類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液抑制間充質(zhì)干細(xì)胞增殖

蔣志瓊，唐 中，譚 竟，吳碧華

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院1.老年科，2.檢驗(yàn)科，3.風(fēng)濕科，四川南充637000)

間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的非造血干細(xì)胞，不僅來源廣泛，體外培養(yǎng)增殖迅速，而且除具有支持體外造血、促進(jìn)體內(nèi)造血重建、組織損傷修復(fù)外還具有獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)作用［1］，為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)的治療帶來了新的應(yīng)用前景。但是，已有的研究［2］發(fā)現(xiàn)MSCs 在RA 動物模型體內(nèi)并沒有發(fā)揮預(yù)期的免疫負(fù)調(diào)節(jié)和損傷組織修復(fù)作用，這是否與RA 的炎性環(huán)境致MSCs 生物學(xué)特性改變有關(guān)呢?故對此作一相關(guān)研究。

1 材料與方法

1.1 材料:1)試劑:LG-DMEM 培養(yǎng)液(GIBCO 公司)，反轉(zhuǎn)錄試劑盒ReverTra Ace 組合型(成都博瑞克生物技術(shù)有限公司)，成人骨髓MSCs 成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基(廣州賽業(yè)生物科技有限公司)。2)標(biāo)本:骨髓標(biāo)本來源于14 例健康志愿者。關(guān)節(jié)液來源于活動期RA 患者，共5 例，病程均超過10年。標(biāo)本收集獲得本單位倫理委員會的審查批準(zhǔn)及本人的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 骨髓MSCs 的分離培養(yǎng):采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法，取P3 代用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 RA 關(guān)節(jié)液對MSCs 增殖的影響:將MSCs 以相同的數(shù)量(約4 000 個/孔)接種于96 孔板。實(shí)驗(yàn)組MSCs 培養(yǎng)液中分別加入10%、30%和50% 濃度的RA 關(guān)節(jié)液上清，對照組不加。培養(yǎng)5 d 后采用MTT 法檢測各孔吸光度值(absorbance，A 值)。

1.2.3 RA 關(guān)節(jié)液對MSCs 凋亡的影響:將MSCs 以相同的數(shù)量(約105個/孔)接種于6 孔板，實(shí)驗(yàn)組MSCs 培養(yǎng)液中加入50%濃度的RA 關(guān)節(jié)液上清，對照組不加。培養(yǎng)5 d 后消化收獲各組細(xì)胞，采用凋亡試劑盒流式細(xì)胞儀檢測各組凋亡情況。

1.2.4 RA 關(guān)節(jié)液對MSCs 成骨誘導(dǎo)的影響:將MSCs 以相同的數(shù)量(約105個/孔)接種于6 孔板。……