糖代謝及胰島素抵抗改善對(duì)2型糖尿病患者血清nesfatin－1水平的影響

劉云濤，簡(jiǎn) 磊，李建偉，黃 亮

（三峽大學(xué)仁和醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北宜昌443000）

nesfatin－1是由 OH－Ⅰ等［1］2006年在大鼠下丘腦發(fā)現(xiàn)的一種分泌性多肽，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其在抑制攝食及肥胖，調(diào)節(jié)糖代謝中發(fā)揮重要作用［2］。本研究比較健康志愿者和二型糖尿病（T2DM）患者血清nesfatin－1水平，并觀察二甲雙胍、格列美脲、飲食運(yùn)動(dòng)治療對(duì)T2DM患者血清nesfatin－1水平的影響，為闡明nesfatin－1在IR及T2DM發(fā)生和發(fā)展中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年5月至2012年11月本院門診、內(nèi)分泌科住院部患者，體檢中心體檢者的健康自愿者為研究對(duì)象。45例健康自愿者為對(duì)照組（A組），其中，男24例，女21例，年齡（58.12±6.54）歲；T2DM 組139例（均符合1999年WHO對(duì)T2DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)），其中，男73例，女66例，年齡（58.09±6.45）歲，分為3組：二甲雙胍治療的B組47例，其中，男24例，女23例，年齡（57.37±6.12）歲；格列美脲治療的C組48例，男26例，女22例，年齡（58.68±6.33）歲；飲食運(yùn)動(dòng)治療D組44例，其中，男23例，女21例，年齡（58.24±6.62）歲。入選者均排除T1DM、特殊類型糖尿病。通過血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)及潛血試驗(yàn)、胸片，肝、腎功能、腫瘤標(biāo)志物測(cè)定排除肝、腎功能不全、腫瘤、感染。在3個(gè)月內(nèi)未發(fā)生糖尿病酮癥酸中毒及其他急性并發(fā)癥。

1.2 方法 （1）臨床指標(biāo)測(cè)定：測(cè)量體質(zhì)量、身高、腰圍、臀圍。計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、腰臀比（WHR）、穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)。（2）藥物治療及干預(yù)：B組給予二甲雙胍（商品名：格華止，中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)）500mg／d飯后口服治療，如無(wú)不良反應(yīng)改為500mg飯后口服每天3次，療程12周。C組給予格列美脲片降糖，達(dá)到與B組同樣的糖化血紅蛋白下降幅度。B組與C組未使用其他降糖藥物及影響血糖的藥物，未使用降脂藥。D組給予嚴(yán)格的飲食控制及運(yùn)動(dòng)治療，達(dá)到與B組同樣的BMI下降幅度。未達(dá)到上述要求者未進(jìn)入本研究。（3）一般生化指標(biāo)測(cè)定：受試者禁食8～10h后于清晨抽取空腹肘靜脈血測(cè)（FPG）、血脂、HbA1C。糖化血紅蛋白用日本Arkray HA8160糖化血紅蛋白分析儀及其配套試劑檢測(cè)；血脂使用美國(guó)雅培Architect C8000全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。胰島素使用德國(guó)羅氏Cobas e411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)。B組在二甲雙胍治療后14周再次采血測(cè)定一般生化指標(biāo)。C組達(dá)到與B組同樣的HBA1C下降幅度后，D組達(dá)到與B組同樣的BMI下降幅度后再次采血測(cè)定一般生化指標(biāo)。（4）nesfatin－1測(cè)定：所有研究對(duì)象取空腹血樣，3 000r／min離心10min，分離血清，放置于－40℃冰箱低溫保存待檢，B組在二甲雙胍治療12周后同樣方法取血樣。C組達(dá)到與B組同樣的HBA1C下降幅度后，D組達(dá)到與B組同樣的BMI下降幅度后再次采血。nesfatin－1測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法，試劑盒購(gòu)自武漢優(yōu)尓生科技股份有限公司，批內(nèi)CV＜10%，批間CV＜12% 。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采取自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。兩組間各指標(biāo)比較用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，指標(biāo)間的關(guān)系判定采用直線相關(guān)分析及多元線性逐步回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 資料與臨床生化指標(biāo)的比較 A組與T2DM組性別、年齡、平均收縮壓（SBP）、平均舒張壓（DBPG）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；高密度脂蛋白膽固醇（HDL－L）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－L）、HbA1c、空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hBG）、空腹血清胰島素（Fins）、穩(wěn)態(tài)胰島素評(píng)價(jià)指數(shù)（HOMA－IR）A組與T2DM組中的各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。C組三酰甘油（TG）與A組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。B組TC與A組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。B組、D組BMI與A組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 血清nesfatin－1水平的比較 B、C、D組大于A組，分別為（1 795±657）、（1 563±642）、（1 772±624）pg／mL vs.（1 354±635）pg／mL，P＜0.05，見表1。

