγR介導(dǎo)的抗血小板抗體致敏的血小板被巨噬細(xì)胞吞噬破壞為ITP致病的主要原因。在加拿大、埃及和澳大利亞等不同國(guó)家研究者發(fā)現(xiàn)FcγRⅡA－131H／R和FcγRⅢA－158F／V基因多態(tài)性與ITP有關(guān)聯(lián)［9－11］。然而，日本研究者表明 FcγRⅡA－131R／H 基因多態(tài)性與ITP無(wú)關(guān)，而FcγRⅢA－158F／F基因多態(tài)性與ITP存在弱相聯(lián)，且FcγRⅢA－158V／V基因多態(tài)性可能影響ITP的治療療效［12］。此外，有研究表明FCGR2C－ORF基因在自身免疫性疾病中過(guò)表達(dá)，且34%的急性ITP患者發(fā)現(xiàn)有開(kāi)放閱讀框ORF等位基因，提示FCGR2C－ORF通過(guò)活化和抑制免疫細(xì)胞的FcγR，從而導(dǎo)致自身免疫疾病的發(fā)生［13］。最近，我國(guó)研究者發(fā)現(xiàn)FcγRⅡB－232基因多態(tài)性與ITP存在顯著關(guān)聯(lián)（P＝0.024）［14］。基于以上研究結(jié)果的一致性提示FcγR相關(guān)的易感基因作為ITP最具潛力的候選基因，有望成為目靶基因應(yīng)用于ITP的診斷和治療。

1.4 HLA相關(guān)基因 早在1995年，中國(guó)阮長(zhǎng)耿院士就采用PCR－RFLP方法對(duì)HLA－DPB1等位基因和ITP的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行病例對(duì)照研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn) HLA－DPB1＊1301和 HLA－DPW2抗原純合子增強(qiáng)了ITP的易感性，而HLA－DPW2抗原雜合子可能對(duì)罹患ITP具有保護(hù)作用。隨后，Wang等［15］報(bào)道HLADRB1＊17與兒童ITP相關(guān)（P＜0.05）。此外，日本和埃及研究者均發(fā)現(xiàn)HLA－DRB1與ITP有顯著性關(guān)聯(lián)［16］。盡管有多項(xiàng)研究表明HLA－DRB1與ITP具有顯著性關(guān)聯(lián)，然而在北印第安ITP人群中卻發(fā)現(xiàn) HLA－DRB1與ITP無(wú)關(guān)，且 HLADRB1與類固醇激素治療療效也無(wú)關(guān)［17］。由于受HLA基因多態(tài)性、種族地域、樣本大小、實(shí)驗(yàn)方法等多種主客觀因素的影響，國(guó)內(nèi)外的研究報(bào)道結(jié)果不一致，但是也證實(shí)了HLA與ITP存在一定程度的關(guān)聯(lián)。

1.5 其他易感基因 B細(xì)胞活化因子（B cell activating factor，BAFF）是腫瘤壞死因子家族的一個(gè)配體，在B細(xì)胞生長(zhǎng)、抗體產(chǎn)生過(guò)程中起重要作用。BAFF過(guò)表達(dá)能破壞B細(xì)胞免疫耐受，導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。Emmerich等［18］發(fā)現(xiàn)高加索人群中急性ITP患者血清BAFF的水平顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01），且BAFF－871多態(tài)性基因頻率比正常組高，提示BAFF基因多態(tài)性與高加索人ITP發(fā)病有關(guān)。中國(guó)和埃及研究者也都證實(shí) BAFF－871C／T 與ITP有關(guān)聯(lián)［19－20］。以上研究顯示BAFF基因多態(tài)性與ITP的關(guān)聯(lián)在多個(gè)種族中得到驗(yàn)證，提示BAFF基因可能作為ITP的可靠致病基因之一。PTPN22是一種編碼在T細(xì)胞受體信號(hào)在傳播途徑上起調(diào)節(jié)作用的蛋白酪氨酸磷酸酶，主要存在于淋巴細(xì)胞內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)高加索ITP人群存在PTPN22 1858C／T突變［21］。中國(guó)研究者報(bào)道PTPN22 1123G＞C基因多態(tài)性頻率顯著性高于對(duì)照組（P＝0.034），其結(jié)果進(jìn)一步支持PTPN22基因作為一種常見(jiàn)的自身免疫性疾病基因。細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxic T lymphocyte－associated antigen－4，CTLA－4）是 T細(xì)胞上的一種跨膜受體，參與免疫反應(yīng)的負(fù)調(diào)節(jié)。盡管有研究報(bào)道CTLA－4exron1（49A／G）多態(tài)性與多種自身免疫性疾病有關(guān)聯(lián)，但在中國(guó)和高加索人群中這一結(jié)果未得到驗(yàn)證［22－23］。

2 DNA甲基化相關(guān)的易感基因

DNMT3B是一種DNA甲基化過(guò)程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)移酶，DNMT3B基因多態(tài)性影響DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的活性，從而引起一些疾病的發(fā)生。由于地域、種族等的差異，DNMT3B基因在不同種族中ITP的關(guān)聯(lián)結(jié)果不一致。中國(guó)研究表明，DNMT3B基因多態(tài)性與中國(guó)ITP無(wú)關(guān)［24］。Khorshied等報(bào)道DNMT3B－579TT基因型與埃及ITP有關(guān)，然而Shaheen等發(fā)現(xiàn)DNMT3B基因多態(tài)性與埃及兒童ITP無(wú)關(guān)，因此，DNMT3B多態(tài)性與埃及ITP的關(guān)聯(lián)性至今仍有爭(zhēng)議。最近，Pesmatzoglou等［25］在德國(guó)人群中發(fā)現(xiàn)DNMT3Brs2424913基因多態(tài)性與兒童ITP有關(guān)（P＝0.03）。

3 展 望

雖然許多研究者采用候選基因法對(duì)ITP進(jìn)行大量遺傳學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)許多有意義的致病基因，但由于研究方法局限和樣本量不足等缺陷，某些基因與ITP的關(guān)聯(lián)性結(jié)果在不同種族甚至同一種族間仍有很大的爭(zhēng)議。近年來(lái)隨著高通量技術(shù)的飛速發(fā)展，在全基因組水平上尋找復(fù)雜疾病的致病基因已成為國(guó)際研究的熱點(diǎn)，并且也取得了相當(dāng)顯著的成績(jī)，極大地促進(jìn)了人類遺傳學(xué)的發(fā)展。值得深思的是，迄今為止尚未有研究報(bào)道采用無(wú)偏移的全基因組關(guān)聯(lián)研究方法對(duì)ITP疾病進(jìn)行遺傳學(xué)分析。因此，為全面深入闡釋ITP病因?qū)W發(fā)病機(jī)制，使用可靠的無(wú)偏移的高通量技術(shù)手段在全基因組水平上尋找ITP致病基因迫在眉睫。

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