VPA聯(lián)合As2 O3對NB4細(xì)胞VEGF、NF-κB和MMP-9表達(dá)的影響

王陶然，張志華，王麗紅，趙 蕾，朱松巖，郝長來*

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液病科，河北承德067000;2.承德市中醫(yī)院超聲科，河北承德067000)

急性早幼粒細(xì)胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)是急性白血病的一種。As2O3是治療APL有效、安全的藥物。As2O3應(yīng)用早期可以誘導(dǎo)白細(xì)胞數(shù)急劇增長，導(dǎo)致白血病細(xì)胞的浸潤，增加了患者治療的危險性。有報道小劑量的As2O3誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)增 高［1－2］，VEGF能刺激腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMP)，VEGF 及 MMP 的表達(dá)受NF-κB的調(diào)控，共同作用促進(jìn)腫瘤的生長和浸潤。丙戊酸鈉(valproic acid，VPA)可通過調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，從而抑制白血病細(xì)胞浸潤、遷移［3］。本研究以NB4細(xì)胞為研究對象，觀察VPA聯(lián)合As2O3對VEGF、NF-κB 及MMP-9表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

NB4細(xì)胞系由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所王建祥教授惠贈。VPA(Sigma公司)，用滅菌注射用水稀釋為20 g/L和1 g/L的溶液，－20℃冰箱密閉避光保存，臨用前用不含血清和抗生素的RPMI 1640液稀釋至所需濃度。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

NB4細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，同時加入青霉素(100 U/mL)和鏈霉素(100 U/mL)，37 ℃、5%CO2，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對數(shù)增殖期細(xì)胞用于實驗。

1.3 實驗分組

將NB4細(xì)胞懸液調(diào)整為1×105個/mL，接種于培養(yǎng)瓶，每瓶10 mL，實驗組分別加入1.0 mmol/L VPA、1.0μmol/L As2O3和1.0 mmol/L VPA+1.0μmol/L As2O3，對照組不加藥。

1.4 MTI法檢測藥物抑制效應(yīng)

NB4細(xì)胞以104個/孔接種于96孔培養(yǎng)板中;加入不同濃度的藥物，并設(shè)3個復(fù)孔;37℃、5%CO2分別培養(yǎng) 24、48和 72 h后，加入 MTT溶液10μL/孔;繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，加入三聯(lián)液(10%SDS+5%異丁醇 +0.012 mol/L HCl)100μL/孔，于37℃放置過夜后，酶標(biāo)儀檢測各孔540 nm處吸光度值，另設(shè)空白對照組、細(xì)胞對照組和藥物實驗組，實驗數(shù)據(jù)為3次實驗結(jié)果的平均值。存活率(%)=實驗孔A值/對照組A值×100%。……