表1 4組臨床、生化指標(biāo)和nesfatin－1濃度比較±s）

表1 4組臨床、生化指標(biāo)和nesfatin－1濃度比較±s）

組別 例數(shù)（男／女，n） 年齡（歲） （kg／m2） WHR SBP（mm Hg）BMI（mm Hg） TG（mmol／L） TC（mmol／L）DBP 43 70.64±5.24 1.47±0.54 4.71±0.85 B組 47（24／23） 57.37±6.12 27.51±3.11a0.89±0.17 122.65±11.37 72.14±6.94 1.58±0.47 5.78±0.40a C組 48（26／22） 58.68±6.73 24.82±3.25 0.85±0.24 123.34±11.66 71.24±5.54 2.42±0.54a4.47±0.42 D組 44（23／21） 58.24±6.62 27.78±3.18a0.87±0.19 118.74±10.69 73.44±6.24 1.50±0.4 A組 45（24／21） 58.12±6.54 24.14±2.74 0.82±0.28 119.74±12.4 4.55±0.84

續(xù)表1 4組臨床、生化指標(biāo)和nesfatin－1濃度比較s）

續(xù)表1 4組臨床、生化指標(biāo)和nesfatin－1濃度比較s）

a：P＜0.05，b：P＜0.01，與 A組比較。

組別 LDL（mmol／L）HDL（mmol／L）HbA1c（%）FPG（mmol／L）2hPG（mmol／L） （mU／L） HOMA－IR nesfatin－1（pg／mL）Fins 1±2.02 8.66±2.63 2.51±2.24 1 354±635 B組 3.27±0.48a1.08±0.54a7.54±0.52b 8.78±1.74b 11.61±3.44b 11.94±2.01b 17.25±8.68b 1 795±657b C組 2.41±0.42 1.14±0.36a7.14±0.64b 8.66±1.43b 12.12±3.21b 12.23±2.22b 18.63±7.43b 1 563±642a D組 2.97±0.74a1.11±0.42a7.10±0.81b 8.61±1.57b 11.50±3.53b 12.67±2.34b 16.63±8.23b 1 772±624 A組 2.31±0.54 1.47±0.35 5.21±0.41 4.54±0.79 5.8 b

2.3 T2DM各組治療前后臨床特征的變化 B組血清nesfatin－1、WHR 、BMI、Fins、FPG、2hPG、HOMA－IR、FIns、HbA1c較治療前明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；C組血清nesfatin－1、FPG、2hPG、HbA1c較治療前明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），F(xiàn)ins較治療前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），BMI、HOMA－IR 較治療前差異 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；D組血清nesfatin－1、BMI、HOMA－IR較治療前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），F(xiàn)ins較治療前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），F(xiàn)PG、2hPG、HbA1c較治療前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。B組治療后血清nesfatin－1下降幅度最大（B、C、D 3組治療前后血清nesfatin－1水平依次為（1 795±657）mg vs.（1 510±648）mg，（1 728±628）mg vs.（1 542±595）mg，（1 713±652）mg vs.（1 598±572）mg。

2.0 相關(guān)與回歸分析 血清nesfatin－1水平與FPG、2hPG、HbA1c、HOMA－IR、BMI呈顯著正相關(guān)（r＝0.516、0.629、0.487、0.507、0.551，P＜0.05）；與高密度脂蛋白（HDL－C）呈顯著負(fù)相關(guān)（r＝－0.527，P＜0.01）。經(jīng)二甲雙胍及飲食運(yùn)動(dòng)治療后T2DM患者血清nesfatin－1水平降低的程度與HOMAIR降低的程度正相關(guān)（r＝0.498、0.523，P＜0.05）。多元逐步回歸顯示 HOMA－IR、BMI、FPG是影響血清nesfatin－1水平的獨(dú)立相關(guān)因素。回歸方程為nesfatin－1＝16.562×BMI＋62.42×FPG＋32.513×HOMA－IR＋353.214，見表2。

表2 血清nesfatin－1水平影響因素的回歸分析

3 討 論

nesfatin－1分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、胰島β細(xì)胞、脂肪組織、胃內(nèi)分泌細(xì)胞。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大鼠高血糖時(shí)nesfatin－1增加，導(dǎo)致β細(xì)胞Ca2＋內(nèi)流增加，胰島素分泌增加，從而改善高血糖狀態(tài)［3］。并且已證實(shí)靜脈注射nesfatin－1能顯著改善db／db大鼠的高血糖狀態(tài)［4］，同時(shí)高胰島素也可刺激下丘腦室旁核nesfatin－1神經(jīng)元，導(dǎo)致nesfatin－1水平增加［5］。研究還證實(shí)nesfatin－1可通過AMPK／TORC2／AKT信號(hào)通路抑制肝糖異生，增加外周組織對(duì)葡萄糖的利用，并且nesfatin－1還可增加胰島素受體，從而增加胰島素敏感性［6］。本研究發(fā)現(xiàn)T2DM患者nesfatin－1水 平 明 顯 高 于 健 康 對(duì) 照 組，nesfatin－1 與 FPG、2hPG、HbA1c、BMI、HOMA－IR 呈正相關(guān)。這與 Zhang 等［7］研究相符，這些結(jié)果說(shuō)明nesfatin－1與血糖、胰島素抵抗關(guān)系密切。本研究2型糖尿病患者血清nesfatin－1水平增高是機(jī)體對(duì)高血糖、胰島素抵抗作出的防御性反應(yīng)，是一種代償性增高。

高血糖可使下丘腦室旁核nesfatin－1神經(jīng)元Ca2＋內(nèi)流增加［8］，這是高糖導(dǎo)致nesfatin－1增加的重要因素。本研究相關(guān)分析顯示血清nesfatin－1水平與FPG正相關(guān)，多元回歸分析表明FPG是影響血清nesfatin－1水平的獨(dú)立相關(guān)因素，進(jìn)一步說(shuō)明其在糖代謝中發(fā)揮了重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)在給予格列美脲片降低血糖但不影響B(tài)MI的情況下血清nesfatin－1水平下降，提示血清nesfatin－1水平與血糖水平的改善有重要關(guān)系。作者認(rèn)為，血糖下降，血清nesfatin－1水平升高的刺激因素減少，從而血清nesfatin－1水平下降。有研究發(fā)現(xiàn)空腹24h后nesfatin－1的前體蛋白－核組蛋白2（NUCB2）mRNA表達(dá)顯著下降，推測(cè)空腹nesfatin－1的產(chǎn)生應(yīng)減少，又因其抑制攝食及餐后高血糖及胰島素的刺激作用，故血清nesfatin－1水平在餐后2h應(yīng)高于空腹。但本研究發(fā)現(xiàn)血清nesfatin－1水平空腹與餐后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），原因可能刺激因素尚不足引起血清nesfatin－1水平增高。

實(shí)驗(yàn)證實(shí)肥胖大鼠nesfatin－1水平顯著升高，而給予大鼠第三腦室等部位注射nesfatin－1可減輕體質(zhì)量［2］。對(duì)人的研究表明，nesfatin－1基因在對(duì)抗肥胖、IR的發(fā)展中發(fā)揮了重要的保護(hù)作用，同時(shí)在能量代謝平衡中發(fā)揮了重要的作用［9］。本研究中，T2DM患者經(jīng)二甲雙胍改善IR后血清nesfatin－1水平明顯下降。在單純飲食、運(yùn)動(dòng)減輕體質(zhì)量、改善IR后但血糖改變不明顯的情況下血清nesfatin－1水平亦下降。證實(shí)血清nesfatin－1水平與肥胖、IR的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切。血清nes－fatin－1可增加胰島素敏感性［6］。作者既往對(duì)不同糖耐量人群的研究發(fā)現(xiàn)，隨著胰島素抵抗程度加重血清nesfatin－1水平增高［10］。在本研究中，T2DM患者血清nesfatin－1水平高于健康人群，與HOMA－IR、BMI正相關(guān)，并且回歸分析顯示HOMAIR、BMI分別是影響血清nesfatin－1水平的獨(dú)立相關(guān)因素，這說(shuō)明血清nesfatin－1水平可能與IR的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。T2DM患者經(jīng)改善IR治療后，血清nesfatin－1水平降低，相關(guān)分析表明經(jīng)改善IR治療后血清nesfatin－1水平降低的程度與HOMA－IR降低的程度呈正相關(guān)。這提示nesfatin－1與IR存在內(nèi)在聯(lián)系。作者認(rèn)為，T2DM患者nesfatin－1代償性增加以對(duì)抗IR，當(dāng)IR程度減輕，機(jī)體對(duì)nesfatin－1需求量減少，血清nesfatin－1水平下降。但確切機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。在二甲雙胍治療后血清nesfatin－1水平明顯下降，且下降幅度最大，認(rèn)為是血糖及胰島素抵抗均得到改善，機(jī)體對(duì)nesfatin－1需求量明顯減少所致。考慮到nesfatin－1具有抑制攝食的作用，飲食控制導(dǎo)致機(jī)體對(duì)nesfatin－1需要量減少，血清nesfatin－1水平在D組下降值得深入研究。

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